在细菌中表达真核基因的方法

本文叙述使无性繁殖的真核基因在大肠杆菌(E.coli)中获得有效表达的方法。这些方法要求在所讨论的基因的编码序列中,扦入了若干序列(例如一个互补的DNA无性繁殖系)之后形成的一种不间断的形式,在功能上仍然是有效的。合成的基因产物没有同其它的氨基酸序列融合。这种遗传操作是比较简单的,但需要本文所描述的一类质粒和商品化的有用的酶。     

细菌转录器内的蛋白—蛋白相互作用

本文介绍了大肠杆菌生理活动的分子生物学基础，重点阐述细菌在各种环境条件下基因的转录调节。转录调节蛋白被激活后，有的诱导产生不同的ＲＮＡ多聚酶的δ亚基，有的与ＲＮＡ多聚酶的Ｃ末端结合，有的与δ＾７０亚基的Ｃ末端结合，通过蛋白－蛋白间的相互作用，启动转录过程。     

革兰氏阴性细菌蛋白分泌系统研究进展

革兰氏阴性细菌由于具有复杂的双层膜结构,其蛋白质分泌能力较差.这使得革兰氏阴性细菌的典型菌株——大肠杆菌作为最常用的受体细胞在生物制药工程和其他生物技术产品生产中受到一定的限制.因此,革兰氏阴性细菌蛋白分泌系统的研究具有重要意义.本文详细地归纳了革兰氏阴性细菌已知的蛋白分泌系统,分别从分泌系统的分泌过程、分泌蛋白类别、...     

原细菌是真核细胞的祖先吗?

真核细胞是由什么样的原核细胞进化而来？这是一个长期困扰人们的基本生物学问题。但近年来随着原细菌的发现和广泛深入的研究,使这一问题的解决向前迈进了一大步。结合国际上对原细菌,尤其是它与真核细胞在许多方面（包括ＤＮＡ复制、转录和翻译整个中心法则,组蛋白、染色质及蛋白酶复合体等）密切的亲缘关系的研究结果,对原细菌的进化地位及其对揭示真核细胞的起源进化问题的意义进行了探讨。     

真核基因表达调节的新进展

真核细胞基因的表达受顺式作用的DNA区域(启动子和增强子)和反式作用因子(又称转录活性因子)两方面的调控。诱导性因素可以通过特异性的转录活性因子的产生而发挥作用。转录活性因子与启动子、增强子的DNA核心顺序之间的特异性结合是真核基因表达的组织特异性和发育阶段性的决定性因素。本文综述了近年来真核基因表达调节的新进展,对启动子、增强子和转录活性因子的作用和性质进行了讨论。     

大肠杆菌耐热肠毒素在细菌表面的呈现

为了探讨CS3菌毛呈现载体用于呈现立体表位的可行性,选择大肠杆菌耐热肠毒素（ST）作为靶蛋白,通过全细胞ELISA,电镜技术来检测重组蛋白的表达,结果显示重组蛋白以杂合菌毛的形式得到了表达,并保持有CS3载体蛋白的抗原性,初步表明ST在细菌表面得到呈现,CS3菌毛呈现载体可用于立体表位的呈现。     

小鼠EVL 基因的克隆和真核表达载体的构建

目的:构建小鼠EVL(Ena/VASP like)基因的真核表达载体,为深入研究EVL的功能奠定基础.方法:采用PCR方法,从小鼠cDNA文库中,扩增出1245bp的EVL编码区片段,经电泳、胶回收后连接入pMD- 18T载体中,测序鉴定正确.用BamHI和HincⅡ双酶切,定向克隆EVL编码区片段到真核表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切鉴定重组质粒正确后.将重组质粒转染入HELA细胞中,以RT-PCR检测EVL的mRNA的表达,以Western Blot检测EVL蛋白的表达.结果:酶切鉴定结果显示小鼠EVL编码区基因被成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1中;RT-PCR和Western Blot结果以及免疫荧光染色显示Hela细胞中有EVL的mRNA和蛋白的表达.结论:成功获得pcDNA3.1 -EVL的真核表达载体,为进一步深入研究EVL蛋白的功能奠定了基础.     

真核基因组结构与功能调控

真核基因组结构与功能调控敖世洲１研究进展和发展动态基因贮存着细胞和生物体的所有信息。真核细胞的基因ｉｌｌＤＮＡ序列是从单细胞受精卵发育成为多细胞整体的蓝图。决定人类文化至关重要的学习、语言、记忆等智能因子亦编码在ＤＮＡ序列中。ＤＮＡ序列还编码着突变和...     

真核细胞内可诱导基因表达系统研究进展

建立可诱导基因表达系统是研究基因功能的重要手段。迄今为止的许多真核细胞内可诱导基因表达系统,包括以真核调控元件及原核基因调控元件为基础的可诱导表达系统,双系统、组织特异性及可诱导基因打靶系统等。     

液态培养基内跟踪细菌生长和一个新的细菌生命模式

通过增加液态培养基的粘稠度到 8 4centipoise即 0 .0 84g·cm^-1·s^-1以上 ,实现了长达 6h的对大肠杆菌个体生长和家族形成的实时连续观察 .观察结果显示主要为单一方向的大肠杆菌生长和繁殖并提示在所观察到的大肠杆菌生命周期中有1次以上的繁殖 .由此提出一个新的细菌生命模式 :每个细菌都有一个稳定的细胞极性并会转变成不同代的 2个细菌 ;每个细菌的生命周期可含有 1次以上的生殖周期 ;每个细菌的年龄应以它所经历的时间划定 .这个新的细菌生命模式与权威的细菌生命概念不同 ,但符合从直接观察大体生物所得出的所有基本生命原则 .     

真核基因反义RNA研究进展

反义RNA是指能与特定mRNA互补的RNA片段。本文介绍了近年来真核基因反义RNA研究的一些进展,包括不同基因反义RNA的作用,反义RNA抑制作用的特点,以及反义RNA的抑制机理。反义RNA对基因表达具有高度专一性的调控作用,因此可利用它研究特定基因在细胞生长、分化中的作用,同时,反义RNA系统也可用于抑制有害基因的表达,从而为治疗提供新的途径。     

真核基因转录的负调控机理

本通过对目前关于真核基因表达调控方面研究成果的综合分析,提出了真核基因转录的十种负调控机理,即竞争作用、复制作用、隔离作用、隐蔽作用、沉默作用、变构作用、修饰作用、锁合作用、反义作用及转座作用,并引证进行了初步讨论。     

支原体、G~-细菌和某些G~+细菌共同具有类似的蛋白质抗原的证据

<正>在人型支原体的膜蛋白特性的研究过程中,人型支原体的一个主要膜相关蛋白45KDa膜蛋白的特异抗体呈现和一些支原体属细菌的约42～48KDa的膜相关蛋白的强烈交叉反应。研究了抗发酵型支原体的43KDa膜蛋白的特异抗体和一些支原体以及细菌株的交叉反应性。在所检测的支原体、G~-细菌以及是G~+的金黄色葡萄球菌中,发现了取决于细菌本身的显而易见们分子量为42000～48000的交叉反应抗原(称为45000分子重量[45K]蛋白质)。     

ThioFusion表达系统：——大肠杆菌中表达可溶性蛋白的重大突破

ＴｈｉｏＦｕｓｉｏｎ表达系统──大肠杆菌中表达可溶性蛋白的重大突破马雪梅,黄秉仁,蔡良婉（中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室,北京１００００５）在细菌中生产重组蛋白快速、简便,可以产生大量目的蛋白。然而,在大肠杆菌中表达异源蛋白...     

“细菌移位”还是“细菌易位”？

关于“Bacterial translocation”的研究虽已有几十年的历史,但是国内文献对将“Bacterial Translocation”翻译为“细菌移位”还是“细菌易位”还一直存在广泛争议。为对“Bacterial Translocation”的准确翻译提供理论依据,本文阐明了其研究背景及定义、发生机制及生物学意义;系统总结了国内文献中“细菌移位”和“细菌易位”的使用现状,从中文词义和生物学过程2个角度探讨了“Bacterial Translocation”对应的中文翻译;最终认定翻译为“细菌移位”更准确、认可度更高、更有利于推进相关研究的规范化。     

小鼠紧密连接蛋白ZO-2 真核表达载体的构建和表达

目的:克隆小鼠紧密连接蛋白ZO-2(zonula occludens protein2)基因构建其真核表达载体,并验证其在293T细胞系中的表达,为进一步研究其功能奠定基础。方法:从小鼠淋巴结来源的cDNA中分三段分别扩增,通过基因克隆方法获得紧密连接蛋白ZO-2基因全长,连接至pMD-18T载体中,酶切测序正确后,插入pEGFP-C2载体中,构建真核表达载体pEGFP-C2-ZO2。酶切正确后,瞬时转染入293T细胞中,48h后荧光显微镜观察其绿色荧光GFP融合蛋白的表达,并用Western blot检测其在转染细胞中的蛋白水平表达。结果:通过酶切鉴定和测序结果证明成功克隆了ZO-2基因,western blot结果表明成功构建了真核表达载体pEGFP-C2-ZO2。结论:小鼠紧密连接蛋白ZO-2基因的获得和真核表达载体pEGFP-C2-ZO2的成功构建为下一步研究其生物学功能奠定了基础。