小鼠胰腺大部分切除后再生集中区来源的初步探索

目的:探讨胰腺在某些损伤或病理条件下,由于细胞活跃增殖产生再生集中区域的细胞来源。方法:将27只成年ICR系小鼠分为9组,每组3只,其中1组进行假手术,其余8组进行小鼠胰腺大部分切除,分别在切除后12h,24h、36h、48h、3d、5d、7d、10d取材及冰冻切片,采用H-E染色、免疫荧光染色方法检测损伤后各时间段胰腺组织的形态变化和细胞增殖率。结果:H-E染色发现,胰腺手术72h后,剩余胰腺中就出现由细胞角蛋白阳性导管样结构组成的再生集中区,此区域细胞随后分化为功能性细胞类型,10d后消失检测不到。对胰腺再生集中区的定位研究表明,它们仅出现于切除后的伤口边缘。BrdU标记表明,胰腺再生集中区为细胞快速增殖区域,其出现与总导管增殖率提高同时发生,主/大导管和小导管增殖率上升都晚于再生集中区的出现。结论:小鼠胰腺大部分切除后再生集中区可能来源于腺泡细胞的快速增殖,而不是经由总-主/大-小导管-快速增殖区这一途径引起的来源于导管上皮细胞。     

利用假型反转录病毒对大部分胰腺切除后再生细胞的世系追踪

胰腺是一个重要的内外分泌混合腺, 胰腺发生损伤后能够再生。为了探讨胰腺活体细胞世系追踪的方法和胰腺损伤后再生细胞的来源,分别通过胰腺伤口涂抹并胰内注射、尾静脉注射及腹腔注射三种方法, 利用假型反转录病毒对成体小鼠大部分切除后胰腺的细胞进行世系追踪。结果发现在活体条件下, 与尾静脉注射及腹腔注射法相比, 胰腺伤口涂抹并胰腺内注射反转录病毒的方法能够更有效的标记胰腺细胞; 而且, 通过对标记细胞的世系追踪研究证明, 在胰腺损伤后, 胰腺腺泡细胞能够接受损伤信号刺激发生再生。为今后进一步利用反转录假病毒对活体胰腺进行细胞命运追踪研究奠定基础, 为利用反转录病毒载体进行胰腺疾病的基因治疗提供线索。     

利用假型反转录病毒对大部分胰腺切除后再生细胞的世系追踪

胰腺是一个重要的内外分泌混合腺, 胰腺发生损伤后能够再生。为了探讨胰腺活体细胞世系追踪的方法和胰腺损伤后再生细胞的来源,分别通过胰腺伤口涂抹并胰内注射、尾静脉注射及腹腔注射三种方法, 利用假型反转录病毒对成体小鼠大部分切除后胰腺的细胞进行世系追踪。结果发现在活体条件下, 与尾静脉注射及腹腔注射法相比, 胰腺伤口涂抹并胰腺内注射反转录病毒的方法能够更有效的标记胰腺细胞; 而且, 通过对标记细胞的世系追踪研究证明, 在胰腺损伤后, 胰腺腺泡细胞能够接受损伤信号刺激发生再生。为今后进一步利用反转录假病毒对活体胰腺进行细胞命运追踪研究奠定基础, 为利用反转录病毒载体进行胰腺疾病的基因治疗提供线索。     

小鼠动物实验方法系列专题(二) 肝脏大部分切除实验在小鼠肝再生研究中的应用

小鼠肝大部分切除(partial hepatectomy,PH)实验是研究肝再生的一个重要的实验。本文以C57小鼠为例,对肝大部分切除实验做了较为详细的介绍。实验结果显示,在术后的1～8天,小鼠的肝脏体重比值逐渐增加,在术后的7～10天里可以达到原来肝重的90%以上,10天以后肝细胞停止分裂。正常情况下,实施肝大部分切除后,小鼠的存活率可以达到90%以上。该模型的建立为研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制奠定了基础。     

小鼠肝部分切除模型

小鼠肝部分切除模型是在经典的大鼠模型基础上发展起来的。随着显微外科技术的发展和小鼠腹部手术围手术期管理的完善,快速、可靠、重复性高的小鼠模型得以建立。因为成本较低,且存在大量为研究肝切除后肝再生的转基因小鼠,小鼠已经成为研究肝再生的重要动物模型。肝再生的调控相当复杂,且不是由单一因素控制的,因此需要多种类的转基因小鼠进行肝切除后肝再生研究来明确各因子在肝再生过程中的确切作用与机制。通过小鼠肝切除后肝再生的研究,目前已证实的参与调控肝再生的细胞因子和生长因子有:肝再生增强因子(ALR)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素6(IL-6)、白介素1(IL-1)、肝细胞生长因子(HGF)、去甲肾上腺素(NE)、卵泡抑素(FS)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β-1(TGF-β-1)等。     

肝大部切除后肝再生调节的研究

肝再生调节因子主要有促使肝细胞增殖的刺激因子和抑制因子两大类。前者如ＥＧＦ、ＩＧＦ－α、ＨＳＳ、ＨＰＴＢ、ＨＰＴＡ／ＨＧＦ等,它们是肝细胞增殖的完全促分裂原;后者主要有肝抑素、ＴＧＦ－β等,它们对肝细胞增殖具有负性调节作用。本实验室已提取纯化了大鼠肝抑素并证明了它的生物效应。肝大部切除后的动物在上述两类因子的调控下,肝细胞增殖迅速而有规律,肝再生完成后肝细胞增殖趋于停止。     

胆囊收缩素和胰岛素在发育中小鼠胰腺内的表达

目的观察昆明小鼠发育过程中胰腺内胆囊收缩素免疫反应阳性（CCK—IR）细胞和胰岛素免疫反应阳性（Ins—IR）细胞的发生、分布和形态。方法用免疫组织化学和免疫荧光双标法观察小鼠胚胎11d至出生后45d胰腺内的CCK—IR细胞和Ins—IR细胞。结果小鼠胚胎第11d,早期分化的胰腺中即出现CCK—IR细胞和Ins—IR细胞。自胚胎期至生后发育成熟,小鼠胰腺中均可见到Ins—IR细胞。CCK—IR细胞的形态不规则,与Ins—IR细胞相邻分布。在胚胎期免疫反应较强,生后胰腺内依然可见到发弱荧光的CCK—IR细胞。胰岛内还可见CCK—Ins—IR细胞。CCK—IR细胞和Ins—IR细胞主要分布于胰岛内,外分泌部的腺泡和导管处也偶可见到。结论发育中小鼠胰腺内的CCK—IR细胞具有旁分泌细胞的形态特征;免疫荧光双标法可见CCK与胰岛素共存于同一细胞内的现象。     

大部分肝切除后肝再生中TNFα、IL6作用的研究

为研究ＴＮＦα、ＩＬ６在肝再生中的作用,我们制备了大鼠７０％肝切除后肝再生的模型,以增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的免疫组织化学染色作为肝再生的指标,对其ＴＮＦα、ＩＬ６的水平进行了检测。结果显示：ＰＣＮＡ在肝切除后残存肝组织中的表达明显升高,于手术后２４小时达高峰。手术后３小时,假手术组和肝切除组血中ＴＮＦα和ＩＬ６的水平均有升高,但假手术组很快恢复至正常,而肝切除组血清ＴＮＦα和ＩＬ６的水平继续升高,并于术后１２小时达高峰（Ｐ＜００５）。研究提示：ＴＮＦα、ＩＬ６等细胞因子在肝切除后的肝再生中具有一定的促进作用     

小鼠离体胰腺淀粉酶释放的温度依赖性

应用小鼠离体胰腺碎片灌流技术研究了在37、25、10和40℃下胰腺的淀粉酶释放以及乙酰胆碱(ACh)对胰淀粉酶释放的刺激效应。灌流液采用Krebs-Henseleit(KH)溶液,对照温度为37℃。实验观察到:25℃时淀粉酶的释放量减低,10℃时极明显减低,而40℃时淀粉酶释放量明显增加。在KH灌流液中加入ACh对淀粉酶释放有刺激效应。但是10℃时的刺激效应比37℃时大约降低一半,而40℃时ACh对淀粉酶的刺激效应仍保持较高水平。在离体条件下基础淀粉酶释放主要是在胰内神经节影响下神经末梢释放ACh的结果。结果表明,低温可降低胰腺泡细胞对ACh的敏感性。     

大鼠反复肝切除后再生肝组织的实验形态学研究

９０只雄性ＳＤ大鼠随机分为三组,每组各３０只,以第一次切肝量５０％（Ａ组）,７０％（Ｂ组）,８０％（Ｃ组）为分组标准,均作反复四次肝切除。动态观察其再生肝组织的酶组织化学,组织学及超微结构变化。结果显示：Ａ、Ｂ组三次术后累计存活率（８５％）明显高于Ｃ组（５７％）,Ｐ＜０．０１。Ａ、Ｂ、Ｃ各组三次术后累计切肝率各为１１４．２８％,１２０．７２％,１２５．８１％。Ａ、Ｂ组ＳＤＨ、ＡＴＰａｓｅ、ＬＤＨ活性改变相近,优于Ｃ组。各组ＣＨＥ活性均处于低水平。ＡＣＰ活性随切量,切次增加而增强。肝再生的方式既有小叶数量增多,面积增大,又有细胞肥大,细胞数量增加。电镜显示了增生活跃的肝细胞的核发裂像。所示线粒体结构受损与ＳＤＨ活性下降相对应。研究证明;大鼠反复肝切除是可行的,第一次切肝量,切次多少是影响大鼠耐受反复肝切除的重要因素。     

中国部分地区种子植物区系亲缘关系的研究

以植物属分布区类型的百分比为指标,分别采用系统聚类分析的最短距离法、最长距离法、中间距离法、重心法、离差平方和法、类平均法和可变法等7种方法,对中国46个地区的植物区系进行了分析研究,给出了其种子植物属的分布区类型的树状聚类图,求得各地区植物区系之间的亲缘关系。结果表明：在一定的经度范围内(中国东半部地区),两个地区植物区系之间的亲缘关系与其所处的纬度相关,即纬度相近其亲缘关系也相近,反之即疏远。运用系统聚类分析方法所得到的中国46个地区植物区系之间亲缘关系的结果与经典的理论基本吻合。     

激光共聚焦显微镜观察小鼠早期胚胎中PKB/Akt对微丝聚合的影响

在本实验中我们用优化的免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微技术,观察了微丝在小鼠卵细胞不同期的分布情况及PKB/Akt对小鼠卵母细胞和早期胚胎的微丝聚合的影响。结果显示,在小鼠卵母细胞及早期胚胎中均有微丝的表达,且主要集中在纺锤体处的质膜处、极体及分裂沟处。注射激活型PKB/Akt mRNA能够增强微丝的聚集。相反,注射激酶失活型的PKB/AktmRNA减弱了微丝的聚合。因而我们认为PKB/Akt可以影响小鼠卵细胞和早期胚胎的微丝聚集。     

A Historical Perspective on the Identification of Cell Types in Pancreatic Islets of Langerhans by Staining and Histochemical Techniques

Before the middle of the previous century, cell types of the pancreatic islets of Langerhans were identified primarily on the basis of their color reactions with histological dyes. At that time, the chemical basis for the staining properties of islet cells in relation to the identity, chemistry and structure of their hormones was not fully understood. Nevertheless, the definitive islet cell types that secrete glucagon, insulin, and somatostatin (A, B, and D cells, respectively) could reliably be differentiated from each other with staining protocols that involved variations of one or more tinctorial techniques, such as the Mallory-Heidenhain azan trichrome, chromium hematoxylin and phloxine, aldehyde fuchsin, and silver impregnation methods, which were popularly used until supplanted by immunohistochemical techniques. Before antibody-based staining methods, the most bona fide histochemical techniques for the identification of islet B cells were based on the detection of sulfhydryl and disulfide groups of insulin. The application of the classical islet tinctorial staining methods for pathophysiological studies and physiological experiments was fundamental to our understanding of islet architecture and the physiological roles of A and B cells in glucose regulation and diabetes.     

北京市建成区绿地植物物种来源分析

为探讨北京市建成区绿地植物的物种构成、外来植物组成及其在不同功能区的分布,采用机械布点和随机抽样法对北京市建成区绿地植物资源进行系统调查。结果表明：（1）北京市建成区绿地植物外来引进种173种,外来归化入侵种20余种：（2）外来引进种以国内引进为主,境外起源物种中美洲和欧亚区系植物占绝对优势：（3）外来种丰度按大小排列为：大型公园〉高等院校〉居住区绿地〉街头绿地／街心花园〉附属绿地〉街道绿地〉片林绿地,而各绿地类型的入侵种数量没有显著差异。     

Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress

Neurons of the cerebral cortex are generated during brain development from different types of neural stem and progenitor cells (NSPC), which form a pseudostratified epithelium lining the lateral ventricles of the embryonic brain. Genotoxic stresses, such as ionizing radiation, have highly deleterious effects on the developing brain related to the high sensitivity of NSPC. Elucidation of the cellular and molecular mechanisms involved depends on the characterization of the DNA damage response of these particular types of cells, which requires an accurate method to determine NSPC progression through the cell cycle in the damaged tissue. Here is shown a method based on successive intraperitoneal injections of EdU and BrdU in pregnant mice and further detection of these two thymidine analogues in coronal sections of the embryonic brain. EdU and BrdU are both incorporated in DNA of replicating cells during S phase and are detected by two different techniques (azide or a specific antibody, respectively), which facilitate their simultaneous detection. EdU and BrdU staining are then determined for each NSPC nucleus in function of its distance from the ventricular margin in a standard region of the dorsal telencephalon. Thus this dual labeling technique allows distinguishing cells that progressed through the cell cycle from those that have activated a cell cycle checkpoint leading to cell cycle arrest in response to DNA damage.An example of experiment is presented, in which EdU was injected before irradiation and BrdU immediately after and analyzes performed within the 4 hr following irradiation. This protocol provides an accurate analysis of the acute DNA damage response of NSPC in function of the phase of the cell cycle at which they have been irradiated. This method is easily transposable to many other systems in order to determine the impact of a particular treatment on cell cycle progression in living tissues.