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从浑球红细菌的基因文库中筛选到pHT3、pHT10及pHT35三个阳性克隆,其中质粒pHT10与pHT35能遗传互补英膜红细菌的谷氨酰胺缺陷型G29,使其GS酶及固氮酶活性得到恢复。对质粒pHT10上的glnA同源片段进行了亚克隆和限制性内切酶图谱分析,确定了浑球红细菌glnB与glnA之间存在连锁关系。 相似文献
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浑球红细菌谷氨酰胺合成酶基因(glnA)及PⅡ蛋白基因(glnB)的序… 总被引:1,自引:1,他引:0
测定了浑球红细菌的glnA和glnB基因DNA序列,共2707nt。其中glnA基因编码区为1401nt,编码467个氨基酸;glnB基因编码区为336nt,编码112个氨基酸。DNA序列的G+C百分含量为65%,它们的密码子第三位GC利用率高灰89.1%。 相似文献
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应用反义技术对鱼腥藻7120的内源glnA基因的表达进行调控,首次获得了人工反义系统的蓝藻品系。先从编码谷酰胺合成酶的基因glnA中取得部分结构基因片段,与表达质粒载体pRL-439及穿梭质粒载体pDC-8相连接。通过酶切鉴定筛选出反向克隆的穿梭表达质粒pDC-ATGS,然后应用三亲接合转移法把它鱼腥藻7120。 相似文献
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亚克隆了Rhodobacter sphaeroidesglnB启动子,以pMP220为载体构建成blnB-lacZ融合子。将glnB-lacZ、nifH-lacZ、nifA=lacZ分别导入R.sphaeroides谷氨酸合酶突变株gltB、gltD和野生型菌株中,分析了突变对固氮基因转录表达的影响,试验证明,在gltBD突变株中nifH的表达受阻遏,nifA表达水平很低。这证明glt基因的突变引 相似文献
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5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinate acid,ALA)在农业,工业,医药业具有广泛的应用。ALA由5-氨基乙酰丙酸合酶(5-aminolevulinate acid synthase, ALAS)催化产生,其生物合成受终产物血红素的反馈抑制。本研究克隆一种浑球红细菌的hemA基因,序列分析其与已报道的基因具有96%的同源性,蛋白质编码区域也发生改变,并利用生物信息学软件进行同源关系的分析。采用大肠杆菌重组技术,构建表达载体pET28a—hemA,表达了有活性的浑球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)的ALAS,研究了IPTG诱导和PH对研究ALAS的影响,同时分析了重组菌株合成ALA的能力,测定胞外产量。结果表明,在PH6.5,30mmol/L琥珀酸和60mmol/L甘氨酸培养条件下,胞外ALA的最大合成量达到669mg/L。 相似文献
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亚克隆了Rhodobacter sphaeroides glnB启动子,以pMP220 为载体构建成glnBlacZ融合子。将glnBlacZ、nifHlacZ、nifAlacZ分别导入R. sphaeroides 谷氨酸合酶突变株gltB- 、gltD- 和野生型菌株中,分析了突变对固氮基因转录表达的影响。试验证明,在gltBD 突变株中nifH 的表达受阻遏,nifA 表达水平很低。这证明glt 基因的突变引起固氮酶结构基因和固氮正调节基因的转录被阻遏,而glnB 基因的表达几乎不受影响。试验还测定了环境中结合态氮和有机酸等信号分子对glnB 和nifH 表达的影响,发现加入氨或谷氨酰胺后,nifH 的表达受到明显的阻遏作用,glnBlacZ的β半乳糖苷酶活性虽下降30 % 左右但不随结合态氮浓度升高而变化,仍维持在一个较高的水平。α酮戊二酸和丙酮酸对nifH 的表达有部分去阻遏作用而对glnB的表达无诱导作用 相似文献
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aroG基因编码的 3-脱氧-2-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(DAHP Synthetase DS)和 pheA基因编码的分支酸变位酶/预苯酸脱水酶(Chorimate mutase/ Prephenate dehydratase,CW/PD)都是本丙氨酸合成途径中的关键酶,为了通过基因工程手段来增加本丙氨酸生物的产量,在利用高效的原核表达载体pBV22 0对pheA基因编码的CM/ PD 酶进行了表达的基础上,采用PCR方法扩增了抗反馈抑制的arcG基因,进行克隆表达,并与pheA基因串联,以PRPL-aroG-PL-pheA的形式,实现了2种酶基因在大肠杆菌中的表达, SDSPAGE 图谱显示了新增的43ku及35ku蛋白带,经酶活性测定DS、CM/PD酶的比活分别提高了 4.67倍、805/10.71倍。 相似文献
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测定了浑球红细菌的glnA和/glnB基因DNA序列,共2707nt。其中glnA基因编码区为1401nt,编码467个氨基酸;glnB基因编码区为336nt,编码112个氨基醚。DNA序列的G+C百分含量为65%,它们的密码子第三位GC利用率高达89.1%。在氨基酸序列上,GS酶和PⅡ蛋白与其它不同属的细菌间有较好的同源性,尤其是固氮类细菌间同源性较高。 相似文献
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浑球红细菌光合基因研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
对于分子水平光合作用的研究,浑球红细菌是一个极好的模式系统。本文简单介绍该菌光合装置的组分和功能,循环光合电子传递机制,反应中心和捕光天线的结构基因,以及光合基因簇。 相似文献
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优良水稻品种“明恢63”BAC文库的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
“明恢63”是我国许多重要的水稻杂交组合中的恢复系。为了对其进行深入的遗传学研究以及克隆控制重要农艺性状的基因,以细菌人工染色体(pBeloBAC11)为载体,克隆经限制性内切酶消化后部分收集的“明恢63”基因组DNA,将连接混合物转化细菌DH10B,构建了细菌人工染色体(BAC)文库。该文库共有26000个转化子,插入片段为90~240kb,平均大小为150kb。经计算该文库覆盖9倍水稻基因组。该文库正在用于构建几个基因所在区段的物理图谱,为图位克隆打下基础 相似文献
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凤眼莲根分泌物氨基酸组分对根际肠杆菌属F_2细菌的趋化作用 总被引:9,自引:0,他引:9
凤眼莲(Eichhorniacrassipes)的根分泌物中含有Met等多种氨基酸,其中Met、GABA、Gly、Ala、Asp、Ser、Val和Leu(10-7~10-2mol·L-1)均对凤眼莲的根际肠杆菌属F2(Enterobactersp.F2)细菌有强烈的正趋化作用;Glu、Thr和His(10-7~10-3mol·L-1)也对该菌有一定的正趋化作用;而Lys、Cys、Arg、Tyr、Pro、Asn、Gln、Ile、Phe和Typ则对该菌表现出一定的负趋化作用.对细菌的正趋化作用存在一个趋化物的最适浓度范围.具有正趋化作用的氨基酸在凤眼莲根际的浓度都较高,而具有负趋化作用的浓度则较低,这正是凤眼莲与该根际细菌结合为根际微生态系统的原因之一. 相似文献
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为了在小鼠胚胎于细胞(ES)中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35Nck5a基因的定点 重复,采用常规的分子克隆技术,构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电 穿孔法将线性化的pGDTV载体转入ES细胞,经过G418和GANC分组药物选择,获得245个 双药物抗性的细胞克隆,细胞存活率为6.22 × 10-5。经PCR和基因组Southern杂交鉴定,2个 ES细胞克隆发生了p35Nck5a基因的重复,同源重组率为5.08×10-7、负向选择系统的应用使 同源重组事件的富集效率提高了7倍。为建立Alzheimer病的转基因小鼠模型打下了基础。 相似文献
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以质粒pIJ486为载体,将来源于质粒pHT1的肿瘤坏死坏因子(TNF-a)cDNA克隆至变铅青链霉菌,以新霉素(30μg/ml)为选择标记,获得了数百转化子,实验表明No.7转化子s.lividans TK54-HT所含重组质粒pIJT7已克隆有TNFcDNA。L929细胞毒实验结果表明该转化子TNF表达量可达10^8活性单位/升以上,中和实验确证其表达产物为人TNF-a,SDS-PAGE表明克 相似文献
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细菌诱析袋表面培养法及其蛋白质产物的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
本报告的细菌透析袋表面培养法,可使被检菌的浓度比普通培养法高10倍左右,并避免了培养基中高分子物质混入,以上清原液直接进行SDS-PAGE得到了清晰的带谱。对葡萄球菌产生的蛋白质带谱观察显示;不同菌种,菌株间带谱都有各自不同特征,各菌株的带谱重复性良好。本培养法在细菌蛋白质产物分析及临床细菌鉴定中是很在实用价值的。 相似文献
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本文测定了浑球红假单胞菌(Rhodobacter sphaeroides)菌株601谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸合酶(GOGAT)、谷氨酸脱氢酶(GDH)和丙氨酸脱氢酶(ADH)的活性。低氨时,GS/GOGAT活力高,GDH活力低,高氨时,GS/GOGAT活力低,GDH活力高。在以分子氮或低浓度氨为氮源的培养条件下,加入GS抑制刑MSX(L—methionine—DL—sulphoximine),细菌生长受到抑制。但是,生长在以谷氨酸为氮源的细菌则不受影响。上述结果表明,浑球红假单胞菌菌株601氨同化是通过GS/GOGAT途径和GDH途径。 相似文献
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本文综合国内外有关文献介绍了青酶素G酰化酶的改造,异青霉素N合成酶和头孢菌素C水解酶的克隆,以及细菌血红蛋白基因克隆进丝状真菌。比较了化学法和两步酶法转化cpc(头孢菌素C)成7-ACA的优缺点。还讨论了基因工程β-内酰胺抗生素研制的发展方向。 相似文献