促进微繁殖自动化的技术

Clemson大学的R.E.Young及同事们试验了一系列技术和装置,这些技术和装置可用于微繁殖的自动化,并能促进微繁殖小植株的机械化管理。该技术包括(1)连续流动营养培养基系统,(2)使用各种外植体支撑原料,(3)从愈伤组织中分离微繁殖体的方法。 Young的研究小组找到一种比Magenta容器更耐用的玻璃烧杯,用作连续流动液体培养系统的生物反应器。根据强度、吸收性、对植物组织无毒性和再利用性等标准,他们筛选了近30种作生长支持基质的原料,发现用微孔聚丙烯膜获得的结果最佳。为了便于自动化收获小植株,Clemson大学的研究者们将两种原料结合使用。他们构建了一种膜网装     

彩纹海棠的快速繁殖研究

彩纹海棠叶片培养在MS基本培养基中,研究植物的激素、培养基的物理性质对器官形成的影响及试管苗移栽技术等.试验结果表明细胞分裂素BA促进芽的形成和增殖。BA和NAA配合使用,对叶片形成芽有增效作用。通过继代培养,能繁殖大量无根苗。将无根苗转入含有NAA0.2mg/L或IBA ling/L的1/2MS培养基中,诱导生根形成完整植株。诱导叶片形成芽应采用固体培养基;而液体静置培养则有利于促进芽发育成苗和生根。试管苗移栽获得成功,幼苗生长良好。     

细胞体外生长的检测

植物细胞悬浮物生长测定需要取样、样品称重或测量.然而,植物细胞往往形成团聚体,这就使其难以获得匀质的样品.此方法劳动强度大,不准确且易受污染. 瑞士联邦工学院的M.Taya等人利用培养基的传导性变化研究了一个连续测定植物细胞生长的方法.干细胞质量与细胞悬浮物和“膜-底船式”培养物(咖啡、长春花、烟草和     

花叶蔓长春花的快速繁殖

植物名称:花叶蔓长春花,又名对叶长春藤、爬藤黄杨,(Vinca majorl.var.varitgata)。植物材料:茎尖、茎段(带有休眠芽)。培养条件:1.芽生长的培养基:MS基本培养     

半连续和连续生物转化

培养的植物细胞在活性生长阶段通常不会产生大量的次级代谢产物,适合活性细胞生长的培养基和培养条件也与次级代谢产物生产所需要的条件不同.因此,经常用二步操作法通过植物细胞培养物进行次级代谢产物的生产,第一步适合细胞生长,第二步适合产物合成.可是,植物细胞分裂缓慢,需要几周或几个月产生的细胞体积才能适合在生物反应器中大规模生产代谢产物. 蒂宾根大学的科学家W.Kreis和E.Reinhard采用二步法培养毛地黄(Digitalis lanata)细胞,开发了一种生产强心甾类药物去乙酰毛花甙C的半连续方法.该方法采用2种     

番木瓜细胞悬浮培养中细胞生长及过氧化氢酶的研究

按常规植物细胞培养技术获得的20天种龄的番木瓜(Carica papaya)愈伤组织,悬浮于分别含有0.3％酵母膏的MS_3-CM及B_5培养基中,于25℃、100 r╱min 进行振荡培养,测定细胞生长(根据细胞湿重)和过氧化氢酶活性的结果表明:1.在MS_3-CM培养基中,经过144小时的培养,番木瓜细胞达到最大生长量,然后逐步降低。细胞达最大量后,pH值逐步上升,过氧化氢酶开始大量产生(图1A)。2.在B_5培养基中,细胞生长迅速,84小时达到最大生长量,过氧化氢酶的产生与在MS_(?)—CM培养基中一样,同属于滞后型(图1B)。从两种培养的效     

Vitex glabrata R.Br.悬浮培养细胞的生长条件优化及20-羟基蜕皮激素的生产

研究了培养基、植物生长调节素以及接种量对Vitex glabrata R.Br.悬浮培养细胞的生长情况以及对20-羟基蜕皮激素形成的作用。当细胞在添加有2.0mg/LBAP(6-苯甲酸嘌呤)和1.0mg/L2,4-D的Gamborg’s B5培养基中培养时细胞生长和20-羟基蜕皮激素的形成达到了最高水平。当接种量为20%PCV(积压细胞体积)时观察到了20-羟基蜕皮激素的最高产量,大约是1.1mg/(L.d)。实验数据也表明当接种量增加到20%PCV时,产量提高了7倍。     

Vitex glabrata R.Br.悬浮培养细胞的生长条件优化及20-羟基蜕皮激素的生产

研究了培养基、植物生长调节素以及接种量对Vitex glabrata R.Br.悬浮培养细胞的生长情况以及对20-羟基蜕皮激素形成的作用。当细胞在添加有2.0mg/L BAP (6-苯甲酸嘌呤)和1.0mg/L 2,4-D的Gamborg's B5培养基中培养时细胞生长和20-羟基蜕皮激素的形成达到了最高水平。当接种量为20％PCV（积压细胞体积）时观察到了20-羟基蜕皮激素的最高产量,大约是1.1mg/(L·d)。实验数据也表明当接种量增加到20％PCV时,产量提高了7倍。     

Vitex glabrata R.Br.悬浮培养细胞的生长条件优化及20-羟基蜕皮激素的生产

研究了培养基、植物生长调节素以及接种量对Vitex glabrata R.Br.悬浮培养细胞的生长情况以及对20-羟基蜕皮激素形成的作用。当细胞在添加有2.0mg/L BAP (6-苯甲酸嘌呤)和1.0mg/L 2,4-D的Gamborg's B5培养基中培养时细胞生长和20-羟基蜕皮激素的形成达到了最高水平。当接种量为20％PCV（积压细胞体积）时观察到了20-羟基蜕皮激素的最高产量,大约是1.1mg/(L·d)。实验数据也表明当接种量增加到20％PCV时,产量提高了7倍。     

前列腺癌干细胞的分离及鉴定

前列腺癌DU145细胞在普通培养基中培养至对数生长期,无血清培养基重悬细胞培养至形成球状体,以细胞三维(3D)培养和二维(2D)培养方法分离前列腺癌类干细胞,观察细胞球的形成及其生长情况,通过CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕修复实验检测所分离细胞的增殖能力,结果显示前列腺癌DU145细胞在普通培养基中呈长梭形贴壁生长,无血清培养基培养72 h形成大量细胞球聚集体,细胞3D培养分离的细胞球的透明度和形态比2D培养分离的细胞好,3D培养分离细胞的增殖能力和划痕修复能力明显强于2D培养分离细胞.因此,细胞3D培养技术联合无血清培养基有利于前列腺癌干细胞的分离.     

珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

以香果树(Emmenopterys henryi)未成熟种子为试材, 探讨不同的接种量、基本培养基、糖浓度及植物生长调节物质等对体细胞胚胎生长的影响, 建立稳定的香果树胚性细胞悬浮培养与植株再生体系。结果表明: 悬浮培养条件下, 最适接种量为2%(鲜重); 较适合的基本培养基为MS; 蔗糖浓度为1%时容易使球形胚聚合体愈伤化, 浓度为3%和6%适合球形胚聚合体增殖, 浓度为9%则容易使球形胚聚合体褐化; 添加0.5 mg.L-16-BA 和0.5 mg.L-1 NAA的MS液体培养基, 当初始蔗糖浓度为3%, 然后逐步提高到6%则有利于香果树各个发育阶段的同步化; 子叶胚转到不含任何植物生长调节物质的MS固体培养基中可以长成正常植株。     

不同培养基中MDCK细胞生长及代谢动力学研究

[目的]为筛选适应于MDCK细胞大规模培养的最佳培养基并揭示其代谢动力学规律。[方法]选取商业化的培养基DMEM(试验组A)、EMEM(试验组B)、MEM(试验组C)、M199(试验组D)、DMEM/F12(试验组E)及DMEM:EMEM复合培养基(试验组F)用于MDCK细胞传代培养,研究不同培养基对MDCK细胞生长特性的影响,分析MDCK细胞生长过程中葡萄糖(Gluc)、乳酸(Lac)、谷氨酰胺(Gln)和氨(NH4+)的代谢情况,并进一步进行细胞工厂的培养验证。[结果]结果表明MDCK细胞均能在试验组A、B、E、F四种培养基中生长,其最大增殖浓度E A F B,差异显著(P 0. 05);倍增时间B F A E,差异显著(P 0. 05);细胞比生长速率E A F B,差异不显著(P 0. 05)。不同培养基培养MDCK细胞对数生长期平均葡萄糖比消耗速率、谷氨酰胺比消耗速率及氨比生成速率差异均不显著(P 0. 05),乳酸比生成速率差异显著(P 0. 05)。在试验组A和E培养基中细胞能实现高密度增殖,再将其进行细胞工厂扩大培养验证,发现两种培养基在培养48 h时均能达到单层致密,且细胞密度均达到8. 0×10~8/cells以上,差异不显著(P 0. 05)。[结论]综合研究结果及规模化生产成本因素,采用DMEM培养基(试验组A)培养MDCK细胞,其最大增殖浓度达到6. 4×10~5/m L,倍增时间为22. 835 h,比生长速率为0. 558,可进行大规模培养,为工业化生产提供依据。     

MDCK细胞微载体悬浮培养放大工艺研究

MDCK细胞对各种流感病毒具有高度敏感性,广泛应用于流感病毒的分离和疫苗制备.通过探索培养基中促进细胞贴壁的关键组分,并筛选水解物,开发了适合MDCK细胞生长的低血清培养基.发现钙、镁离子是细胞贴壁不可缺少的物质,麦麸水解物可以部分代替培养基中的血清.利用该低血清培养基,经过消化转移将MDCK细胞从5L反应器放大至25 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,25 L反应器中培养48 h细胞密度可达30.5×105 cells/ml.研究结果为工业规模反应器微载体悬浮培养MDCK细胞生产流感病毒奠定了基础.     

植物细胞固相培养研究进展

模仿植物体内的代谢环境及微生物的发酵培养而建立的植物细胞固相培养技术在有效次生产物,如:药品、香料、甜味剂和食品色素等的商业化生产中有着重大意义. 由于固相培养技术有以下优点,因而在本世纪八十年代取得了迅速发展. (1)固相细胞内紧密接触及细胞的多样性可形成同一结构组织,从而促进合成途径的表达. (2)固相细胞生长在有浓度梯度的营     

玉米原生质体再生可育性植株

尽管最近在禾谷类作物原生质体再生植株方面已取得显著进展,但这些再生株往往不育.因而,其有效性受到限制.目前,CIBA-GEIGY公司和DNA植物技术(DNAPT)公司研究人员报道,他们已从玉米原生质体再生出可育性植株.DNAPT公司的L.M.Prioli和M.R.Sonduhl利用热带玉米自交系中快速生长胚胎发生细胞悬浮培养物分离出的原生质体进行了研究.在各种培养条件下,包括在一薄层液体培养基上或玉米细胞的滋养层上的原生质体培养,获得了能产生育性植株的胚胎发生愈伤组织.     

教学用的植物培养药盒

岩城玻璃公司从4月开始销售面向高校生物教材的植物培养盒.商品名为“人参培养盒”.一套包括人参愈伤细胞和试管的既成品的增殖用培养基(9种)、茎叶分化培养基(10种)、长根培养基(10种)、试验管和手册等.价格为1.8万日元.如使用这种药盒,仅学习简单的无菌操作就能将培养细胞移植到培养基上,使其分化茎叶和根.学生通过这种实验可了解植物细胞的全能性.现在除一部分农业高校,几乎没有进行组织培养方面的实习.在教育部门这种需要是很强的.这次的药盒省略从最困难的植物中采取的细胞的初代培养的过程、能简便地培养植物也是有魅力的.岩城玻璃公司除销售用玻璃的塑料和培养器和试药等用于培养研究的设施外,还瞄准开发教材用的.另外计划将来作为标准试药开发这种细胞体.     

NK4基因转染对人卵巢癌细胞SKOV-3生物学特性的影响

目的 通过在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4基因表达片段,研究NK4对人卵巢癌的治疗作用,从而验证NK4可作为卵巢癌潜在的基因治疗新策略.方法 用NK4和荧光霉素表达质粒分别稳定转染人卵巢癌细胞SKOV-3.用West-ern blot检测细胞培养基中NK4蛋白表达,以及经不同培养基(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4培养上清)培养后SKOV-3细胞中c-Met和磷酸化-c-Met的表达.用MTT试剂盒绘制细胞生长曲线.用细胞划痕试验检测NK4对细胞转移的作用.结果 在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3,SKOV-3/LUC)细胞中无表达.磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照(SKOV-3,SKOV-3/LUC)细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达.c-Met表达在各组差异无统计学意义.三种细胞体外生长曲线差异无统计学意义(P＞0.05).细胞划痕试验表明SKOV-3/NK4划痕区域的细胞个数明显少于SKOV-3和SKOV-3/LUC细胞.结论 NK4蛋白在SKOV-3/NK4细胞培养基中大量分泌,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化,并能抑制卵巢癌细胞体外活动能力,为应用NK4作为卵巢癌基因治疗方法提供了研究基础.     

从多花野牡丹和野牡丹花柄直接诱导出芽

1植物名称多花野牡丹(Melastoma affine)和野牡丹(M.candidum). 2材料类别野外生长并处于开花期的花柄和幼嫩叶片. 3培养条件 MS基本培养基,含2%蔗糖、0.6%琼脂,pH 5.4.诱导培养基:(1)MS NAA 1.0 mg·L-1(单位下同) 6-BA 1.0,(2)MS 6-BA 1.0,(3)MS NAA 1.0;芽的生长增殖培养基:(4)MS NAA 0.5 6-BA 3.0;生根培养基:(5)MS IBA 0.1.培养温度(27±3)℃,光照度1100lx,光照时间10 h·d-1.4生长与分化情况嫩叶外植体先以洗洁精刷洗干净后,以0.1%升汞消毒8 min,并以无菌水清洗,切成2～3段放在诱导培养基上暗培养.花柄外植体经0.1%升汞消毒10 min后,以无菌水清洗.剥去花柄表面的粗糙皮层,然后将其切成0.3 cm长的切段,接种于诱导培养基上暗培养.     

搅拌生物反应器中杂交瘤细胞生长与破损的初步研究

采用连续悬浮培养技术,在３种培养基组成下实验考察了生物反应器中机械搅拌强度和气泡对细胞生长和破损或伤害的作用,发现杂交瘤细胞在无血清培养基中培养时,１２０ｒ／ｍｉｎ的机械搅拌强度对细胞产生了生理伤害作用,而造成细胞破损的主要是气泡。血清和ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８对细胞均有保护作用,它们的存在能保护细胞免受流体剪切的生理伤害作用,适应更高的机械搅拌强度,ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８能有效地防止气泡对细胞的破损作用。另外,对它的保护作用机理也作了讨论。     

植物肽类生长因子--植物硫肽激素-α

植物硫肽激素α(phytosulfokine-α,PSK-α)是一个硫酸酯化的五肽,最初是从石刁柏叶肉细胞培养物的条件培养基中分离到的.它是在植物中发现的第一个肽类生长因子,在很低浓度下就能强烈地刺激低密度培养的植物细胞的增殖.此外,它还能促进植物细胞分化、器官发生和体细胞胚发生.由于它有分布的广泛性和极低的作用浓度,因此越来越受到人们的关注.该文介绍PSK-α的发现、生理功能、基因的结构特点、前体的结构与加工、基因转化与表达、受体以及研究前景.