转基因和基因敲除内脂素对小鼠脂肪积累的对比研究

目的内脂素（visfatin）也被叫做尼克酰胺磷酸核糖基转移酶,是一种脂肪因子,研究表明其与肥胖有关,但是与脂肪积累的关系仍然不明确,本研究是以内脂素转基因和内脂素基因敲除杂合子小鼠为对象,研究内脂素与脂肪积累的关系。方法 Western blot法对比分析转基因、基因敲除杂合子和野生型小鼠脂肪组织中内脂素表达水平。从2月龄开始对3种雌性小鼠饲喂高脂饲料,分别在2、4、6、8、9月龄测定其体重变化,并在9月龄时利用磁共振成像定性观测小鼠脂肪积累及分布,称量皮下和腹腔脂肪总重量并对腹腔脂肪组织进行组织学观察。结果内脂素转基因小鼠脂肪组织中内脂素的表达量比野生小鼠增加37%,基因敲除杂合子小鼠比野生小鼠降低了55%。饲喂7个月高脂饲料后,转基因小鼠体重平均27.8±0.8 g,野生小鼠体重平均33.6±1.1 g,基因敲除杂合子小鼠体重平均37.6±1.9 g。皮下和腹腔脂肪总重量测定结果显示转基因小鼠的脂肪总重量比野生小鼠降低了40%,基因敲除杂合子小鼠的脂肪总重量比野生小鼠增加了37%,组织学染色显示,内脂素转基因小鼠的平均单个脂肪细胞面积最小,而基因敲除杂合子小鼠面积最大。结果证实,内脂素表达量与体重、皮下和内脏脂肪总重量及脂肪细胞大小呈负相关。结论在饲喂高脂饲料的情况下,内脂素可以抑制脂肪的积累。     

Tg-visfatin×ob/ob小鼠表型特征与内脂素表达

目的研究Tg-visfatin×ob/ob小鼠的表型特征并探讨内脂素的作用。方法将visfatin转基因小鼠与ob（＋/-）小鼠杂交,获取visfatin转基因ob/ob小鼠（Tg-visfatin×ob/ob）,以ob/ob小鼠为对照,测定两种小鼠1～9月龄的体重变化,分别在3、5、9月龄测定其腹腔糖耐受和胰岛素耐受情况,并对其从9月龄～11月龄的死亡率进行统计。结果两种小鼠在1～9月龄的体重差异无显著性。腹腔糖耐受和胰岛素耐受实验显示,与ob/ob小鼠相比,3月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠的糖耐受受损及胰岛素耐受情况得以改善;5月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠仅糖耐受受损得以改善;9月龄时,Tg-visfatin×ob/ob小鼠具有更严重的糖耐受受损及胰岛素耐受。统计结果显示,从9月龄到11月龄之间,Tg-visfatin×ob/ob小鼠的死亡率比ob/ob小鼠提高了44.4%。结论 visfatin体内的高表达对ob/ob小鼠糖耐受和胰岛素耐受有影响,作用效果随着小鼠的年龄不同而变化,在早期起到代偿性的缓解ob/ob小鼠的糖耐受和胰岛素耐受的作用,到后期表现为失代偿性的加重了ob/ob小鼠的糖耐受和胰岛素耐受,并增加了小鼠的死亡率。     

有氧运动对肥胖大鼠内皮功能障碍和内脂素的影响

目的 探讨有氧运动对肥胖大鼠内皮功能障碍的影响及作用机制。方法 通过8周高脂饲料喂养建立肥胖大鼠模型,分为正常组、模型组和有氧运动组。运动组方案为8周的中强度有氧运动,每周干预6 d,休息1 d。称量大鼠的体重、体长,内脏重量和内脏脂肪重量,并计算Lee’s指数和脂体比;生化法检测血脂;ELISA法检测血清血栓调节蛋白(TM)和内脂素;RT-PCR法检测心外膜脂肪组织内脂素mRNA的相对表达量;HE染色法观察主动脉形态结构的病理变化。结果 与正常组相比,模型组大鼠体重、体长、Lee’s指数、内脏重量、内脏脂肪重量、脂体比、血清TG、TC、LDL、TM和内脂素水平均明显升高(P<0.05),HDL水平明显降低(P<0.01),心外膜脂肪组织中内脂素mRNA表达量明显升高(P<0.01);与模型组相比,有氧运动组体重、Lee’s指数、肝重量、肾周脂肪重量、血清TG、TC、LDL、TM和内脂素水平均明显下降(P<0.05),HDL水平明显升高(P<0.01),心外膜脂肪组织中内脂素mRNA表达量显著降低(P<0.05)。结论 有氧运动能减轻肥胖大鼠的脂肪堆...     

妊娠期糖尿病血清和脂肪组织内脂素的表达

目的:探讨妊娠期糖尿病孕妇内脂素水平与糖代谢的关系.方法:检测血清中内脂素、FIN、FIG水平,计算HOMA-IR,用RT-PCR法检测脂肪组织中内脂素mRNA的表达.结果:(1)妊娠期糖尿病组孕妇血清内脂素、FPG、HOMA-IR、FIN明显高于对照组.(2)妊娠期糖尿病组孕妇内脏脂肪组织中的内脂素的表达明显高于对照组,且妊娠期糖尿病组孕妇内脏组织中内脂素的表达明显高于表皮脂肪组织.(3)血清中内脂素的水平与内脏脂肪组织及HOMA-IR呈正相关.结论:妊娠期糖尿病孕妇脂肪组织中内脂素表达上调,导致血液循环中内脂素水平升高,参与GDM孕妇血糖调节.     

转基因小鼠和基因突变小鼠微卫星不稳定性分析

目的探讨微卫星在转基因和基因突变小鼠中的变化,为基因修饰和遗传突变动物的遗传检测和表型分析提供理论依据和技术手段。方法根据文献报道,从GenBank中选取198个等位基因数量多、富含多态性的微卫星位点,以野生型动物为对照,对6种近交系遗传背景的转基因小鼠和5种自然基因突变的近交系小鼠进行微卫星多态性检测,选用1.5%琼脂糖凝胶电泳和STR扫描技术,比较分析微卫星不稳定性。结果共有40个微卫星位点在转基因和基因突变小鼠中表现出多态性。在基因突变小鼠中,微卫星不稳定性有55.6%(10/18)是由纯合变为杂合(Ⅰ型),有3个位点(16.6%,3/18)是纯合突变(Ⅱ型),有5个位点同时存在2种类型的突变。但是在转基因动物中,大多数的微卫星多态性为Ⅰ型突变(87.5%,28/32),只有2个位点(6.2%,2/32)是Ⅱ型突变。另外有2个位点同时存在2种类型的突变。结论基因修饰或基因突变可引起小鼠相关微卫星发生不稳定性,而且某些微卫星位点对基因改变敏感性较高。     

内脂素对老年大鼠脑组织损伤和炎症反应的影响分析

摘要 目的：探讨与分析内脂素对老年大鼠脑组织损伤和炎症反应的影响。方法：10个月龄老年健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只随机平分为两组-对照组与内脂素组,内脂素组给予腹腔注射重组人内脂素200 μg/次,对照组均给予等量蒸馏水灌胃,2次/w,连续给药4 w。对比两组给药前、给药第2 w、给药第4 w的逃避潜伏期、血清白介素(Interleukin,IL)-6与C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)含量,及给药第4 w的线粒体超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、海马与皮层区神经元凋亡率。结果：所有大鼠在实验期间均出现典型的绕池壁现象。两组给药前逃避潜伏期、血清IL-6与CRP含量对比差异无统计学意义(P>0.05),给药后两组第2 w、给药第4 w的逃避潜伏期、血清IL-6与CRP含量均降低(P<0.05),且内脂素组给药第2 w、给药第4 w的上述指标低于对照组,对比均有统计学意义(P<0.05);内脂素组给药第4 w的线粒体SOD、GSH-Px活性高于对照组,海马与皮层区神经元凋亡率低于对照组,经对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论：内脂素在老年大鼠的应用能缓解脑组织损伤,抑制炎症反应,有利于清除过量的自由基,降低神经元的凋亡率。     

转基因小鼠过表达人Lin28A/Lin28B对小鼠体重的影响

目的:Lin28是一种高度保守的RNA结合蛋白,对生物体的生命活动具有重要的调节作用.为了研究人Lin28A与Lin28B基因的功能,我们构建了分别过表达人Lin28A或Lin28B基因的两种转基因小鼠,表型分析发现小鼠体重变化,为研究Lin28A和Lin28B基因的生物学功能提供模型动物.方法:分别将人类Lin28A与Lin28B cDNA插入PCAG启动子下游,构建Lin28A与Lin28B转基因表达载体,通过显微注射方法,分别建立Lin28A转基因小鼠与Lin28B转基因小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因型,筛选出人类Lin28A与Lin28B表达的小鼠,统计两种转基因小鼠体重变化.结果:①经PCR鉴定与公司测序证明Lin28A和Lin28B两种载体构建成功.②PCR鉴定小鼠基因型,筛选出可以特异性表达人Lin28A或Lin28B的转基因小鼠,并比较转基因小鼠与同窝野生型小鼠体重,发现两种转基因小鼠体重均大于同窝野生型小鼠,说明在小鼠体内过表达Lin28A或Lin28B均能引起小鼠体重增加.结论:人Lin28A与Lin28B在转基因小鼠体内能正常表达,并且能发挥生物学功能.又因为Lin28A和Lin28B在小鼠体内过表达会引起小鼠体重增加,我们推测其可能通过影响小鼠糖代谢过程引起小鼠体重改变.构建的Lin28A和Lin28B的转基因小鼠为进一步研究Lin28A和Lin28B在人新陈代谢、生长和发育过程中的作用提供了动物模型.     

转基因小鼠和基因敲除小鼠

能够把基因功能作为生物体表现来观察的改变了基因的小鼠。即使在基因组信息泛滥的今天,这也是最重要的工具之一,基本原理的研究虽然很早,但目前仍在进行改良法的开发工作。本文由基因控制株式会社的三谷匡董事予以阐述。[编者按]     

24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析

目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因（Dhcr24）转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴定Dhcr24转基因小鼠的基因型,RT-PCR和Western Blot检测基因表达水平,血生化检测仪检测转基因小鼠血生化指标的改变。结果建立了2个不同表达水平的Dhcr24转基因小鼠品系,转入的Dhcr24基因在肝和脾组织中的表达高于内源的Dhcr24。血生化检测证实：乳酸脱氢酶（LDH）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）和血肌酐（SCr）较野生型小鼠明显降低,而高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）和碱性磷酸酶（ALP）较野生型小鼠明显增加,并且Dhcr24转基因雌鼠的体重比野生型小鼠明显降低,均有显著差异。但Dhcr24转基因雄鼠各项指标与野生型小鼠相比没有显著差异。结论成功建立了全身表达Dhcr24转基因小鼠,并证实Dhcr24基因对雌性小鼠的体重和血生化指标,包括LDH,TP,Alb,SCr,HDL-c and ALP具有明显的影响。     

化疗对恶性肿瘤患者的血糖影响的初步观察

目的:探讨化疗对恶性肿瘤患者血糖的影响。方法:取我院2005年3月至2006年12月收治的恶性肿瘤患者155例。回顾性分析其化疗前后的血糖变化情况及相关临床资料。结果:155例患者中,化疗后空腹血糖升高者占13．55%(21/155),其中糖耐量低减8人,占5．16%(8/155);诊断为糖尿病者7人,占4．52%(7/155);一过性血糖增高6人,占3．87%(6/155)。各患者化疗前后血糖值的变化有统计学意义(p＜0．05)。结论:恶性肿瘤患者接受化疗后可引起血糖增高,甚至发生糖耐量低减或2型糖尿病,且多发生于化疗的第3～4周期。     

Meox1在心脏过表达引起转基因小鼠扩张性心肌病

目的建立心脏特异表达Meox1转基因小鼠,研究Meox1对心脏发育及心肌病的调节作用。方法利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体,显微注射法建立Meox1转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测Meox1在心脏组织中的表达,心脏超声检测转基因小鼠及野生小鼠的心脏结构和功能。结果在生理状态下,Meox1基因只在幼鼠心脏中表达,在病理状态下,Meox1基因在成年心肌病小鼠的心脏组织表达升高。通过显微注射,建立了两个Meox1基因在心脏组织的表达水平明显高于同龄对照小鼠的转基因小鼠品系。与野生型小鼠相比,两个Meox1转基因小鼠品系收缩期左室内径分别增加7.2%、12.8%（P〈0.01,n=16）,舒张期左室内径分别增加15.6%、24.2%（P〈0.01,n=16）,收缩期容积分别增加36.8%、65.7%（P〈0.01,n=16）,舒张期容积分别增加18.2%、33.8%（P〈0.01,n=16）。射血分数分别减小6.6%、9.3%（P〈0.05,n=16）,短轴内径缩短率分别减小9.4%、12.3%（P〈0.05,n=16）。结论Meox1在心肌病心脏中表达,其在心脏高表达引起心脏左室内径增加,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数及短轴缩短率减少等扩张性心肌病表型,是参与心肌病病理发生的基因之一。     

定期血糖监测对糖尿病患者血糖控制及生活方式的影响

目的:探讨定期血糖监测对糖尿病血糖控制及生活方式的影响。方法:随机抽取我中心2010-2011年度确诊的老年2型糖尿病患者110例,随机分为干预组和对照组,每组各55例;2组均接受正规降糖药物治疗及生活方式指导,干预组每周进行一次血糖监测,每3个月测一次糖化血红蛋白,对照组按患者意愿测定血糖指标,通过12个月的观察,研究两组患者在血糖控制及生活方式上的差异。结果:干预组患者空腹血糖(FPG)由定期监测血糖前的(7.26±1.36)mmol/L降至(6.68±1.10)mmol/L;餐后2小时血糖(2HPG)由定期监测血糖前的(12.34±2.29)mmol/L降至(11.09±1.98)mmol/L;糖化血红蛋白由监测前的(7.99±1.61)%降至(6.60±0.87)%;差异具有显著性(P<0.05);生活方式亦有明显改善,差异具有显著性(P<0.05);而对照组的改变不如干预组。结论:通过定期血糖监测可以有效地控制血糖、糖化血红蛋白,促使老年2型糖尿病患者改变不良生活方式。     

回春医疗保健操运动对老年2 型糖尿病患者血糖和血脂水平的影响

目的：探讨规律性回春医疗保健操运动对2 型糖尿病老年患者血糖、血脂水平的影响。方法：选择28例老年2 型糖尿病患者 为研究对象,并将其随机分为运动干预组和对照组。运动干预组在前期药物治疗和饮食控制不变的情况下,采用为期12 周回春 医疗保健操进行运动干预,对照组仅给予药物治疗和饮食控制,而不进行运动干预,监测和比较两组患者实验前后血糖、血脂等 指标的变化。结果：运动干预组患者接受12 周回春医疗保健操干预后,受试者空腹血糖、胆固醇、低密度脂蛋白水平均较运动干 预前显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论：长期的规律性回春医疗保健操运动可有效降低老年2 型糖尿病患者血糖、 血脂水平,且安全易操作,可作为老年2 型糖尿病的临床辅助疗法。     

心脏特异性高表达hAPE1基因小鼠的构建与鉴定

本研究拟建立心脏特异性表达hAPE1转基因小鼠,为研究hAPE1基因功能及其突变与心脏发育和心血管疾病的关系提供工具动物。将人APE1(human APE1,hAPE1)基因插入到心脏特异性启动子α-肌球蛋白重链(α-MHC)下游,构建了心肌细胞特异性表达hAPE1的转基因表达载体,显微注射法导入C57BL/6J小鼠受精卵中,经胚胎移植获得转基因首建者小鼠,建立hAPE1转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠基因型,Western blotting鉴定h APE1蛋白在心脏中的表达并筛选高表达的转基因品系。研究表明,将含有心肌细胞特异性α-MHC启动子和hAPE1基因的转基因载体进行显微注射于小鼠胚胎中,接着将胚胎移植入假孕母鼠的输卵管中发育,建立了心脏组织特异性高表达hAPE1转基因小鼠品系,获得子代小鼠40只。PCR检测发现有15只小鼠在其基因组上整合有hAPE1基因,Western blotting检测hAPE1在这些小鼠心脏中高度特异性表达。本研究成功获得了在小鼠心肌细胞中特异性表达hAPE1的转基因小鼠,为研究基因在心脏发育与相关疾病中的功能提供了有利的工具。     

miR-106b转基因小鼠的建立

目的:建立miR-106b转基因小鼠模型,探讨其在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)发病中的作用。方法:构建miR-106b表达载体,显微注射法建立miR-106b转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,real time RT-PCR检测miR-106b转基因小鼠脑组织中miR-106b的表达情况,Western blot检测miR-106b转基因小鼠脑组织中TGFBR2蛋白的表达。结果:构建了高表达miR-106b转基因小鼠;与对照相比,miR-106b转基因小鼠脑组织中TGFBR2蛋白的表达升高。结论:miR-106b转基因小鼠的建立为研究该microRNA在AD发病中的作用提供了工具。     

影响Ⅱ型糖尿病动物模型KK／Upj—A^y／J小鼠血糖的因素

目的探讨营养,年龄及性别等因子对Ⅱ型糖尿病动物模型-KK／Upj-A^y／J小鼠血糖的影响。方法尾部取血,用血糖仪测定实验组和对照组动物的血糖并进行实验分析。结果实验组血糖值明显高于对照组;实验组发病动物的比例也明显高于对照组动物;对照组8月龄小鼠血糖值低于糖尿病的发病标准;实验组年龄对动物的血糖影响较小;实验组和对照组性别基本不影响动物的血糖。结论（1）在同样携带A^y黄色肥胖糖尿病基因的遗传作用的条件下,饲料中的营养成分是影响小鼠血糖的主要因素,（2）动物的年龄是影响血糖的另一主要因素。（3）性别对动物血糖的影响不大。     

应用荧光原位杂交检测EB病毒BNLF-1基因在转基因小鼠子代染色体上的整合及其定位

应用荧光原位杂交技术研究了EB病毒潜伏膜蛋白基因(BNLF-1)在转基因小鼠子二代染色体上的整合及其定位。结果在两只子二代转基因小鼠中,分别观察80个和60个分裂相,出现杂交信号的核型分别为27和18个,检出率为33.8％和30％。转基因分别整合在14号染色体和10号染色体上。提示转基因BNLF-1已稳定整合到转基因小鼠的染色体上,并通过生殖细胞遗传给子代;推测转基因原代鼠的转基因整合可能是随机的多位点整合。     

hOPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型的建立

目的:建立带有人类骨保护素OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型,为OPG体内转录水平的表达调控研究和药物筛选创造条件。方法:将克隆到的人类OPG基因5′端上游6.0kb非翻译序列作为启动子,大肠杆菌编码β半乳糖苷酶的LacZ基因作为报告基因,构建表达载体pCINeoOPGLacZ。经显微操作注射到受精卵原核中,经PCR以及Southern印迹杂交鉴定转基因阳性小鼠;用RTPCR分析LacZ在组织中的表达;利用邻硝基苯βD半乳吡喃糖苷(ONPG)作为底物反应后比色分析组织中的β半乳糖苷酶活性。结果:构建完成的表达载体pCINeoOPGLacZ质粒经酶切和测序鉴定序列正确,线性化后显微注射。PCR以及Southern印迹杂交鉴定获得了10只转基因小鼠(Founders),经交配繁育,建立了5个转基因小鼠系,RTPCR分析表明其中一个系小鼠组织中表达LacZ基因,与内源OPG表达模式一致,组织中可以广泛检测到相应的β半乳糖苷酶活性。结论:成功建立了人类OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠,为体内研究OPG转录水平的表达及药物筛选提供了理想的动物模型。