重组细胞因子在病毒疫苗中的应用进展

细胞因子(cytokine)是由多种细胞分泌能够调节细胞生长和分化、具有免疫功能并与炎症反应密切相关的分泌型蛋白,可作为免疫佐剂用以增强病毒疫苗的疗效。近年来,随着一些细胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10等)相继被被克隆成功,重组细胞因子在抗病毒疫苗中的作用愈加重要。运用原核、真核或病毒等载体,通过构建细胞因子重组质粒表达重组蛋白,从而发挥其免疫佐剂的活性。综述了重组细胞因子在病毒疫苗中所发挥的作用,以及在一些重要病毒疫苗中的应用概况。     

痘苗病毒载体在病毒疫苗研制中的应用

痘苗病毒载体在病毒疫苗研制中的应用孙劲（中国预防医学科学院病毒研究所,北京１０００５２）随着分子生物学技术的发展及日臻完善,病毒疫苗的制备出现了一些新的动向,继亚单位疫苗、多肽疫苗和抗独特型抗体疫苗之后,又出现了重组病毒活疫苗,即应用基因工程技术,以...     

同尾酶技术在构建疟疾多价重组DNA疫苗中的应用

同尾酶是一类识别不同核苷酸序列但能酶切产生相同粘性末端的限制性内切酶,依靠同尾酶的这种特性,可以根据需要将不同的ＤＮＡ 片段进行灵活组合,获得各种排列顺序的多价表位重组疫苗．将这种方法用于疟疾多价重组ＤＮＡ 疫苗的研制;ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠免疫实验对所得重组疫苗ＰＵ２８６的免疫原性进行了测定．     

DNA疫苗在寄生虫病疫苗研制中的前景

疫苗是人类与传染病斗争的最有效武器.纵观疫苗的发展过程,人们将巴斯德及后来许多学者开创的减毒和灭活疫苗称为第一次疫苗革命,将由微生物的天然及纯化组分或由基因重组产物而生产的疫苗称为第二次疫苗革命,本世纪90年代兴起的核酸疫苗技术则被誉为第三次疫苗革命[1].     

重组DNA技术在昆虫学中的应用

重组DNA技术即基因工程,亦为人们称做基因克隆或基因操作。重组DNA技术已被应用于昆虫学的基础研究和应用研究中。本文首先对重组DNA技术及基因转移技术(在昆虫学研究中与重组DNA技术配合应用的重要手段)作一简述,然后着重介绍这些技术在昆虫学研究中的应用概况。 重组DNA技术 重组DNA技术就是将DNA从细胞中分离出来,切割成片段,与载体DNA连接,形成重组DNA分子,然后导入宿主细胞,进行复制。     

DNA改组在病毒新型疫苗研究中的应用

DNA改组是一种全新的体外人工进化模式,它改变了传统的进化途径,大大加速了蛋白质的进化进程。该技术自1994年建立以来,在医药和酶工程等领域得到了广泛的应用。本文综述DNA改组在病毒新型疫苗及其相关领域的研究进展。介绍DNA改组的原理和在体外人工进化上的优势、病毒疫苗研究、病毒载体的改造等方面的研究进展,同时对DNA改组中面临的困难也进行了剖析。     

重组DNA技术在神经科学中的应用

重组DNA技术是生物工程的主要技术,它在神经科学研究中发挥着重要的作用,形成为一个新的前沿——分子遗传神经科学。重组DNA技术主要包括四方面:(1)用限制性内切酶将DNA切割成特定的片段,(2)用核酸杂交钓出特定的DNA或RNA顺序,(3)DNA克隆和扩增,(4)DNA顺序测定,再根据三联密码推断蛋白质的氨基酸排列顺序,其速度远超过经典的蛋白质化学方法。换言之,重组DNA技术可以将特定的基因从基因库中分离开来,进     

痘苗病毒载体在病毒疫苗研制上的应用

痘苗病毒作为真核表达载体已广泛应用于外源基因的表达,并日益受到重视,本文就痘苗病毒的生物学特性,重组痘苗病毒的构建原则,外源基因在重组痘苗病毒中的表达情况及重组痘苗病毒作为活疫苗的优缺点等方面作一概括性综述。     

重组水疱性口炎病毒疫苗的研制现状

水疱性口炎病毒引起的水疱性口炎是一种人兽共患病。该病毒可刺激感染的宿主产生细胞、体液和黏膜免疫应答,是一种有希望的疫苗载体,可表达病毒、细菌和寄生虫的多种蛋白。以水疱性口炎病毒为载体的病原体疫苗包括埃博拉病毒(rVSV-GP)、马尔堡病毒(rVSV-G)、Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(rVSV-env/gag)、猴免疫缺陷病毒(rVSV-Gag)、猴逆转录病毒2型(rVSV-env)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(rVSV-St19)、猪流行性腹泻病毒(rVSVSt19)、呼吸道合胞病毒(rVSV-G/F)、尼帕病毒(rVSV-G/F)、拉沙病毒(rVSV-GPC)、淋巴细胞脉络膜炎病毒(rVSVGP)、柯萨奇病毒B3型(rVSV-VP1)、肠道病毒71型(rVSV-VP1)、口蹄疫病毒(rVSV-VP1)、人乳头瘤病毒16型(rVSV-E7)、棉尾兔乳头瘤病毒(rVSV-L1/E7)、汉坦病毒(rVSV-GPC)、辛诺柏病毒(rVSV-GPC)、安第斯病毒(rVSVGPC)、克里米亚-刚果出血热病毒(rVSV-GPC)、巨细胞病毒(rVSV-gB)、单纯疱疹病毒2型(rVSV-gD)、禽流感病毒(rVSV-HA/NP)、乙型肝炎病毒(rVSV-MS)、基孔肯雅病毒(rVSV-E2)、诺如病毒(rVSV-VP1)、蓝舌病毒8型(rVSVVP2)、博尔纳病病毒(rVSV-GPC)、牛痘病毒(rVSV-L1R/B5R)、结核分支杆菌(rVSV-Ag85A/TFP846)、溃疡分枝杆菌(rVSV-Mu13720)、鼠疫耶尔森菌(rVSV-LcrV)和曼氏血吸虫(rVSV-SmHSP70)等,本文将综述这些水疱性口炎病毒介导的病原体疫苗的研制现状。     

DNA shuffling技术及其在基因工程疫苗中的应用

DNA shuffling技术是一项全新的体外人工进化模式,它通过基因在分子水平上的重组,再定向筛选具有预期性状的突变体,获得同时具有多个亲本基因的特征的突变基因。该文介绍DNA shuffling技术的基本原理,并列举了由该技术发展而来的新技术及其在基因工程疫苗领域的应用,展望了DNAshuffling技术的发展方向。     

狂犬病毒蚀斑方法在病毒研究和疫苗研制中的应用

本文采用狂犬病毒CTN-1和4aC株,经Vero细胞传代适应后,以Vero细胞为培养基质,建立了狂犬病毒蚀斑试验和蚀斑减少试验的方法。目前已将此方法应用于病毒鉴定、病毒克隆、病毒滴定以及抗狂犬血清的检测,并取得了较好的结果。     

用DNA重组技术获得乙型肝炎病毒e抗原及其在临床检测中的应用

HBeAg和抗－Hbe是乙型肝炎的经典标志物。HBeAg基因与HBcAg基因在DNA c区上相重叠。为要获得重组DNA衍生的HBeAg,本文从adw2亚型HBv 3．2 kb全长DNA上切取带有HBc基因的BamHI-EcoRI片段,用Bal3l和Hpa I酶处理产生一系列长度不同的片段,与载体pUR222和pUC 18构成不同的重组质粒,转化到大肠杆菌。通过平板筛选、质粒酶切图谱和抗原抗体反应等筛到高效表达HBeAg的转化株YG30l和YG302,中和试验证明了重组HBeAg的血清学特异性。用凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析对其进行提纯并用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合western印迹法进行纯度鉴定、含量分析和分子量测定。重组HBeAg制品具有高活性、稳定和安全等特点,实验证明它可以代替血源HBeAg制成酶联药盒用于乙肝诊断检测。     

丙型肝炎病毒DNA疫苗研究进展

丙型肝炎病毒（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ Ｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）感染严重危害人类健康,目前尚无特效的治疗方法。ＨＣＶ ＤＮＡ疫苗是近年来的研究点之一,它的研制为预防和治疗ＨＣＶ感染提供了新的思路。本文从ＨＣＶ ＤＮＡ疫苗的构建、免疫效果的影响因素、作用机制等方面作一综述。     

基因重组技术在霍乱菌苗研制中的应用

近２０年来基因重组技术在霍乱菌苗研制中已获得一定进展，并已研制了霍乱减毒活菌苗，伤寒／霍乱双价菌苗以及表达菌毛的减毒菌苗等，经动物实验与志愿者试用产生较好的免疫保护作用。     

DNA疫苗及其在鱼类生产中的应用

近几年来,DNA疫苗以其高效、稳定等特点越来越受到各国研究者的重视,并在鱼类生产上做了很多试验研究,取得了一定的成果。就DNA疫苗的构建、作用原理、佐剂、接种方法、安全性、目前存在的问题及应用前景作一综述。     

耐热DNA连接酶介导的TLCR技术在简化DNA重组实验中的应用

传统的DNA重组方法Type Ⅱ型限制酶技术受到片段纯化的限制,无法做到复杂混合体系中DNA片段的特异性连接。为解决这个问题,本研究将耐热连接酶链式反应(Thermostable ligase chain reaction, TLCR)引入DNA片段的连接与捕获。该技术利用耐热型DNA连接酶的特性,在热循环反应中配合针对目的片段末端序列设计的单链寡核苷酸连接模板--Helper,实现目的片段的特异性连接和产物数量的指数性增长。两个质粒构建实验被用于验证TLCR技术的可行性和应用效果。首先利用TLCR技术从一个未经纯化的含有7种不同大小片段的混杂体系中特异性地将一段1.5 kb的片段捕获进载体,随机抽取的克隆样品经检验准确率达到80%,验证TLCR技术在复杂混合体系中特异性连接DNA片段的可行性和准确性。在另一个质粒构建实验中,TLCR技术从λ噬菌体基因组Hind消化物中将两段总长达27 kb的片段按顺序捕获进载体,随机抽取的克隆样品经检验同样达到了80%的准确率。结果表明,TLCR技术能够简化DNA重组实验的操作,并且适用于多片段和大片段的连接,可以为生物学研究提供便利。