封闭群斑马鱼的遗传生化标记研究

目的通过对AB、LF、ST（short tail,本地短尾群）三个封闭群斑马鱼的研究比较,建立封闭群斑马鱼的遗传生化标记。方法依照国标GB／T14927.1-2008的遗传操作规程优化实验条件,对三种群斑马鱼的7个遗传生化位点进行研究,以得到其遗传生化图谱。结果6-磷酸葡萄糖脱氢酶（Gpd）、过氧化氢酶（Ce）、苹果酸脱氢酶（Mod）、葡萄糖磷酸异构酶（Gpi）、酯酶（ES）位点表现出多态性。对三种群多态性位点进行卡方分析,Gpd、Gpi位点群间差异显著（P〈0.01）,Ce、Mod有群间差异（P〈0.05）。碱性磷酸酶（AKP）、乳酸脱氢酶（LDH）位点,各品系谱带较一致,未见同工酶多态性。结论Gpd、Ce、Mod、Gpi、ES可作为3种封闭群斑马鱼群间评价的生化标记,通过进一步研究,可建立封闭群斑马鱼的遗传标准。     

近交系剑尾鱼的STR遗传检测技术

目的建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制。方法以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR（short tandem repeat）引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同。设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物。结果有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物（AY204223）的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同。这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系。结论STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

BALB/c小鼠遗传质量检测的新方法

目的比较随即扩增多态性方法（RAPD）、微卫星方法（STR）与生化标记方法对近交系小鼠遗传质量检测的差异,为近交系动物遗传质量控制提供一种分子生物学方法。方法提取近交系小鼠BALB/c基因组DNA,用6条RAPD引物和20对STR引物对其进行PCR扩增,用生化标记法检测13个位点。结果在6条RAPD引物中,引物2（p2）、引物3（p3）、引物5（p5）和引物6（p6）这四条引物扩增的条带出现差异,表现为不同的RAPD图谱;在20对STR引物中,引物2、4、10和11,这四对引物扩增的条带出现差异,表现为不同的STR图谱;13个生化标记位点中,过氧化氢酶-2（Ce-2）等6个生化位点发现杂合基因。结论RAPD和STR可用于验证生化标记方法的实验结果,并用于保证近交系动物的遗传质量。     

利用多重荧光STR技术分析上海地区7品系常用近交系小鼠核心群的遗传特性

目的比较上海地区7品系常用近交系小鼠核心群的遗传特性。方法将筛选到的48对多态性丰富的微卫星引物组合优化,形成11组多重荧光PCR引物混合体系,对来自上海地区两大实验小鼠供应商的7品系近交系小鼠核心群的DNA样进行分型检测。利用遗传分析软件进行数据分析。结果来自两大供应商的7品系近交系小鼠在48个微卫星位点上都为纯合子。同一种群内小鼠的STR位点结果均一致;不同种群小鼠无论品系是否相同,相互间均存在STR位点差异。但相同品系不同种群近交系小鼠间的遗传距离与不同品系小鼠种群间的遗传距离相比均较近。在UPGMA聚类树中,相同品系的不同种群均首先两两聚成一类。C57BL/6小鼠与其他6品系小鼠的亲缘关系均较远。结论上海地区不同供应商的7品系近交系小鼠核心群间均存在STR位点差异。     

布氏田鼠封闭群遗传结构的随机扩增多态DNA分析

目的使用随机扩增多态DNA标记建立标准化的布氏田鼠封闭群遗传质量控制分子标记库。方法使用高盐沉淀法从鼠尾中提取布氏田鼠基因组DNA。采用40条PRAD引物对布氏田鼠封闭群进行PCR扩增,琼脂糖电泳分离条带,参考标准分子量标记计算条带大小,并使用多态位点数、单态位点数以及多态位点比率评价种群的遗传多样性。结果筛选出8个能获得清晰稳定扩增条带的RAPD标记。这8个RAPD标记检测到的多态位点数存在明显差异。8个引物得到的遗传多态位点的数据之和能揭示种群的遗传结构。结论本实验建立了检测布氏田鼠封闭群遗传结构的RAPD标记。     

锥栗种群在鼎湖山三个群落中的遗传分化研究

采用扩增片段长度多态性（AFLP,Amplified fragmen length polymorphism)方法对锥栗（Castanopsis chinensis)在3个不同群落亚种群的遗传分化进行了研究。研究地点位于广东省鼎湖山,3个群落分别是：针叶林群落,针阔叶混交林群落,常绿阔叶林群落。采集的叶要进行DNA提取,酶切、连接、PCR扩增后进行变异性聚丙烯酰胺的凝脉电泳,银染后把所得带进行1／0标记。结果表明,四组引物对分别扩增出27,20,33,39条带,其中分别有15,15,18,26条是多态性带,说明其多样性较高。用AMOVA（Analysis of molecular variance) 分析表明75．36％的遗传变异表现在种群内,24．64％的遗传变异表现在种群间,极显著（P＜0．001）。使用Nei遗传距离进行了算术平均数的非加权成组配对法(UPGMA）。其聚类结果表明常绿阔叶林群落亚种群和针阔叶混交林群落亚种群的种群聚合在一起。上述结果说明锥栗不同亚种群有不同的遗传多样性,种群间遗传分化较大。这是种群本身遗传特性的反映,并与群落演替密切相关,即不同群落微环境对种群遗传的影响。     

应用RAPD技术分析奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼的基因多态性(英文)

以随机扩增多态ＤＮＡ技术（ＲＡＰＤ）分析了奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼两个养殖群体的群体内及群体间遗传关系,并探讨了该技术在种群鉴定中的应用。ＲＡＰＤ引物筛选结果表明,所测试的２０个随机引物中（Ｔａｂｌｅ　１）,除一个引物未扩增出任何片段外,其余１９个引物均扩增出１～１１个大小不等的片段,长度大部分在５００～３０００ｂｐ之间,共扩增出２２０个片段,平均每个引物产生５．５个片段。两群体间共有片段７０条,大部分引物的扩增产物具有种间多态性,种群间相似系数为０．７２７。以筛选的引物对两种群不同个体（Ｆｉｇ．１,Ｔａｂｌｅ２）及种群混合样品（Ｆｉｇ．２,Ｔａｂｌｅ３）进行ＲＡＰＤ分析。结果表明,不同引物在扩增图谱上表现很大差异。奥利亚罗非鱼不同个体间表现为一致的扩增图谱,种内相似系数达１０００,显示了其种群内遗传变异的缺乏;尼罗罗非鱼种内相似系数为０．８２７,个体间存在不同程度的多态性;两个种群间的相似系数分别为０．７６７和０．７４２,表明种间有较高的同源性,遗传距离为０．２３５,略低于国外的报道、此外,两个养殖群体间的扩增图谱比较也暗示了遗传渐渗现象的存在。实验表明,ＲＡＰＤ标记可以作为一种可靠的遗传标记,用于不同鱼     

镜湖萼花臂尾轮虫（Brachionus calyciflorus）种群遗传多样性的季节变化

运用随机扩增多态DNA（RAPD）技术研究了于2005年春季和夏季采自芜湖市镜湖的萼花臂尾轮虫（Brachionus calyciflorus）种群基因组DNA多态性。从44个随机引物中筛选出10个谱带清晰、重复性好的引物。10个引物共检测到76个位点,其中65个位点显多态性,多态位点比例（P）为85.5%。对RAPD扩增结果进行聚类分析,基于遗传距离指数构建了萼花臂尾轮虫的UPGMA和ME系统树。经计算,各克隆平均遗传距离指数为0.5219,春季种群内遗传距离指数（0.4416）大于夏季种群内遗传距离指数（0.4304）;两季节种群间遗传距离指数为0.6010,明显大于季节种群内遗传距离指数。16个克隆分别聚在2个主要簇群中,在UPGMA系统树中,春季种群和夏季种群明显分聚在两个主要支系中;而在ME树中,除了夏季Su2克隆和春季种群聚到一个支系外,其它夏季种群则聚在一个独立支系中。上述结果表明,春季种群和夏季种群在遗传上具有较大的差异;镜湖萼花臂尾轮虫种群存在着明显的季节更替,而Su2克隆可能是春季和夏季种群间的过渡。     

应用RAPD技术分析奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼的基因多态性

以随机扩增多态DNA技术(RAPD）分析了奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼两个养殖群体的群体内及群体间遗传关系,并探讨了该技术在种群鉴定中的应用。RAPD引物筛选结果表明,所测试的20个随机引物中(Table 1),除一个引物未扩增出任何片段外,其余19个引物均扩增出1～11个大小不等的片段,长度大部分在500—3000bp之间,共扩增出220个片段,平均每个引物产生55个片段。两群体间共有片段70条,大部分引物的扩增产物具有种间多态性,种群间相似系数为0.727。以筛选的引物对两种群不同个体(Fig．1,Table 2)及种群混合样品(Fig.2,Table 3)进行RAPD分析。结果表明,不同引物在扩增图谱上表现很大差异：奥利亚罗非鱼不同个体间表现为一致的扩增图谱,种内相似系数达1000,显示了其种群内遗传变异的缺乏;尼罗罗非鱼种内相似系数为0．827,个体间存在不同程度的多态性;两个种群间的相似系数分别为0．767和0.742,表明种间有较高的同源性,遗传距离为0．235,略低于国外的报道．此外,两个养殖群体间的扩增图谱比较也暗示了遗传渐渗现象的存在。实验表明,RAPD标记可以作为一种可靠的遗传标记,用于不同鱼类种群的鉴定,RAPD分析方法是一种快速,简便且行之有鼓的鉴定鱼类种群的方法。     

纳米ZnO对斑马鱼肝脏生理生化指标的影响

研究了纳米ZnO对斑马鱼肝脏生理生化指标的影响。当斑马鱼暴露在ZnO纳米颗粒浓度为2.8 mg/L、5.6mg/L、11.2 mg/L、22.4 mg/L和44.8 mg/L时,分别测定了6 h、12 h、24 h、48 h和72 h时斑马鱼肝组织中的GSH、MDA、Na＋K＋-ATPase的含量和24 h ROS的变化,结果显示：与对照组相比,处理组中斑马鱼肝组织中GSH的含量显著减少（P〈0.05）,MDA含量随处理浓度的升高却显著增加（P〈0.05）,Na＋K＋-ATPase活性随暴露时间先显著降低后显著升高（P〈0.05）,24 h ROS含量高于对照组（P〈0.05）,说明斑马鱼肝组织的生理活动受到ZnO纳米颗粒的影响,且有时间和浓度依赖性。     

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、尿胱抑素C水平联合检测对肾功能评价的临床意义

目的：探讨中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、胱抑素C和免疫球蛋白水平检测在儿童过敏性紫癜（HSP）早期肾损害诊断中的应用价值及相关性。方法：将60患儿分为HSP普通型组30例、HSP肾型组30例,另随机选择同期门诊体检儿童60例为对照组,检测受试者血浆NGAL、尿胱抑素和免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）的水平。结果：3组患儿NGAL、胱抑素C和IgA水平比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;3组IgM、IgG之间比较,差异无统计学意3k（P〉0．05）。HSP肾型组较NGAL、胱抑素c和IgA含量高于对照组,差异有统计学意义（x。122．4,28．3,19．7,P〈0．05）;HSP肾型组NGAL、胱抑素C和Iga含量高于HSP普通型组,差异有统计学意义（x^2=25．7,32．6,22．1,P〈0．05）。NGAL与胱抑素C呈正相关（r=12．36,P〈0．05）;NGAL与IgA呈正相关（r=17．01,P〈0．05）;胱抑素C与IgA呈正相关（r=22．25,P〈0．05）。结论：NGAL、胱抑素和免疫球蛋白水平对于HSP的诊断具有一定的价值,尤其对患儿肾功能早期损害的诊断,早期联合检测三者的水平,适时地给予预防性治疗,对保护HSP患儿的脏器功能、改善预后具有重要的临床意义。     

miR-335对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的:通过研究miR-335对骨肉瘤细胞系SOSP-9607增殖和迁移的影响,探讨miR-335在骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法:体外培养SOSP-9607细胞并将其分三组,分别为实验组、阴性对照组和空白对照组。实验组转染miR-335模拟物(has-miR-335 mimics),阴性对照组转染阴性对照序列(negative control,NC),空白对照组细胞不行任何转染。采用噻唑蓝(MTT)比色实验法检测和比较细胞处理24、48、72和96 h的增殖情况,采用Transwell实验检测和比较各组细胞的迁移情况。结果:MTT结果显示,实验组细胞48、72和96 h增殖率较阴性对照组明显降低(P0.01),而阴性对照组及空白对照组细胞增殖率比较未见明显差异(P0.05)。在Transwell迁移和侵袭实验中,与阴性对照组比较,实验组细胞的侵袭及迁移能力也明显降低(P0.05),而两对照组细胞迁移及侵袭能力也无明显差异(P0.05)。结论:miR-335可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖及迁移,有望成为骨肉瘤治疗的新靶点,值得深入研究。     

不同浓度舒芬太尼复合罗哌卡因鞘内注射在剖宫产术后镇痛中的应用评价

目的：探讨不同浓度舒芬太尼复合罗哌卡因鞘内注射应用于剖宫产术后镇痛的有效性及安全性。方法：将1460例行剖宫产术患者随机分为A组（489例）、B组（501例）和C组（470例）。所有患者均采用腰硬联合阻滞,分别给予0.3μg/mL、0.4μg/mL、0.5μg/mL舒芬太尼配伍0.1%盐酸罗哌卡因。结果：B组、C组术后2h、8h、12h VAS评分显著低于A组,差异均有统计学意义（P〈0.05）,而该时间点B组、C组VAS评分比较则无显著性差异（P〉0.05）。三组术后24h VAS评分比较均无统计学意义（P〉0.05）。B组、C组术后镇痛泵按压有效率较A组显著升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）,而B组、C组比较则无显著性差异（P〉0.05）。A组和B组不良反应的发生率分别8.0%和10.2%,显著低于C组20.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：0.4μg/mL舒芬太尼＋0.1%盐酸罗哌卡因应用于剖宫产术后镇痛,可有效缓解术后早期的疼痛,并减少不良反应。     

频谱水对SPF级KM小鼠的抗疲劳作用

目的探讨频谱水对SPF级KM小鼠的抗疲劳作用。方法将75只雄性SPF级KM小鼠随机地分成三组,分别给予三种不同的实验处理,30 d后测定受试小鼠负重游泳时间、血清尿素、肝糖原和血乳酸含量,并进行统计学分析。结果统计分析结果显示：（1）负重游泳致死时间和肝糖原含量,A、B、C三组之间差异不显著（P〉0.05）;（2）A组的血清尿素含量显著高于B组和C组（P〈0.01）,但B组和C组之间差异不显著（P〉0.05）;（3）在三个时间点分别测定各组小鼠血中乳酸含量,其中A、B两组小鼠的血乳酸含量显著高于C组（P〈0.05）,且游泳后休息30 min,A组小鼠的血乳酸含量又显著高于B组（P〈0.05）。结论频谱水对SPF级KM小鼠抗疲劳有一定的作用,但不具有统计学意义。     

不同质子泵抑制剂对冠脉支架植入术后氯吡格雷联合阿司匹林抗血小板作用的研究

目的:通过比较奥美拉唑和泮托拉唑对冠状动脉支架术(PCI)后患者血小板功能指标和主要不良心血管事件与出血并发症发生情况,探讨不同质子泵抑制剂对PCI后氯吡格雷联合阿司匹林抗血小板作用的影响。方法:60例实施PCI后常规联合抗血小板治疗(氯吡格雷75mg/d+阿司匹林100mg/d)患者随机分为奥美拉唑组(40mg/d,20例),泮托拉唑组(40mg/d,20例)和对照组(20例),连续用药30d。分别在服药前1d及服药15d,30d用血栓弹力图检测ADP途径诱导的血小板抑制率值和比浊法检测ADP途径诱导的血小板最大聚集率(MPAR)。并观察30d各组主要不良心血管事件和出血并发症的发生情况。结果:①奥美拉唑组和泮托拉唑组与对照组相比,服药前1d及服药15d,30d用血栓弹力图检测的血小板抑制率和比浊法检测的血小板最大聚集率(MPAR)均无明显变化;奥美拉唑与泮托拉唑组间比较,差异也无统计学意义。服药15d,30d与服药前1d相比,每组血小板抑制率明显升高,血小板最大聚集率明显下降,差异有统计学意义(P0.05);但15d和30d相比较,差异无统计学意义。②三组比较心血管事件发生率相近,差异无统计学意义(P0.05);奥美拉唑组和泮托拉唑组比较,心血管事件发生率也无统计学差异(P0.05)。③与对照组比较,奥美拉唑组和泮托拉唑组胃肠道出血发生率均明显减少,有统计学意义(P0.05),但两服药组间比较,出血发生率无明显区别,差异无统计学意义(P0.05)。结论:氯吡格雷联合阿司匹林具有增强血小板抑制,降低血小板凝聚的作用,而不同机制质子泵抑制剂奥美拉唑与泮托拉唑对PCI术后氯吡格雷联合阿司匹林抗血小板治疗患者的血小板功能无明显影响,不降低对心血管事件的预防效果,同时明显降低患者胃肠出血事件的发生率。     

术中静脉不向剂量右美托咪啶对全髋置换术患者术后患者芬太尼静脉自控镇痛效果的影响

目的：观察气管内全身麻醉下行全髋置换术患者,术中静脉应用不同剂量右美托咪定对术后芬太尼静脉自控镇痛效果的影响及相关不良反应发生的情况。方法：选择择期在气管内全麻下行全髋置换术的患者60 例,ASA Ⅰ ～Ⅱ级,年龄47～78 岁,体重42～79 kg。患者随机分组法分为3 组（n=20）：C 组（盐水对照组）、D1 组（右美托咪定0.5 μg/kg 组）和D2 组（右美托咪定1 μg/kg组）,在手术结束前约1 小时按分组分别给予生理盐水和右美托咪啶,术后镇痛使用芬太尼静脉自控镇痛24 h。记录患者术后2h、2～6 h、6～12 h、12～24 h芬太尼的用量;VAS 评分法评估患者术前、术后2 h、6 h、12 h、24 h 时的疼痛程度;记录镇痛期间恶心呕吐、皮肤瘙痒及过度镇静等不良反应发生的情况。结果：术后2h 和术后2～6 h芬太尼用量D1组和D2 组较C 组减少（P＜0.05）,但D1组和D2 组之间比较无差异（P＞0.05）;而术后6～12 和12～24 h三组患者芬太尼用量无差异（P＞0.05）。术后2 h、2～6 hVAS评分D1 组和D2 组较C组减少（P＜0.05）,而D1组和D2 组之间比较无差异（P＞0.05）;术后6～12、12～24 h三组患者VAS 评分无差异（P＞0.05）。与C 组比较,D1 组和D2 组镇痛期间恶心呕吐发生率降低（P＜0.05）,余不良反应各组之间比较无差异（P＞0.05）。结论：气管内全身麻醉下行全髋置换术的患者,术中静脉应用右美托咪啶可在术后6 h内增强芬太尼镇痛的效果减少芬太尼的用量,但增大剂量效果并不增加而作用时间也不延长。     

蛇伤凉血合剂治疗毒蛇咬伤致急性肾损伤临床观察

目的探讨中西医结合救治毒蛇咬伤所致急性肾损伤（AKI）的临床疗效．方法将毒蛇咬伤致AKI病人49例随机分成两组,对照组（n=25）和治疗组（n=24）．对照组给予西医常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上加服蛇伤凉血合剂．疗程7～14天。结果治疗组少尿持续时间（5±3）天。对照组为（8±5）天,组间差异有显著性意义（P〈0．05）;治疗组4例（16％）行透析治疗,对照组10例（41％）行透析治疗,差异有显著意义（P〈0．05）,两组疗效比较差异显著（P〈0．05）。结论蛇伤凉血合荆能显著提高毒蛇咬伤致AKI的疗效。