局部5-氨基酮戊酸光动力学疗法在皮肤真菌感染中的应用

局部5-氨基酮戊酸光动力疗法是利用光敏剂和光辐射治疗疾病的方法,目前多用于皮肤肿瘤、某些癌前病变和病毒疣等的治疗.皮肤真菌感染是一种常见病,由皮肤癣菌或念珠菌引起,使用标准抗真菌药物疗法治疗皮肤真菌感染,周期长,费用高,易出现耐药性;目前急需新的治疗方法.本文回顾了局部5-氨基酮戊酸光动力学疗法在体内、体外条件下对皮肤真菌感染的作用.     

光动力诊疗中的5-氨基酮戊酸及酯类衍生物的研究进展

5-氨基酮戊酸(ALA)是体表光动力疗法的一个重要前体药物,通过代谢产物原卟啉Ⅸ(PpⅨ)介导发挥光敏作用。ALA制剂的研发和优化促生了一系列产品和技术,不仅推动了体表光动力疗法的应用,而且ALA介导的PpⅨ荧光还可用于肿瘤的荧光可视化和辅助手术。本文将对光动力诊疗中ALA及其酯类衍生物和PpⅨ的研究进展作一个系统介绍。     

氨基酮戊酸光动力疗法治疗增生性瘢痕的进展

增生性瘢痕不仅对外形产生影响,破坏外形;对组织功能也会产生一定的影响,引起功能障碍。文章首先对增生性瘢痕做基础研究,包括增生性瘢痕的定义、病理以及形成因素,然后简单介绍了氨基酮戊酸光动力(ALA-PDT)在治疗增生性瘢痕的机制。     

5-氨基酮戊酸光动力疗法对不同疾病来源的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外杀伤作用

光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)利用光敏剂与光源反应后产生的活性氧,破坏细菌组分,进而致细菌死亡。其多靶位杀伤特性在治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)感染方面有应用前景,但相关研究尚处于起步阶段。本研究MRSA菌株取自烧伤、急性咽炎、鼻窦炎和肺炎4类临床常见MRSA感染性疾病患者,使用5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid,ALA)光敏剂、发光二极管光源,于体外检测ALA介导的PDT(ALA-PDT)对MRSA菌株的杀伤作用。结果显示,经5mmol/L ALA孵育1h后,给予360J/cm~2强光[(633±10)nm]照射1h,ALA-PDT对MRSA菌株具有1.80log_(10)cfu的有效杀伤作用。结果提示,在相同实验条件和参数下,ALA-PDT对上述4种疾病来源的MRSA菌株体外杀伤作用无统计学差异。     

5-氨基酮戊酸光动力联合伊曲康唑治疗着色芽生菌病1例

患者男,68岁。右前臂和手背丘疹、红斑块、鳞屑伴瘙痒6 a,疼痛、部分指功能障碍1 a。真菌直接镜检发现菌丝及厚壁孢子,皮肤病理组织检查真皮内见棕黄色厚壁孢子。诊断为着色芽生菌病。经2次5-氨基酮戊酸光动力联合伊曲康唑治疗,随访半年,疗效满意。     

5-氨基酮戊酸声动力疗法诱导人骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的:探讨5-氨基酮戊酸声动力疗法(5-ALA-SDT)对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞凋亡的影响。方法:对数生长期的U2-OS细胞随机分为空白对照组(control)、声敏剂组(5-ALA)、超声组(ultrasound),声动力组(5-ALA-SDT)。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光探针及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞内荧光定位,用DCFH-DA检测活性氧(ROS)的产生情况。结果:与单纯超声组,单纯5-氨基酮戊酸组和对照组相比较,5-氨基酮戊酸介导的声动力组细胞存活率(40.18%±1.35%)均明显下降(P0.01),细胞内荧光定位表明5-ALA扩散在细胞质和主要累积在U2-OS细胞线粒体内,并且5-氨基酮戊酸介导的声动力组ROS产生的百分率(34.3±2.4)%较单纯超声组、单纯5-氨基酮戊酸组和对照组明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论:5-氨基酮戊酸介导的声动力作用可能通过线粒体途径对诱导U2-OS细胞凋亡。     

5-氨基γ-酮戊酸及其己酯衍生物对几种细胞株的光动力作用

5 氨基γ 酮戊 (ALA)及其己酯 (He ALA)具有内源生成光敏剂的特点 ,在肿瘤光动力探测及治疗中显示出了优势。ALA及He ALA对神经母细胞瘤、肝癌细胞及成纤维细胞的光动力作用被研究比较。由特征荧光光谱证实 ,经ALA或He ALA培养后 ,三种细胞内均可生成原卟啉 (PpIX)产物。激光扫描荧光显微镜显示 ,在经ALA或He ALA培养后的神经母细胞瘤中 ,PpIX均以弥散方式分布在细胞质中。PpIX在三种细胞中的积聚动力学过程不同 ,随着ALA或He ALA培育时间的增长 ,PpIX在肝癌细胞及成纤维原细胞中的积累增加 ,而在神经母细胞瘤中PpIX在 8h后已达到饱和。此外 ,在同样的培育条件下 ,神经母细胞瘤中PpIX的生成浓度明显高于肝癌细胞及成纤维细胞。经ALA培养及光照射后 ,可使近 90 %的神经母细胞瘤失活 ;而在同样条件下却只能杀伤 5 0 %左右的肝癌细胞及成纤维细胞。揭示了神经母细胞瘤对ALA光动力作用有极高的敏感性 ,并适于光动力治疗。与ALA相比 ,He ALA可在三种细胞内造成与ALA相近的杀伤率 ,但所用的药物浓度却比ALA低 10倍 ,显示He ALA具有极高的光动力灭活效率。因此在内源光动力治疗中 ,He ALA是一种极具开发前景的新药物。     

不同浓度5-氨基酮戊酸对光动力方法抗白念珠菌效果的影响

目的通过测定白念珠菌内不同光敏剂浓度下生成原卟啉IX(Pp IX)的水平及5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-ALA-PDT)对白念珠菌的抑菌率,为临床选择最佳光敏剂浓度提供理论依据。方法制备白念珠菌悬液,与ALA避光孵育,采用激光共聚焦显微镜观察Pp IX产生情况,MTT法测定5-ALA-PDT对白念珠菌生长的抑制率。结果白念珠菌与ALA避光孵育后有荧光物质Pp IX产生,ALA光敏剂浓度与Pp IX强度呈正相关,当ALA浓度到达300 mg/m L时,Pp IX强度将不再增加。对照组无荧光物质出现。结论 ALA-PDT对白念珠菌抑制效应同光敏剂浓度密切相关。这为临床ALA-PDT治疗白念珠菌疾病提供了理论依据。     

重组枯草杆菌5-氨基酮戊酸脱水酶的纯化和性质研究

大肠杆菌中表达的枯草杆菌5-氨基酮戊酸脱水酶(5-aminolevulinate dehydratase, ALAD),其N端含有组氨酸标签,Ni-NTA 一步纯化至均一.纯化的酶比活为3.6 U/mg蛋白,酶的最适pH为8.0～10.0,Km为0.95 mmol,Vmax为16.7 mmol/h,在55 ℃温浴10 min,酶活保留85 %,2 mmol/L的K+、Zn2+、Mg2+、Li+、Fe3+和Mn2+提高酶活,2 mmol/L的Co2+和Ca2+对酶活没有显著影响,2 mmol/L的Cu2+和1 mmol/L的Hg2+完全抑制酶活.在2 mmol/L的EDTA存在下酶活性丧失,表明酶催化依赖金属离子.100 mmol/L的酮戊酸抑制酶活约50 %.10 mmol/L的2-巯基乙醇时提高酶活3倍,而100 mmol/L的二硫苏糖醇几乎完全抑制酶活.氨基酸修饰表明赖氨酸和半胱氨酸残基可能是酶催化必需的,组氨酸和丝氨酸残基对酶催化不起关键作用.     

5-氨基乙酰丙酸的光动力应用研究进展

对光合细菌、藻类及其它细菌的5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)产量进行了对比,类球红细菌(Rhodobacter sphaeoides)在黑暗、厌氧条件下培养,可产生大量的胞外5-ALA。5-ALA在农业生产中作为光动力除草剂、杀虫剂取得了很好效果。并且,ALA对提高植物的抗盐、抗冷冻能力也有一定作用。近年来,ALA在癌症治疗、肿瘤诊断方面也得到了广泛应用。     

光动力疗法抑制内膜增生的研究

内膜增生继发于各种血管损伤后,是当前血管外科领域的焦点这一,光动力治疗技术可有效抑制内膜增生,逐渐引起人们重视,但从实验研究到临床应用有较大差距。本文综述光动力治疗技术抑制膜增生的作用机理,应用方法,疗效及应用中存在的问题。     

基于5-ALA-TS-FA体外光动力疗法灭活HL60细胞实验研究

本文通过癌症靶向性分子叶酸(FA),硅壳包裹的TiO_2(TS)纳米颗粒和5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)进行结合形成新型光敏剂5-ALA-TS-FA,并研究其在光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)治疗白血病肿瘤细胞HL60中的灭活效果。实验采用表面修饰的方法成功制备了5-ALA-TS-FA纳米颗粒,表征样品通过透射电镜(TEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)、紫外-可见光吸收光谱(UV-Vis)等测试方法,通过加入不同浓度的复合纳米颗粒5-ALA-TS-FA与HL60细胞共育12 h,分别测量纳米颗粒的暗毒性和PDT灭活效应,其中PDT灭活效应采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测。实验结果表明,5-ALA-TS-FA复合纳米颗粒分散性良好;当药物浓度为100μg/m L与HL60细胞共育12 h后,5-ALA-TS-FA对HL60细胞的暗毒性较低,在光动力疗法中5-ALA-TS-FA灭活效率可达到74.65%,显著高于TiO_2和TS-FA的灭活效率。因此5-ALA-TS-FA作为一种潜在的光敏剂具备良好的应用前景。     

5-ALA表面修饰TiO2诱导的光动力疗法体外灭活HL60细胞实验研究

利用表面修饰的方法制备了5-ALA表面修饰的TiO2（5-ALA／TiO2）,并利用傅里叶红外光谱,拉曼光谱以及紫外-可见光吸收光谱（uV—Vis）对样品进行了表征。利用CellCountingKit-8（CCK-8）法检测研究5-ALA／TiO2对HL60细胞的灭活效应。结果显示,5-ALA／TiO2能够显著地抑制HL60细胞的生长,5-ALA／TiO2对HL60细胞的灭活效率要明显高于5-ALA以及TiO2,实验中5-ALA／TiO2的灭活效率达到77．9％,相衬显微镜细胞形态学无损观察表明,细胞凋亡开始于细胞膜的破裂。同时,激光显微拉曼光谱检测显示,TiO2纳米粒子能够进入细胞内部,与细胞发生相互作用。     

氨基酮戊酸光动力联合一清片治疗中重度痤疮效果及对血清学指标的影响

摘要 目的：观察氨基酮戊酸光动力联合一清片治疗中重度痤疮疗效以及对血清学指标的影响。方法：将93例中重度痤疮患者进行随机分组,31例为治疗组,31例为参照组1,31例为参照组2。治疗组采用氨基酮戊酸光动力联合一清片治疗,参照组1采用氨基酮戊酸光动力治疗,参照组2采用一清片治疗,观察三组治疗前、后患者痤疮严重程度分级系统(GAGS)评分、痤疮特异性生活质量量表（Qol-Acne）评分变化及性激素结合球蛋白（SHBG）、游离睾酮（FT）、雌二醇（E₂）、补体C3、免疫球蛋白IgG、IgM水平,比较三组临床疗效。结果：治疗组FT水平低于参照组1和参照组2（P＜0.05）,治疗组SHBG、E₂水平高于参照组1和参照组2（P＜0.05）,治疗组补体C3、IgG、IgM水平低于参照组1和参照组2（P＜0.05）,治疗组Qol-Acne评分较参照组1和参照组2高（P＜0.05）,治疗组GAGS评分较参照组1和参照组2低（P＜0.05）,治疗组总有效率（93.55%）高于参照组1（77.42%）和参照组2（64.52%）（P＜0.05）。结论：氨基酮戊酸光动力联合一清片治疗中重度痤疮患者,可调节患者内分泌,改善性激素水平及免疫状态,缓解患者痤疮症状,提升生活质量及临床疗效。     

靶向survivin 的siRNA 联合5-FU 转染抑制肝细胞株HepG2 增殖的研究

目的:研究靶向survivin的(小分子干扰RNA)siRNA和(氟尿嘧啶)5-FU联用对肝癌细胞HepG2的增殖抑制及凋亡的影响。方法:将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组、5-FU+siRNA转染组。转染采用脂质体法。RT-PCR法检测HepG2细胞survivin mRNA转录水平;MTT法检测靶向survivin的siRNA和5-FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果:空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组survivin mRNA表达无明显变化(P>0.05),siRNA转染组、5-FU+siRNA转染组survivin mRNA表达明显下降(F=280.326,q=4.72~7.34,P<0.05)。5-FU+siRNA转染组增殖抑制率为51.58%±1.35%,与其它各组相比抑制率明显增高(F=280.326,q=5.27~9.84,P<0.05)。5-FU+siRNA组与其它各组相比细胞凋亡率明显增高(F=13568.68,q=110.47～327.16,P<0.01)。结论:将靶向survivin的siRNA和5-FU联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

靶向survivin的siRNA联合5-Fu转染抑制肝细胞株HepG2增殖的研究

目的：研究靶向survivin的（小分子干扰RNA）siRNA和（氟尿嘧啶）5-FU联用对肝癌细胞HepG2的增殖抑制及凋亡的影响。方法：将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组、5-FU＋siRNA转染组。转染采用脂质体法。RT-PCR法检测HepG2细胞survivinmRNA转录水平;MTT法检测靶向survivin的siRNA和5．FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果：空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组survivinmRNA表达无明显变化（P〉0．05）,siRNA转染组、5-FU＋siRNA转染组survivinmRNA表达明显下降（F=280．326,q=4．72-7．34,P〈0．05）。5-FU＋siRNA转染组增殖抑制率为51．58％±1-35％,与其它各组相比抑制率明显增高（F=280．326,q=5．27-9．84,P〈0．05）。5-Fu＋siRNA组与其它各组相比细胞凋亡率明显增高（F=13568．68,q=110．47-327．16,P〈0．01）。结论：将靶向survivin的siRNA和5一Fu联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

5-氨基-4-氨甲酰咪唑核苷产生菌AIC-90菌种选育研究

已肌苷产生菌枯草杆菌GMI- 741(Ade - )为出发菌株 ,通过多因子诱变选育出具有非精确嘌呤缺陷型、丧失腺嘌呤脱氨酶的AICAR(5 -氨基 - 4-氨甲酰咪唑核苷 )产生菌AIC - 90 ,该菌株摇瓶发酵 72h产AICAR可达 2 0 .3g/L以上。     

猴头菌粉与5-氨基水杨酸联用抑制小鼠急性溃疡性结肠炎并提高肠道共生菌Parabacteroides distasonis丰度

猴头菌Hericium erinaceus是一种药食同源真菌,广泛应用于治疗胃肠道疾病,可采用液态发酵技术规模化量产获得菌丝体粉。本研究旨在分析猴头发酵菌粉(HE,300mg/kg/d)与5-氨基水杨酸(5-aminosalicylic acid,5-ASA,150mg/kg/d)联用对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的小鼠结肠炎的治疗作用。HE和5-ASA能够减轻小鼠急性溃疡性结肠炎症状,包括减轻体重的降低率和疾病活动指数评分(DAI)。HE和5-ASA联用可以显著抑制小鼠结肠组织炎症,通过降低肿瘤坏死因子-α(Tnf-α)和白细胞介素-β(Il-β)基因的表达。此外,利用16SrRNA基因测序技术对小鼠盲肠微生物群落组成及结构进行分析。HE与5-ASA联用可以重塑肠道微生态环境,并显著提高狄氏副拟杆菌Parabacteroides distasonis相对丰度。人体粪便体外发酵结果证实HE与5-ASA可以增加P. distasonis。综上,HE与5-ASA联用可有效抑制小鼠结肠炎症水平,并调节肠道微生物,可能是通过增加P. distasonis起作用。     

猴头菌粉与5-氨基水杨酸联用抑制小鼠急性溃疡性结肠炎并提高肠道共生菌Parabacteroides distasonis丰度

猴头菌Hericium erinaceus是一种药食同源真菌,广泛应用于治疗胃肠道疾病,可采用液态发酵技术规模化量产获得菌丝体粉。本研究旨在分析猴头发酵菌粉（HE,300mg/kg/d）与5-氨基水杨酸（5-aminosalicylic acid,5-ASA,150mg/kg/d）联用对葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）诱导的小鼠结肠炎的治疗作用。HE和5-ASA能够减轻小鼠急性溃疡性结肠炎症状,包括减轻体重的降低率和疾病活动指数评分（DAI）。HE和5-ASA联用可以显著抑制小鼠结肠组织炎症,通过降低肿瘤坏死因子-α（Tnf-α）和白细胞介素-β（Il-β）基因的表达。此外,利用16S rRNA基因测序技术对小鼠盲肠微生物群落组成及结构进行分析。HE与5-ASA联用可以重塑肠道微生态环境,并显著提高狄氏副拟杆菌Parabacteroides distasonis相对丰度。人体粪便体外发酵结果证实HE与5-ASA可以增加P. distasonis。综上,HE与5-ASA联用可有效抑制小鼠结肠炎症水平,并调节肠道微生物,可能是通过增加P. distasonis起作用。     

淋病奈瑟菌感染合并尖锐湿疣患者光动力疗法治疗后皮损处朗格汉斯细胞的变化及其免疫机制研究

探讨淋病奈瑟菌（NG）感染合并尖锐湿疣（CA）患者光动力疗法（PDT）治疗后皮损处朗格汉斯细胞（LC）的变化及其免疫机制,为该类患者的治疗提供参考。

前瞻性纳入2020年3月至2021年3月我院收治的103例NG感染合并CA患者作为观察对象,通过随机数字表法分为观察组（n=53）和对照组（n=50）,并纳入5例同期来本院进行包皮环切术的男性作为正常组。对照组患者采用CO₂激光治疗,观察组患者采用PDT治疗,正常组无治疗。采用酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测观察组、对照组患者治疗前后外周血中IL-2、IFN-γ水平,并比较两组患者临床疗效、复发率、不良反应发生率及21种人乳头瘤病毒（HPV）基因分布情况。采用免疫组化标记方法对观察组患者PDT治疗前后CA皮损组织和正常组中正常包皮组织进行染色,并于高倍光镜下观察LC的数量及形态变化,分析其免疫机制。

（1）观察组患者治疗总有效率显著高于对照组（98.11% vs 84.00%,P＜0.05）。（2）观察组患者疾病总复发率（7.55%）、不良反应总发生率（5.66%）均显著低于对照组（32.00%、40.00%）（均P＜0.05）。（3）治疗后,观察组患者IL-2、IFN-γ水平均显著高于对照组（均P＜0.05）。（4）103例NG感染合并CA患者中低危型HPV感染率为57.28（59/103）,高危型感染率为14.56%（15/103）,中危型感染率为5.83%（6/103）,混合感染率为22.33%（23/103）;同时观察组患者治疗后HPV清除率为83.02%,显著高于对照组的52.00%（P＜0.05）。（5）治疗前观察组患者LC数量较正常组显著偏少,胞体较正常组偏小,分布不规则,且多数LC结构不完整,不具备LC典型特征,部分皮损处表皮内无LC,但其真皮内可见到不典型的LC。（6）观察组患者皮损处治疗前LC数量较正常组显著偏少,治疗后LC数量即刻增加,治疗后7 d恢复至基线水平;同时正常组CD1a染色阳性细胞密度为6.48%,显著高于观察组患者治疗前后各时间点（均P＜0.05）。

PDT对NG感染合并CA患者的临床疗效显著,复发率及不良反应发生率较低,且可正向调节患者外周血IL-2、IFN-γ水平,参与机体特异性免疫应答,改变皮损组织中LC的数量和形态。