品制备对超薄切片的影响

电镜超薄切片的质量与组织块的硬度,组织的固定,清洗、脱水、浸透、包埋、包埋块的修整形状,切片机、玻璃刀、架刀角度和收集槽液面等因素都有密切的关系,标准的超薄切片应是厚度适中、均匀、平整、无刀痕、无颤纹和皱折。要想获得理想的超薄切片,作者认为     

一种简单实用的连续半薄切片技术

一种简单实用的连续半薄切片技术常规的半薄切片法有两种：一是干刀法，玻璃刀不装水槽，切一片，用尖头镊子夹取切片边缘，放到滴有蒸馏水的载玻片上。二是湿刀法，玻璃刀上安装水槽，切一片，待其在水中展开，用睫毛针从边缘捞起，放于载玻片的水滴中。在没有专用超薄切...     

玻璃刀刀槽接缝的密封

因玻璃刀价格便宜,制作简单,又容易获得非常锋利的刀刃,故在超薄切片中广为使用。用玻璃刀切片,一般都要在它的背部装上一个被称之为刀槽或水槽的不漏水的小容器,它通常用胶带缠绕而成。用胶带制成的刀槽必须将它与玻璃刀的接缝密封,否则就会漏水。密封剂一般为石腊,但用石腊密封必须事先融化,融化时还会污染空气,而且密封质量欠佳,容易漏水,对技术不熟练者尤其如此。尽管这样,国内许多电镜室或实验室还在继续使用,因此在电镜技术日新月异发展的今天,改进刀槽密封方法就显得十分必要。现将我们多年来采用的密封方法介绍如下:     

超薄切片玻璃“废刀”的再用

目前国内外电镜实验室在制作超薄切片时,绝大多数用玻璃刀。一般在切过一个组织块后,玻璃刀就不能再用。因此,制刀玻璃的耗量较大,且不易寻找合用的玻璃。四川医学院电镜室用“废刀”制成重制刀,方法较简便。现将重制方法及效果介绍如下:1.方法(1)去蜡除去玻璃刀上的胶布,将刀立放在几层柔软的纸上(斜面向下),置于约80℃烤箱中,使熔化的蜡被纸吸去。取出后再用软纸除去玻璃刀上残留     

生物样品冷冻超薄切片技术简介

电子显微镜超薄切片技术的发展开拓了组织学和细胞学的显微和亚显微结构的研究。但由于常规超薄切片术采用强烈化学囿定,有机溶剂脱水和塑料包埋等步骤所带来的结构损伤和分子活性散失等缺点,人们在光学显微冷冻切片和常规超薄切片基础上,近年来发展了冷冻超薄切片制样技术。七十年代初期,商品冷冻超薄切片装置先后问世,进一步促进了这一技术的发展。     

环氧树脂厚切片的染色

供电子显微镜观察的超薄切片,一般用各种环氧树脂作包埋剂。用环氧树脂的包埋头也能切成厚1—2微米的切片,供光学显微镜观察。这种厚度的切片与几百埃计算的超薄切片相对而言,可称之厚切片或半薄切片。在超薄切片之前,用环氧树脂包埋头先切     

胶体金免疫电子显微技术用于病毒抗原的检测

本文报道了一种改良的胶体金免疫电镜技术:以低温包埋,常规超薄切片代替超薄冰冻切片,成功地显示了细胞内的病毒抗原定位。     

不同厚度细胞薄切片对 AFM 图像反差的影响

利用原子力显微镜（ AFM ）观察超薄切片的表面,探索表面形貌与切片厚度、朝向等因素的关系以及对图像反差的影响 . 选择三种不同类型的细胞,培养后按电镜超薄切片法固定、包埋并切片后,将不同厚度的切片区分上下表面转移到云母上, AFM 在空气中以接触模式进行观察 . 结果发现,切片表面细胞相对包埋介质的凸起与凹陷与切片本身的厚度密切相关,并随切片厚度的不同呈现有规律的变化 . 实验统计结果显示这种现象可能具有普遍性 .     

利用蜡叶标本进行子囊超薄切片的方法

利用蜡叶标本为材料,对地衣型子囊菌石耳科子囊进行超薄切片实验。由于对蜡叶标本的充分活化与包埋是该方法的关键,因此,在活化剂和包埋剂等方面进行了选择和调整,从而使超薄切片获得了良好的效果。     

超薄切片染色后一种简易快速的洗涤法

超薄切片在电镜观察之前染色这一关是比较麻烦,也是比较重要的一关。现在LKB公司虽然已经生产出一种超薄切片自动染色器,每次同时能染色25个铜网,给超薄切片染色带来了很大的方便。但是该仪器价格昂贵(近一万美元),很不经济。因此目前大多数工作者仍以传统的方法进行染色,即液滴染色法。但用这种传统的方法染色是很麻烦的,尤其是在染色后     

禾本科植物超薄切片应注意的问题

在透射电镜的生物样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术,一般来说,植物样品的超薄切片比动物样品难度要大,而在植物材料中,禾本科植物材料的制样又特别困难,因为禾本科植物(如水稻、小麦、玉米、高梁、甘蔗等)质地坚硬,细胞壁角质化,并且充满硅质,它们对固定液的渗透具有不可忽视的障碍作用,按常规的生物样品制备方法常常失败或效果不佳。样品制备的好坏,很大程度上依赖于操作者的经验和操作技术,作者近几年来对禾本科植物叶片做了一些超薄切片工作,体会到要获得较理想的超薄切片,必须十分认真地对待制样过程中的每一操作步骤,任何环     

薄切片的放射自显影术

薄切片是指厚度为0．5～1μm的树脂类切片。文献中称它为厚切片（thicksection）或半薄切片（semithinsectio）,籍以与电镜观察用的薄切片（thinsection）区别。我国已习惯称电镜用的切片为超薄切片,因此,把这类切片称薄切片就能说明其比超薄切片厚,比普通石蜡切片薄的特性。用薄切片作放射自显影具有下列优点：（1）改善分辨力：放射自显影象的分辨力与样品的厚度成反比,薄切片的厚度低于普通石蜡切片,所以其分辨力高于用石蜡切片制作的放射自显影象的。（2）减少人工假象：用薄切片作放射自显影,不需去除包埋剂,因此,提供了平正…     

保持培养细胞原位、原形的超薄切片制备法

本文介绍先用环氧树脂Epon812包埋剂制成丘状膜,再在膜上培养细胞,直接将膜与细胞一起包埋,制备超薄切片。此种方法不仅能克服以往培养细胞需要离心成团,容易造成细胞破碎、变形的缺点;还能避免琼脂预包埋法悬浮细胞造成的抗原封闭;并能得到为数较多的连续超薄切片。它操作简便,较好地保持了培养细胞生长的原来位置及原有形状,为培养细胞进行免疫电镜的操作和提高制备培养细胞超薄切片的数量和质量提供了一种有效的途径。     

定量电子束显微分析中生物薄样品的质量损失

对多种生物薄样品和标样进行电子探针X射线能谱显微定量分析,分别以电子束轰击后样品的O Kα峰计数和介于4.2-6.2keV区间的连续X－射线计数变化监测质量损失,结果显示样品O Kα峰计数减少幅度大于连续X－射线计数减少幅度,在相同的分析条件下,各样品质量损失程度不相同（P＜0.05）。培养肝癌细胞冷冻干燥超薄切片、明胶冷冻干燥超薄切片、BSA薄膜、氨基塑料超薄切片、红细胞冷冻干燥超薄切片和卵黄高磷蛋白薄膜样品的质量损失分别为33％、28％、26％、18％、13％和13％,以上结果提示：以O Kα峰计数的减少监测样品的质量损失较敏感,在进行生物薄试样定量EPMA时应对各样品的质量损失进行相应校正。     

薄层包埋法的改进

薄层包埋法是北京大学胡适宜教授的实验室最先将其应用到植物材料的制作中（胡适宜和徐丽云,１９９３）。它主要是针对一些植物样品如花粉、花粉管和细胞原生质体等在超薄切片制作中较难定位而设计的。由于该方法能准确定位,因而大大提高了这些样品的超薄切片效率和质量...     

植物材料的冷冻超薄切片制作法

冷冻超薄切片法比常规超薄切片法步骤少、速度快,它不需接触到剧烈的化学试剂及脱水、包埋等,并能良好地保存细胞中的一些水溶性物质,在电镜下所观察到的细胞结构更接近于自然状态。因此,它比较适合于形态学、电镜细胞化学和元素的X-射线微区分析等研究领域。     

花粉壁的透射电镜标本制备

在透射电镜下观察花粉壁的超薄切片,是当前研究花粉外壁构造的重要方法,也是鉴定花粉的重要依据。但花粉外壁主要由孢粉素组成,因此很坚硬,所以在制备花粉壁的超薄切片时,溶剂较难渗入,给包埋和切片造成一定的困难。本文介绍的方法,是作者多次实验的总结。依照此方法可以得到较为满意的结果。     

一种简便快速的超薄切片裸面载网法

电镜生物样品制作的质量,直接影响到对标本的观察及结果分析与判断。要获得既整洁,平坦又结构清晰的优质超薄切片,除标本的固定、包埋等一系列步骤必须严格操作外,超薄切片制作完成后的捞片载网也是一个十分重要的问题。为此,我们从实际工作中摸索出了一种超薄切片裸面铜网捞片法,将超薄切片直接载至经过特定处理的裸面铜网上。其处理的步骤是:首先将市售未经过处理的300目铜网(北京创业电镜铜网工艺社产品)入小称量瓶中,以双蒸馏水清洗2次,每次1～2分钟;继入用重铬酸钾配制的硫酸清洗液(取洗液1伤;水1份,释稀为1∶1)浸洗5—10秒钟,充分震荡直至铜网沉降在清洗液底部,迅速倾去清洗液。再用双蒸水洗3～5次,每次1分钟,彻底洗净清洗液用沪纸吸于水份,再浸入无水乙醇     

辣根过氧化物酶标记与样品后染色联用在微观脑联结组学中的应用

三维电子显微成像(volume electron microscopy)是微观尺度脑联结组学(micro-brain connectomics)研究的主要研究手段.自动卷带式连续超薄切片-收片系统(automated tape-collecting ultramicrotome,ATUM)及扫描电镜序列成像系统的联合应用,是三维电镜成像中一种重要的技术手段.该方法利用卷带式收集超薄切片,形成完整的样品切片库,进而在后续成像中形成样品三维电镜成像数据库.根据ATUM系统镜外切片-收片、保留样本切片库等特点,对相应的生物样品制备方法进行改进,包括树脂配方及树脂渗透方式改良,神经元细胞膜辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)稀疏化标记与样本切片库后染色联用——从而很大程度上减少样品切片的褶皱率,并使得在整体高衬度的样品图像库中高效地识别神经元身份成为可能,最终获得符合脑联结组学所需的高质量成像数据.     

低温电镜技术及其在植物（动物）材料研究中的应用

通过一些实例介绍了高压冷冻,冷冻置换和冷冻超薄切片等低温电镜样品制备技术,并且与传统方法对照,说明低温电镜技术的优越性,其中,发菜（Nostoc flagelliforme)营养细胞的冷冻超薄切片（未经化学固定,脱水）所显示的超微结构更客观地反映了生物样品的自然生理状态。此外,应用高压冷冻和冷冻置换的免疫标记电镜技术,首次对发菜营养细胞中的DNA进行定位,明确了核区的位置及范围。