橄榄绿链霉菌细胞膜中几丁单、寡糖结合蛋白质的分离、纯化和结合动力学

橄榄绿链霉菌细胞膜中存在能与N 乙酰葡糖胺特异性结合的蛋白质。采用超声波破碎、超速离心等方法 ,分离得到细胞膜后用TritonX 10 0抽提 ,经连续的阴离子层析后 ,可分别得到能与N 乙酰葡糖胺特异性结合的 46 .0kD和 47.5kD蛋白质。底物竞争结合实验证实 ,这两种蛋白质还能与其他几丁质降解产物 (几丁二糖至几丁六糖 )特异性结合而不与葡萄糖、纤维二糖等结合。采用介质表面感应技术 (surfaceplasmonresonance)检测出46kD蛋白质与几丁单糖至几丁六糖的解离常数 (Kd)在 8.2 9× 10 -9～ 1.95× 10 -5mol/L之间 ,单糖最高而三糖最低。决定其差异的主要因子是底物结合速率 (Kon)而非解离速率 (Koff)。N末端氨基酸序列分析结果推测 ,该蛋白质属于一个潜在的ATP结合转运系统     

第二个血管原蛋白质被发现

在哈佛医学院(美国马萨诸塞州波士顿)工作的Bert Vallee领导的一个科研组已经分离,克隆并表达出了一种能促使产生毛细血管的人体蛋白质。最初从人的结肠癌细胞分离出的这种蛋白质,是由123个氨基酸的单链组成的。在正常人的肝组织中也检测出了这种蛋白质。据生物化学杂志报道,科学家称之为血管原素(angiogenin)的部分仅仅占这种蛋白质的1×10~(-15),它可促进血管的增殖。在兔子的角膜和受精卵的膜片中都观察到了血管原素的     

家蚕丝腺蛋白质组学研究方法的建立

通过高精度的双向电泳技术对家蚕中部丝腺组织的蛋白质进行分离,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)对其中一些表达量较高的蛋白点进行鉴定,并利用GPMAW(GeneralProtein/MassAnalysisforWindows)软件结合家蚕基因组预测的蛋白质数据库构建本地的肽质量指纹图谱数据库,对所得到的肽质量指纹图谱进行分析。研究发现,经过双向凝胶电泳及其图象分析技术,硝酸银染色和考马斯亮蓝染色分别能分离出500个以上和100个以上的蛋白点。这些蛋白质点主要集中在分子量15~90kD区域,等电点pH3·5~7之间。MALDI-TOF-MS鉴定的25个考染蛋白点中有60%以上的PMF(PeptideMassFingerprint)的信号峰较强。在数据库检索过程中,利用家蚕肽质量指纹数据库所得检索结果与在Mascot的检索结果相比,前者不仅能够准确鉴定出一些已有研究报道的蛋白,从而验证检索方法的可行性,而且还能够对一些已经被家蚕基因组数据库所预测但未曾报道的新蛋白质进行鉴定,从而建立了一整套适合于家蚕蛋白质组研究的方法,并为其它绢丝昆虫蛋白质组研究提供了重要参考。     

1990年生物科学进展信息集萃(国外部分)

1月△美国新墨西哥大学的研究人员,用扫描隧道显微镜(STM)进行基因定序的研究。此法比目前可行的定序方法节省材料,并且快得多。△意大利科学家发现一种能控制神经细胞分化的神经肽——存在于嗅神经中的一种与降钙素相关的肽(CGRP)。△美国科学家发现一种新型蛋白质,通过影响细胞里微管的活动,促进细胞分裂和神经细胞的生长。这种蛋白质取名为“Dynamin”。 2月△加拿大科学家经过10年努力,开发出一种鉴别7日龄牲畜胚胎性别的技术。     

商陆种子抗病毒蛋白的制备及毒性分析

采用一种改进的方法,从商陆属两种植物——商陆(Phytolacca acinosa)和美州商陆(P. americana)种子中分别制备抗病毒蛋白(Pokeweed antiviral protein from seeds,简称PAP-s)。研究证明,两种植物中的PAP-s性质完全相同。经SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得该蛋白质为单一肽链,分子量约30kD;聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测得等电点为8.4;经Edman降解,测得N-末端氨基酸为Ile.PAP-s在兔网织红细胞裂解液中抑制蛋白质合成ID_(50)为2.6ng/ml(8.6×10~(-11)mol/1);将该蛋白质与脊髓灰质炎(?)型病毒混合接种于猴肾细胞培养液,显示出较强的抗病毒活性,浓度为4.17×10~(-8)mol/1时能抑制98％的病毒增殖。将PAP-s通过异型双功能连接剂SPDP与抗人T细胞单克隆抗体Wu71偶联制备免疫毒素,对T淋巴细胞白血病CEM细胞显示特异杀伤作用,在10~(-9)mol/1时可杀灭76.4％的靶细胞,~(14)C-亮氨酸掺入蛋白质合成抑制试验显示ID_(50)为10~(-10)—10~(-9)mol/l。     

奇特的蛋白质

据估计生物界中的蛋白质可达 10 10 ～ 10 12 ,有的作为功能蛋白发挥着及其重要的生理功能 (酶蛋白、运输蛋白、运动蛋白、免疫球蛋白等 ) ;有的为不具活性功能的储藏蛋白 (鸟卵清蛋白、牛奶酪蛋白 )和结构蛋白 (毛发角蛋白、结缔组织中的胶原蛋白 )。其实除了这些蛋白质外尚有一类奇特的蛋白质 ,它们有的能发光 ,有的与抗冻有关 ,有的能提高酶的活性 ,有的与耐热性有关 ,有的有杀菌作用。1　绿色荧光蛋白绿色荧光蛋白 ( GFP)是 Douglas等在 1992年最早纯化得到的能发光的蛋白质 ,因其独特的发光特性引起人们极大的兴趣 ;它能在长波紫外光…     

离体绿豆胚轴在吸胀过程中蛋白质合成与ATP水平及能荷值的关系

绿豆胚轴吸胀过程中 ATP 水平及能荷(E.C.)值的上升伴随着蛋白质合成速率的增加。用5×10~(-5)M 和5×10~(-4)DNP 处理后,组织中 ATP 水平及能荷值降低,同时也抑制了~3H-亮氨酸参入 TCA 不溶性蛋白质的量。并观察到 CCCP(1×10~(-3)M 和1×10~(-4)M)有类似作用。以0.2μg/ml 亚胺环己酮处理,蛋白质合成下降69%,ATP 和 E.C.都略有增加;用1μg/ml 和5μg/ml 处理,蛋白质合成接近停止(占总合成量的6—7%),ATP 水平稍有下降,E.C.值仍保持不变。用每毫升含1μg 和10μg 放线菌素 D 处理,使蛋白质合成分别降低23%和48%,而 ATP 水平及 E.C.值不受任何影响。这些结果表明绿豆胚轴吸胀初期,其蛋白质合成受 ATP 水平及能荷值的调节,而腺苷酸库和能荷变化都不受放线菌素 D 的影响。     

泡桐叶片蛋白质提取方法的研究

24个提取泡桐叶片蛋白质组合的试验结果表明,用UKC(9.5 mol／L尿素,5 mmol／L K2CO3,1.25％ CTAB,0.5％二硫苏糖醇,2％两性载体电解质pH3.5～10,5％ Triton X-100)提取由10％冷(-40℃)三氯醋酸(丙酮配制,内含0.07％的巯基乙醇)处理的泡桐叶片干粉提取出的蛋白质总量和种类最多。这表明该方法可用于泡桐叶片蛋白质的提取。     

从一级结构预测蛋白质稳定性——Guruprasad, Reedy和Pandit方法

介绍了一种从一级结构预测蛋白质稳定性的方法.Guruprasad,Reedy 和 Pandit 对32种稳定蛋白质和12种不稳定蛋白质进行了统计分析,发现存在这样一些二肽,它们在稳定的和不稳定蛋白质中的出现频率是明显不同的.通过一系列的统计学计算处理,计算出所有400种二肽各自对蛋白质稳定性(或不稳定性)的影响大小,给它们设计了一个二肽不稳定性权值(DIWV).对一个给定的蛋白质,与它的序列长度相一致的这些 DIWV 的加和能帮助区分不稳定蛋白质和稳定蛋白质.这种方法对如何提高蛋白质的稳定性具有一定的指导意义.我们根据 Guruprasad 等人的方法计算了几个已知序列的蛋白质的稳定性指数,并由此推出它们的稳定性.     

从一级结构预测蛋白质稳定性——Guruprasad,Reedy 和 Pandit 方法

介绍了一种从一级结构预测蛋白质稳定性的方法.Guruprasad,Reedy 和 Pa-ndit 对32种稳定蛋白质和12种不稳定蛋白质进行了统计分析,发现存在这样一些二肽,它们在稳定的和不稳定蛋白质中的出现频率是明显不同的.通过一系列的统计学计算处理,计算出所有400种二肽各自对蛋白质稳定性(或不稳定性)的影响大小,给它们设计了一个二肽不稳定性权值(DIWV).对一个给定的蛋白质,与它的序列长度相一致的这些 DIWV 的加和能帮助区分不稳定蛋白质和稳定蛋白质.这种方法对如何提高蛋白质的稳定性具有一定的指导意义.我们根据 Guruprasad 等人的方法计算了几个已知序列的蛋白质的稳定性指数,并由此推出它们的稳定性.     

小鼠肝脏免疫抑制蛋白质(LISP)的分离纯化和鉴定

用硫酸铵分段盐析及DEAE-Sephadex A-50、羟磷灰石和CM纤维素等多种柱层析方法,从正常小鼠肝浸液中分离纯化出一种免疫抑制蛋白质(LISP)。在体外用微量该蛋白质就能强烈抑制小鼠T、B淋巴细胞对促有丝分裂原和同种异型抗原的增生反应。纯化的蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PACE)和等电聚焦(IEF)鉴定时均显示为一条区带,其等电点(pI)值在7.5—7.8范围。沉降系数利S_(20),w为5.39。Sephadex G-100凝胶层析测得LISP的分子量为78,000道尔顿。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)提示LISP是由二个相同的亚基组成,亚基分子量为38,500道尔顿。LISP是一种既非糖蛋白又非脂蛋白的碱性蛋白质,对它的氨基酸组成也作了分析。     

Protein extraction methods suitable for SDS-PAGE analysis from hyphae of Rhizopus nigricans

为制备适合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的黑根霉菌丝蛋白样品,采用不同的提取方法对黑根霉的菌丝进行蛋白质提取.结果表明:黑根霉菌丝经低温冷冻过夜后,直接用0.2 mol/L NaOH处理10 min,再加入上样缓冲液沸水浴,这一方法能快速、方便、有效的提取蛋白质.利用该方法比较了黑根霉与黑根霉甲苯耐受菌菌丝蛋白组成上的差异.     

长期中小强度有氧运动对大鼠左心室肌蛋白质组差异表达的影响*

目的:探讨长期中小强度有氧运动对大鼠左室肌蛋白质组差异性表达的影响,筛选出对中小强度有氧运动刺激敏感的目标蛋白质,丰富运动健身的基础理论及为慢性心血管疾病的康复治疗提供新的思路和实验依据。方法:20只雄性SD大鼠随机分为运动组(E组)和对照组(C组)(n=10)。建立大鼠长期中小强度有氧运动跑台训练模型,采用双向凝胶电泳(2-DE)对大鼠左心室肌全蛋白样品进行分离。采用串联飞行时间质谱蛋白质仪对部分分离后差异表达量上调大于5倍或下调超过80%的蛋白质点进行质谱鉴定。结果:与C组比较,E组大鼠心脏重量指数(HWI)增加了32.0%,具有显著性差异(P＜0.05);与C组比较,E组有71个蛋白质点表达上调≥2倍或下调≥50%,对4个表达上调≥5倍或下调大于等于80%的蛋白质点进行质谱鉴定,鉴定出3个蛋白质和1个未知蛋白质。结论:长期中小强度有氧运动后,大鼠心脏发生了良好的适应性改变;大鼠左心室肌蛋白质组发生了明显变化,长期中小强度有氧运动能有效增强大鼠心肌抗氧化能力。     

应用亲和层析法提纯鸡马立克氏病病毒pp38基因重组产物

利用鸡马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型特异单克隆抗体H_(19)致敏Sepharose 4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H_(19)识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。     

应用蛋白质组学的方法筛选胰腺干细胞标记物

探索利用蛋白质组学的方法筛选胰腺干细胞的标记物.通过大鼠胰腺大部分切除(Px)的方法建立胰腺增生模型,采用双向电泳(2DE)分离比较Px术后第3天大鼠增生胰腺组织与假手术(Sx)非增生胰腺组织蛋白质的表达谱差异,用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和肽质量指纹图谱(PMF)的方法对差异蛋白进行鉴定,进一步经生物信息学检索,筛选与胚胎发育和细胞分化相关的蛋白质分子.蛋白质印迹分析蛋白质HSP47、Vimentin在Px大鼠胰腺组织中的表达,以验证2DE的结果.2DE显示Sx和Px大鼠胰腺组织平均蛋白质点数分别为(1369±31)和(1315±28)个,其中共有91个蛋白质点出现1.5倍以上的表达差异.所有差异蛋白质点PMF鉴定出53种蛋白质,其中Vimentin,cytokeratin8(CK8),lymphocytecytosolicprotein1(L-plastin),heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1(hnRNPA2/B1)和L-arginine:glycineamidinotransferase(AGAT)与胚胎发育和细胞分化有关,这些蛋白质可能是胰腺干细胞潜在的候选标记物.总之,蛋白质组学的方法利用其高通量的特点能有效发现潜在的胰腺干细胞生物学标记物.     

我国部分小麦种质资源主要品质性状鉴定评价

"九五"期间,测定了来自10省(市、自治区)的1589份小麦种质资源的主要品质性状,了解了其籽粒的硬度、沉降值和蛋白质含量状况.筛选出一批高蛋白质、高硬度、高沉降值的优质资源,为小麦生产和品质育种提供种质基础.     

Teruhiko Beppu等人研究出一种使大肠杆菌能分泌蛋白质的方法

将rDNA用在大肠杆菌中的主要缺点之一是蛋白质产物被保留在细菌细胞里。这一缺点终于被克服了。东京大学农业系的Teruhiko Beppu及其同事找到了一种能使大肠杆菌细胞中分泌出蛋白质的方法。详情还未获得,但很明显,这些研究人员将一种蛋白酶的基因(来自另一种革兰氏阴性细菌)的一个片段拼接到大肠杆菌中。虽然大肠杆菌自然产生的相应酶保留在细胞内,但该菌通常能分泌出外来蛋白酶,这对该菌来说是自然的。当将外来蛋白酶     

蛋白质工程

蛋白质工程(Protein Engineering)也称蛋白质的定点突变(site-directed mutagenesis),指的是根据蛋白质结构研究结果,设计一个新蛋白质的氨基酸序列,通过修饰编码原蛋白质的DNA序列,最后创造出新的蛋白质的技术.蛋白质工程是基因工程与蛋白质结构研究互相融合的产物.这一技术开辟了一条改变蛋白质结构的崭新途径,使蛋白质和酶学研究与发展进入了一个新时期.改变蛋白质的结构是研究蛋白质结构与功能的传统方法,如天冬酸氨基甲酰转移酶活性     

植物叶片蛋白质双向电泳技术的改进与优化

通过对传统的双向电泳方法进行改进与优化,得到了一种适合于分析植物叶 片蛋白质的双向电泳新方法。用改进后的方法对水稻不同时期成熟叶片蛋白质进行双向电泳分离,结果显示其稳定性和重复性好,分辨率较高,经考马斯亮蓝染色后可分辨出300多个蛋白质(肽)点。它们的等电点和分子量主要分布于pI4.1-8.2和10-100kDa之间。本文还就实验过程中出现的一些技术问题进行了讨论。 Abstract:Base on the method of O farrell,an improved procedure for the two-dimensional gel electrophoresis of leaf proteins is presented.The two-dimensional separation of proteins from the mature leaves of different developmental stages of rice provides distinct and steady results.The detected protein(peptide)spots stained by Coomassie brilliant blue R-250 are more than 300,with isoelectric points(pI)ranging from 4.1 to 8.2 and molecular weights(MW)from 10 kDa to 100 kDa.     

错误折叠蛋白质的聚集效应及其对策

错误折叠蛋白质大量聚集将引发蛋白质构象紊乱症(protein conformational disorder,PCD)。目前的研究发现,蛋白质聚集过程中的中间体(纤维前体,pre—fibfillar)导致细胞膜结构受损,从而诱发细胞凋亡。根据这一原理设计出的抗纤维前体抗体和干扰肽可以作为PCD治疗的一般性方法。此外,该就消除错误折叠蛋白质聚集的研究方向作了展望。