N-乙酰半胱氨酸对大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:通过观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响,探讨NAC对心脏重构的作用。方法:以培养的新生SD大鼠CFs为实验对象,给予不同浓度的NAC进行干预,48小时后用MTT比色法检测CFs增殖水平,用3H脯氨酸掺入法测定总胶原合成。结果:与对照组相比,不同浓度NAC作用下的CFs增殖水平和3H脯氨酸掺入量均比对照组低,且具有浓度依赖性(p<0.05)。结论:NAC能够抑制SD大鼠CFs增殖,并降低其胶原合成,因此NAC对心脏的病理性重构可能具有保护作用。     

AcSDKP对PDGF诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰（AcSDKP）对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用。方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;采用四甲基偶氮唑（MTT）法和^3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用^3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成。结果：PD3F在1～20ng／ml浓度范围内对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成均有促进作用。且随着PDGF浓度的增加,其促细胞增殖和胶原合成作用增强,并在10ng／ml浓度时PDGF的促增殖和胶原合成效应最强。在10^-10～10^-8mol／L浓度范围内,AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成均有抑制作用,并且在10叫mol／L时,AcSDKP抑制心脏成纤维细胞增殖和胶原合成作用最强。结论：AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维增殖和胶原合成均有明显抑制作用,这可能与其抗心脏纤维化的作用相关。     

N-乙酰半胱氨酸对犬心房快速起搏电重构的影响

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对犬心房快速起搏电重构的影响。方法：取16只犬,随机分为对照组和NAC干预组。NAC组按照15mg／kg／d剂量给予NAC口服6周时间。在犬右房置入电极,快速起搏右心房,诱发房颤并维持2小时。在起搏前后分别测定有效不应期（AERP）。结果：房颤后对照组AERP显著缩短,AERP频率适应性下降（P〈0．05）;而NAC组房颤前后AERP和AERP频率适应性均无明显变化。结论：在心房快速起搏致房颤2h的模型中,NAC对心房电重构具有明显的保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对犬心房快速起搏电重构的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对犬心房快速起搏电重构的影响。方法:取16只犬,随机分为对照组和NAC干预组。NAC组按照15mg/kg/d剂量给予NAC口服6周时间。在犬右房置入电极,快速起搏右心房,诱发房颤并维持2小时。在起搏前后分别测定有效不应期(AERP)。结果:房颤后对照组AERP显著缩短,AERP频率适应性下降(P<0.05);而NAC组房颤前后AERP和AERP频率适应性均无明显变化。结论:在心房快速起搏致房颤2h的模型中,NAC对心房电重构具有明显的保护作用。     

N-乙酰葡萄糖胺对人皮肤成纤维细胞透明质酸合成的影响

目的:研究外源性N-乙酰葡萄糖胺(NAG)对人皮肤成纤维细胞(HSF)透明质酸(HA)合成的影响,探索其作为护肤品成分的可能性。方法:分别用MTT、ELISA、改良Schales法检测不同NAG浓度下HSF的增殖、HA合成和分泌、对NAG的吸收率,RT-PCR测定NAG对HSF细胞透明质酸合成酶(HAS)3种同工酶HAS1、HAS2和HAS3 mRNA的影响。结果:MTT和改良Schales法结果显示,随NAG浓度升高,HSF细胞的增殖受抑制程度增加,对NAG的吸收率降低;ELISA结果表明,HSF细胞HA的合成对NAG呈剂量依赖性促进,5mmol/L浓度最佳;RT-PCR结果显示,HAS3 mRNA的表达在NAG浓度为3mmol/L和5mmol/L出现上调。结论:NAG可促进HSF细胞HA的合成和分泌,可能机制是NAG作为原料或者通过上调HAS3 mRNA表达水平来增加HAS活性从而提高HA的合成,提示NAG作为护肤品成分的可能。     

硫化氢对大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

本文旨在研究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用。以原代培养新生大鼠心脏成纤维细胞(neonatal ratcardiac fibroblasts,NRCFs)为研究对象,用不同浓度血管紧张素II(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)或胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)刺激NRCFs,建立NRCFs增殖模型。不同浓度硫氢化钠(NaHS,H2S的供体)处理该NRCFs增殖模型后,采用5’-溴-2’-脱氧尿嘧啶(5’-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU)掺入法检测NRCFs增殖情况,用2’,7’-二氯荧光素乙酰乙酸盐(2’,7’-di-chlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测细胞活性氧类(reactive oxygen species,ROS)水平。结果显示,较低浓度的NaHS(1×105mol/L)能促进FBS(2%、10%)对NRCFs的诱导增殖作用,但对Ang Ⅱ(1×107mol/L)所引起的NRCFs增殖的作用不明显,而较高浓度NaHS(5×105、1×104mol/L)...     

吸入乙酰半胱氨酸对博莱霉素导致的大鼠肺纤维化的影响

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)雾化吸入对于博莱霉素(BLM)导致的大鼠肺纤维化的影响作用。方法:取清洁SD大鼠100只,平均分为10小组,1小组为对照组,其余每3小组为一组,分别为模型组,防治组,治疗组,通过在大鼠气管中注入BLM的方法来制造大鼠肺纤维化模型,防治组在造模前的7天以及造模后的7天内,治疗组在造模后的7天内,分别给予NAC雾化吸入治疗。在成功造模后的第7天、14天、28天,每组处死1小组大鼠,取出病理组织,通过免疫组化方法来观察肺组织纤维化的程度。研究NAC对大鼠肺纤维化的影响。结果:与模型组对比,防治组和治疗组在纤维化程度上明显较轻(P0.05)。结论:吸入NAC对于博莱霉素导致的大鼠肺纤维化有明显的抑制作用,而且防治组疗效明显好于治疗组。既提前7天用药,效果更明显,大鼠获益更多。     

阿魏酸钠对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

探讨阿魏酸钠(SF)对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFb)增殖及胶原合成的影响.体外培养HSFb,MTT法计算SF的LC50及最佳药物时间后,分为空白对照组、SF干预组(高、中、低浓度分别为0.3、0.03、0.003 mg/mL),培养72 h后,在倒置显微镜和透射电镜下观察HSFb微观形态学变化;MTT法、Wester...     

N-乙酰半胱氨酸体外对流感病毒H1N1的抑制作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（N—acetylcysteine,NAC）在体外对流感病毒H1N1的抑制作用。方法采用MTT法、鸡胚接种法和免疫荧光法,观察NAC对流感病毒HlM的抑制作用。采用血球凝集试验、神经氨酸酶活性抑制试验和透射电镜负染技术,初步探讨NAC对流感病毒HlM的抑制机制。结果NAC在MDCK细胞上的最大无毒剂量是6．25mg／mL;流感病毒H1Nl在MDCK细胞上的半数致死感染浓度（TCID-50）为1012-2.25／100μ;在三种作用途径下（治疗性给药、预防性给药和直接灭活后给药）,NAC明显抑制了流感病毒HlNl对MDCK细胞的感染,细胞存活率分别为91．88％、93．21％、94．67％,在对照组,流感病毒H1N1感染后的细胞存活率为28．32％,两者相比差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫荧光结果显示,与病毒对照组形成的强特异性荧光相比,三种作用途径感染MDCK细胞后的特异性荧光明显减弱;鸡胚培养法的结果显示,NAC明显抑制了流感病毒H1N1在鸡胚内的增殖,实验组血凝效价低于1：2,对照组血凝效价为1：1024;神经氨酸酶活性抑制试验和透射电镜的结果显示,NAC能够明显抑制流感病毒川N1的神经氨酸酶活性,对流感病毒H1N1的病毒体结构也有明显的破坏作用。结论NAC在体外对流感病毒川N1有明显的抑制作用,其抑制机制可能与NAC对流感病毒血凝素和神经氨酸酶活性抑制及病毒体的直接破坏有关。     

蛋白聚糖和溶血磷脂酸对不同细胞周期心脏成纤维细胞生长的影响

本文研究了蛋白聚糖（pG和）和溶血磷酸（LGA）对培养的处于不同细胞周期的SD乳鼠心脏成纤维细胞生长的影响及PG对LPA生物学活性的调节食用。采用流式细胞术测定细胞所处的周期;3H-TdR参人法测定细胞的DNA合成。研究结果表明（1）培养至次融汇状态的乳鼠心脏成纤维细胞经低血清（0.4%FBS）饥饿培养48小时,G0/G1期细胞占88.5%;G0/G1期细胞经2%FBS刺激24小时,G2期细胞占91。7%。（2）PGs对G0/G1期和G2期的心脏成纤维细胞的DNA合成均有摄制作用。2.94-47.04μg/ml PGs对G0/G1期细胞DNA合成的摄制率为80%-93%对G2期的抑制率为13%-94%.(3)1-80μmol/L范围内,LPA以浓度依赖方式促进不同细胞周期的心脏成纤维细胞DNA合成增加,50μmol/L LPA诱导G0/G1期和G2期细胞DNA合成的增加分别为78%±和122%±21%。（4）10μmol/L LPA存在下,2.94%-47.04μg/ml PGs使G0/G1期细胞和G2期细胞的DNA合成分别下降为对照的36%±11%-15%±10%和91%±13%-3%±1%,说明PGs可以抑制LPA诱导的心脏成纤维细胞DNA合成.上述研究结果提示PGs和LPA对乳鼠心脏成纤维细胞G1期至S期的转换有重要的调节作用,并可能通过调节心脏成纤维细胞的生长影响心肌肥厚的形成和发展.     

Endocardial endothelial celsl stimulate proliferation and collagen synthesis of cardiac fibroblasts

Given that vascular endothelial cells play an important role in the modulation of vascular structure and function, we hypothesized that endocardial endothelial cells (EECs) may have a modulator role in regulating the cardiac interstitial cells. Endocardial endothelial cells were isolated from freshly collected pig hearts and cardiac fibroblasts were isolated from 3- to 4-d-old Wistar rats. Fibroblasts were cultured in the presence or absence of conditioned medium from EECs. Proliferation of cardiac fibroblasts was measured by the incorporation of [³H]-Thymidine and collagen synthesis was assayed by the incorporation of [³H]-proline. To determine the involvement of signaling mediators, in separate experiments, cardiac fibroblasts were incubated with BQ123 (selective ET_A receptor antagonist), PD142893 (nonselective ET_A/ET_B receptor antagonist), Bis-indolylmaleimide (PKC inhibitor), PD 098059 (MEK inhibitor), or neutralizing anti-transforming growth factor (TGF)-β-antibody. Endocardial endothelium-derived factors endothelin (ET)-1, TGF-β, and Angiotensin (Ang)-II in the conditioned medium were assayed by enzyme-linked immunosorbent assay using commercially available kits. We report here evidence that suggest that endocardial endothelial cells stimulate both proliferation and collagen synthesis of cardiac fibroblasts. The response seems to be mediated by endothelin through its ET_A receptor. Our results also indicate that protein kinase C (PKC) and mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathways are essential for the EEC-induced proliferation of cardiac fibroblasts.     

奥帕曲拉对内皮素-1诱导的心脏成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨奥帕曲拉（omapatrilat,OMA）对内皮素-1（ET-1）诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的干预作用及可能机制．方法：经差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为7组：对照组,ET-1组,OMA组,ET-1＋OMA10^-9mol／L组,ET-1＋OMA10^-8mol／L,ET-1＋OMA10^-7mol／L组．ET-1＋OMA10^-6mol／L组.采用四氮唑盐（MTT）比色法测定CFs数目,流式细胞分析仪（FCM）检测CFs细胞周期,液体闪烁计数仪测定CFs^3H-脯氨酸掺入率,硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO含量：结果：与对照组相比,10^-7mol／LET-1能显著增加CFs的吸光度A190值及[^3H]-Pro掺入率,降低CFs生成NO的量（均P〈0．01）,10^-9-10^-6mol／L OMA呈浓度依赖性的降低ET-1诱导的A190值和[^3H]—Pro掺入率升高（均P〈0．01）,促进CFsNO的生成（均P〈0．05）;细胞周期分析表明ET—1能显著提高S期细胞百分率（P〈0．01）,10^-7mol／LOMA抑制ET-1诱导S期细胞百分率上升（P〈0．01）.结论：OMA对ET-1诱导的CFs增殖及胶原合成有抑制作用,该作用可能和NO生成有关.     

Hif-1a suppresses ROS-induced proliferation of cardiac fibroblasts following myocardial infarction

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钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞分化过程中的表达及其钙激活氯通道电生理特性变化*

目的: 研究钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞(CFs)向成肌纤维细胞(MFs)分化过程中的表达规律及其电生理特性,探索ANO1在心肌纤维化进程中的作用。方法: 以刚分离贴壁的大鼠原代CFs及其分化的MFs为研究对象,利用全细胞膜片钳检测钙激活氯通道电流变化,采用免疫荧光标记技术和Western blot检测ANO1、α-SMA和vimentin在CFs和MFs细胞中的表达特征。结果: 刚贴壁培养的CFs钙激活氯通道电流密度远高于MFs;ANO1主要表达于CFs和MFs的细胞核周围及细胞核上,少量表达于细胞膜;ANO1在刚贴壁的CFs中表达较弱,而在有分裂增殖趋向的MFs细胞中表达较为明显。结论: ANO1的表达与MFs的分化过程密切相关,提示其可能参与调节心肌纤维化进程。     

低氧促进大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达

目的:研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前a肽链表达的影响.方法:分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞的DNA合成速率,采用原位杂交技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达.结果:成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第6h、12 h时3H-TdR掺入量较常氧组显著增加,分别增加34%(P＜0.05)和36%(P＜0.01);低氧第4 h、8 h、12 h Ⅰ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞;低氧第2 h,Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞.结论:低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链表达,提示低氧对心脏成纤维细胞生长和胶原表达的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制.     

Effect of ascorbate on collagen synthesis by lung embryonic fibroblasts

Summary Total insoluble collagen and hydroxyproline formation were examined in lung embryonic fibroblasts (IMR-90) grown in the presence or absence of added ascorbate. As expected, when the cells from both groups (+ and −ascorbate) are pulsed with [¹⁴C]proline in the presence of ascorbate, the percent hydroxylation in a 24-hr period does not vary significantly. However, there are dramatic differences in the quantity and quality of the insoluble collagen fraction produced by those cells grown for a long period of time with added ascorbate. Those cells deprived of continuous addition of ascorbate to the culture medium do not display large quantities of accumulated collagen in the cell layer fractions as measured by the hydroxyproline content, whereas the cells grown in the presence of ascorbate contain significant amounts of accumulated collagen. A new method for examining the extracellular insoluble collagen produced in cell cultures is described in these studies. With the aid of pancreatic elastase relatively pure insoluble collagen can be obtained from cells grown in culture. In those cells grown in the presence of ascorbate, the purified insoluble collagen yeilds appropriately banded fibrils when examined in the electron microscope and has an amino-acid composition that is compatible with pure collagen. On the other hand, those cells grown in the absence of ascorbate do not yield purified insoluble collagen as determined by these same criteria. The elastase procedure for the purification of insoluble collagen in cell cultures is simple, easy to use and allows one to assess additional aspects of collagen biosynthesis.     

β2-肾上腺素受体在新生大鼠心肌成纤维细胞中的分布及其促增殖作用

为了明确β-肾上腺素受体(AR)亚型在新生大鼠心肌成纤维细胞中的分布及其在成纤维细胞增殖反应中的作用,采用放射配体结合实验和[3H]-thymidine掺人法检测了新生大鼠心肌成纤维细胞的β-AR密度和DNA合成速率。结果显示,在培养心肌细胞和心肌成纤维细胞中β-AR密度(Bmtax)和解离常数(Kp)无显著性差异;竞争抑制曲线分析结果提示,心肌成纤维细胞对CGP 20712A和ICI ll8551单位点拟合均显著优于两位点拟合(P＜0．01),表现为对选择性β1-AR拮抗剂CGP 20712A的低亲和性(IC50值：10．1μmol/L)和对选择性β2-AR拮抗剂ICI 118551的高亲和性(IC50值：0.147μmol/L)。异丙肾上腺素(ISO)促心肌成纤维细胞增殖作用可被ICI 118551和心得安(非选择性β-AR拮抗剂)完全抑制,而CGP20812A则无此作用。上述结果提示,在培养心肌成纤维细胞中β-AR亚型占绝对优势,并且ISO引起的心肌成纤维细胞增殖反应是由β2-AR介导的。     

Cerium depresses protein synthesis in cultured cardiac myocytes and lung fibroblasts

The present study examined the effect of Cerium on protein synthesis in cultured cardiac myocytes and lung fibroblasts exposed to normal and markedly subnormal levels of Mg²⁺. Cerium was found to have a general inhibitory effect on protein synthesis in these cell types, including the synthesis of myofibrillar proteins in the cardiac myocytes. Further, the effect of the metal ion was more pronounced in cells exposed to the Mg²⁺-deficient medium. The possible implications of the observations are discussed.