开发新的变异原试验用小鼠系

九州大学活体防御医学研究所附属发生工学实验设施教授胜木元也、讲师权藤洋一等开发灵敏检测突变新变异原性试验用转基因小鼠,于11月24日～26日在东京召开的日本环境变异原学会上发表。 开发的系统是使用药剂耐性培养基检测变异,在传统的噬菌体中导入插入酶基因的DNA载体,利用菌斑的颜色变化,能灵敏地检测变异。导入的质粒基因大小约3 kb,是传统导入基因的约十分之一以下,     

花粉介导法获得耐草甘膦玉米植株及其耐性研究

为获得耐草甘膦转基因玉米植株,进而研究其除草剂耐性及外源基因的遗传特性,以质粒p BI101-aroA-M12为外源基因供体,以玉米自交系昌‘7-2’为受体,采用花粉介导法将外源基因导入玉米自交系中。PCR扩增、Southern杂交分析的结果证明获得了54个转基因植株;对其后代株系的分子检测及田间生物学鉴定,结果证明目的基因可以稳定遗传给后代植株,且赋予和提高了转基因植株的除草剂耐性。目的基因在转化体中的遗传规律研究,结果显示导入的目的基因在F2受体植株中以3∶1的比例发生遗传分离,符合孟德尔单因子显性遗传分离规律。ELISA分析和蛋白质浓度测定的结果证实目的基因在转化植株中得到表达,表达量介于40.5-112.6 ng/g叶片鲜重之间,目的基因表达量与该植株的除草剂耐性性状间呈极显著相关,r=0.942 3(P0.01)。最终研究获得了4个高草甘膦耐性的转基因纯合株系。     

使用花粉开发植物基因重组技术

以色列Hebrew大学的J.Shilo和G.Simchen使用花粉开发了在植物中导入外来基因的方法.目前在用这种方法培育的重组型烟草的叶中表达卡那霉素耐性基因已获得成功.这种方法是把含外来基因的质粒与花粉混合使基因整合.研究者认为这种技术能应用于一般植物.与传统的植物基因重组方法不同,使用花粉避免了使导入基因的细胞再生成株的过程.这种过程需要一定技术,而且会引起植物染色体异常.使用花粉导入基因时外来基因能编入     

抗CMV的重组牵牛花

日本三得利公司决定于11月30日在大阪召开的日本生物技术94’大阪展示会上展示用基因重组技术开发的牵牛花。在12月1日召开的展示会上展示重组和非重组的两种。广泛地公开基因重组植物这还是首次。 这种牵牛花被导入了黄瓜花叶病毒(CMV)的编码基因,产生了对CMV的耐性。现已完成了科学技术厅以及农林水产省所规定的重组植物安全性试验。这种牵牛花在野外栽培绝没问题。今年还完成了普通试验田的栽培,只期待着商品化。 但是,作为选择标记在此牵牛花上使用了卡那霉素耐性基因(这种基因涉及到专利问题)。因此,先商品化三得利公司从澳大利亚Florigene公司引进、最近在日本获得非封闭式温室实验认可的、货架期长的     

利用基因导入技术(Accell)转化玉米

92年4月28日发表了美国 W.R.Grace 公司100%子公司美国 Agracetus 公司使用基因导入法“Accell”转化主要的纯系品种玉米获得成功。Agracetus 公司研究用“Accell”法向玉米中间母本导入耐虫性基因和农药耐性基因,打算将来用于 F_1杂种的商品作物的育种。“Accell”法是使用 Agracetus 公司开发的基因枪直接向细胞内导入基因的技术。Agracetus 公司没有公开“Accell”法的详细情况。但是已申请专利。因玉米从原生质体再生植物体的效率低,也是用向     

转基因改良植物的胁迫耐性

干旱、盐碱和低温等逆境是严重影响栽培植物生产的非生物胁迫因素。导入外源目的的基因已发展成为改良作物对逆境胁迫耐性的新途径。现今已应用于植物胁迫改良的基因包括编码活性氧清除酶类、膜修饰酶类、胁迫诱导蛋白和渗调物质合成酶等基因。     

dinB基因在大肠埃希菌抗生素耐性产生中的作用（英文）

本研究探讨din B基因在抗生素耐性产生中的作用。多拷贝含din B基因质粒被转染到大肠埃希菌造成超表达。携带多拷贝din B基因的菌株比野生菌更有生长优势。在体外实验中,din B超表达株在8 h内即显示出耐药性,而野生株不能。在鼠模型体内实验中,与野生株相比,din B超表达株出现耐药株时间更短,耐药水平更高。结果显示din B基因在抗生素耐性产生中有贡献并有作为防止抗生素耐性靶点的潜力。     

基因重组玉米

美国Dekalb Plant Genetics公司使用基因枪,在细胞中导入外源基因,并在再生玉米植株中表达.重组型玉米已接近商业化. 重组型玉米种子的价格很高,预计1995年推出.对昆虫的耐性、除草剂的抗性和雄性不育等性状表现只需导入一个基因就可以了.除草剂抗性:如使用比传统便宜而强力的除草剂,可省去每个生产季节的工作时间和劳力,一年能节省劳务费7000万美元.购买除草剂的花费一年能节约2.3亿美元.种子商能从中获得一半(1.5亿)的利益.昆虫抗性:关于双子     

用重组技术直接生产酰化酪氨酸

中央研究所开发了用放线菌的基因重组技术直接发酵生产动物用药品酰化酪氨酸的技术。酰化酪氨酸(AIV酪氨酸)是中央研究所1989年工业化的第二代酪氨酸。作为对动物用抗生物质酪氨酸的耐性菌对策,在3位上导入乙酰基,在4位上导入异戊酰基。首先发酵生产酪氨酸,接着进行第二段的发酵酰化作用。一旦使生产提高几十倍,就能产业化。这项成果在4月在东京召开的日本农艺化学会上发表。要将酪氨酸变换成AIV酪氨酸需要酰化3位和酰化4″位的酶。先克隆4″位酰化酶基因(acyB1),     

开发用于耐冷性玉米育种的耐冷性PPDK基因导入系统

日本烟草产业(JT)公司宣布确立了在叶组织细胞叶绿体上能有效地表达从耐冷性菊科植Flaveriabrownii中获得C4光合成途径的耐冷性PPDK(丙酮酸二磷酸激酶)酶的系统。现在正在玉米的基因导入,以获得性状转化体。玉米原产于中南美,在寒冷地区栽培困难。如果能开发出低温耐性玉米,就能扩大栽培     

聪明鼠及其原理

简要介绍了华裔科学院钱卓领导的研究小组利用基因工程技术定向导入ＮＲ２Ｂ基因,培养出一批经电生理实验和行为学实验证实的学习力和记忆力都比普通鼠更强的聪明鼠。阐明了ＮＭＤＡ受体的组成和功能,ＮＲ２Ｂ基因的导入及聪明鼠的实验证明,聪明鼠研究的意义。     

菊花分子育种研究进展

对菊花分子育种的研究起源于20世纪90年代初,导入外源基因的主要目的是改变菊花的株型、花色,提高抗虫性、抗病性,增强对寒冷、干旱、盐碱的耐性。近年来,选用不同类型的启动子构建新型载体的研究也为改善菊花育种工作提供了参考。这些都预示着菊花分子育种的研究逐渐走向全面和成熟。     

酿酒酵母乙醇耐性的分子机制及基因工程改造

提高工业微生物对毒性代谢产物及高温等环境胁迫因素的耐受性对工业生产具有重要的意义。发酵过程中产生的乙醇对酵母细胞的生长和代谢都具有较强的抑制作用,是酿酒酵母的重要环境胁迫因素之一。对酿酒酵母乙醇耐性的分子机制的研究可为选育具有较强乙醇耐受性的酵母菌种提供理论基础。近年来,通过细胞全局基因转录分析和基因功能分析,对酿酒酵母乙醇耐性的分子机制有了更多新的认识,揭示了很多新的与乙醇耐性相关的基因,并在此基础上,通过对相关基因进行过量表达或敲除,成功提高了酵母菌的乙醇耐性。以下综述了近年来酵母菌乙醇耐性的生物化学与分子生物学机制的研究进展,以及构建具有较高乙醇耐性的酵母菌的基因工程操作。这些研究不仅加深了对酿酒酵母乙醇耐性的机理认识,也可为高效进行生物转化生产生物质能源奠定理论基础。     

抗CMV的重组番茄

日本烟草产业遗传育种研究所利用基因操作培育出抗黄瓜花叶病毒(CMV)的番茄。导入病毒外壳蛋白基因从而对CMV有抗性的番茄曾由美国Monsanto公司、农林水产省生物资源研究所,武田药品和坂田种子等公司开发过。但是通过导入卫星RNA使重组番茄表现CMV抗性这还是第一次。在申请专利方面与Monsanto公司重组番茄的专利不冲突。CMV的感染可诱导卫星RNA的扩增,使植株产生CMV耐性。这种植株体内的卫星RNA拷贝数并不多。因此,估计能作为杂交种子的亲本使用。实用性极高。番茄在日本的栽培面积约15000万公顷。其中10％发生花叶病。估计大部分是CMV。目前没有什么消     

用激光微束法将外源基因导人水稻细胞的研究

将外源基因导入植物细胞是植物基因工程的关键步骤之一。用激光微束技术转化动物细胞已经取得了成功,并证明外源基因已整合到细胞染色体上。最近又证明激光微束可穿透植物细胞壁和细胞膜,将pBR322DNA导入植物细胞和细胞器。本实验在利用激光微束技术将外源基因导入水稻培养细胞上进行了探索。 所用外源DNA是pBI121质粒,该质粒带有CaMV35启动子和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因,用     

靶向性非病毒载体介导p21WAF-1基因对肝癌细胞的抑制作用

利用研制开发的靶向性非病毒载体GE7基因导入系统转导外源基因pCEP-p21WAF-1,检验其介导p21WAF-1基因进入肝癌细胞后,在体内外抑制肝癌细胞的生长的效率.体外实验证明,导入外源基因后,SMMC-7721和BEL-7402细胞的生长受到抑制,第8天抑制率分别达到56%和66.7%.而体内实验结果是,荷SMMC-7721裸鼠皮下瘤周注射该基因导入系统,转导pCEP-p21WAF-1 3周后,实验组肿瘤的重量(平均为(0.083 ± 0.043)g)与对照组(平均为(0.281± 0.173) g)相比明显减小,且在统计学上有显著差别(P<0.05).以上结果表明,GE7基因导入系统可以介导外源基因pCEP-p21WAF-1进入细胞内,并在体内外抑制肝癌细胞的生长.     

基因重组植物的非封闭式实验

筑波大学生物科学系教授原田宏实、助教授兼田博等向文部省申请导入卡那霉素抗性基因(km~(?))的烟草和导入rolc的颠茄的非封闭式实验。在10月下旬的学术审议会重组DNA专门委员会安全审查会上审议。如通过审查,将成为文部省首例非封闭式重组植物实验的第一号。各种基因连接在非特异表达的花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子的下游。km~(?)作为重组烟草的典型标记导入。rolc来自Ri质粒,一旦导入颠茄,就会增加花的数量,延长开花期。     

日本文部省把向细胞中直接导入DNA的实验也纳入指导方针管理范围

日本文部省正不得已地对基因重组的基本方针进行重新估价。该省正在探讨的是,要不要对用微注射等方式向动植物细胞直接导入DNA的实验等规定新的指导方针。到目前为止,文部省的指导方针中没有列入用微注射等方法向动植物细胞直接导入DNA的实验。对转基因小鼠等实验的审议,也没有书面规定。目前正在修改的指导方针中,在传统的基因重组实验之外,另外设置新规定的对象,即“准基因重组的实验”,这样,将形成一个包括两大内容的指导方针。根据概率大小来区别     

酵母海藻糖酶缺失突变株的构建及其耐性

[目的]构建酵母海藻糖酶缺失突变株,并进行耐性分析,进一步研究海藻糖与酵母耐性之间的关系,为商业生产打下一定的基础.[方法]利用同源重组的方法,敲除了编码酸性海藻糖酶的ATH1基因和中性海藻糖酶的NTH1基因,构建了酸性海藻糖酶缺失突变株(△ath1)、中性海藻糖酶缺失突变株(△nth1)和双缺失突变株(△ath1△nth1),并进行了耐性分析.[结果]结合PCR和Southernblot的结果,验证了突变株构建的正确.所有突变株的海藻糖积累量和细胞密度均高于亲本,冷冻、高温、高糖和酒精耐性提高了.[结论]说明海藻糖含量与酵母耐性有一定的相关性.突变株耐性的改善,表明它们在酿造和烘焙产业中具有潜在的商业价值.     

酿酒酵母乙酸耐性分子机制的功能基因组进展

提高工业酿酒酵母对高浓度代谢产物及原料中的毒性底物等环境胁迫因素的耐受性,对提高工业生产效率具有重要的意义。乙酸是纤维素原料水解产生的主要毒性副产物之一,其对酵母细胞的生长和代谢都具有较强的抑制作用,因此,对酿酒酵母乙酸耐性分子机制的研究可为选育优良菌种提供理论依据。近年来,通过细胞全局基因表达分析和代谢组分析,以及对单基因敲除的所有突变体的表型组研究,对酿酒酵母乙酸耐性的分子机制有了更多新的认识,揭示了很多新的与乙酸毒性适应性反应和乙酸耐性提高相关的基因。综述了近年来酿酒酵母乙酸耐性的基因组规模的研究进展,以及在此基础上构建乙酸耐性提高的工业酵母菌的代谢工程操作。结合本课题组的研究,对金属离子锌在酿酒酵母乙酸耐性中的作用进行了深入分析。未来对酿酒酵母乙酸耐性分子机理的认识及改造将深入到翻译后修饰和合成生物学等新的水平,所获得的认知,将为选育可高效进行纤维素原料生物转化、高效生产生物燃料和生物基化学品的工业酿酒酵母的菌株奠定理论基础。