人工会成柞蚕杀菌肽D基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

以质粒pWR450为载体,克隆了人工合成的柞蚕杀菌肽D基因(122bp),构建的重组子pWR450-Cec转化大肠杆菌JM103、用限制性内切酶酶切鉴定。产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果显示可表达杀菌肽-β-gal融合蛋白。     

杀菌肽的研究进展及应用前景

杀菌肽是在昆虫体内诱导产生的一类具有强抗菌活性的、由30多个氨基酸组成的多肽.它的特殊空间结构可以使原核细胞膜形成孔洞,导致细胞死亡,对真核细胞膜却无此作用.哺乳动物体内亦存在类似的有抗菌活性的多肽,杀菌肽因其广谱杀菌活性而引起了植物学家和医学家的注意.已被用于植物抗病原菌和医学研究.     

乳酸杆菌造成的微环境对阴道毛滴虫的影响

目的:研究乳酸杆菌产生的微环境对阴道毛滴虫的影响,为新型微生态制剂的开发提供可靠依据.方法:于滴虫生长高峰期分别将0.25 ml,0.5 ml,1.0 ml,2.5 ml已培养、鉴定好的浓度为3.0×108/ml乳酸杆菌加入到最适pH值肝浸汤培养基中,观察不同乳酸杆菌浓度的培养基中滴虫死亡情况.结果:乳酸杆菌浓度为0.5×108/ml与0.14×108/ml、0.27×108/ml、1.0×108/ml比较,在其浓度为0.5×108/ml时滴虫的死亡率明显要高.结论:体外试验中对阴道毛滴虫生长的抑制作用最强的乳酸杆菌浓度为0.5×108/ml.     

柞蚕抗菌肽D中精氨酸、赖氨酸和色氨酸等氨基酸残基的化学修饰

用不同的化学试剂修饰了柞蚕抗菌肽D分子中的色氨酸、精氨酸和赖氨酸等氨基酸残基。NBS修饰抗菌肽D,以及氨肽酶M对抗菌肽D作用的结果表明色氨酸残基对抗菌肽D抑制E.coli D31的作用影响不大。CHD和MLH对精氨酸和赖氨酸残基的修饰,导致抗菌肽D失去抑制E.coli的作用,但可逆地消除CHD和MLH的修饰作用后,抗菌肽D恢复了对E.coli D31的抑菌作用。这些结果初步认为,抗菌肽D抑菌作用与分子中的荷电性有关,改变了分子的电荷,也就同时失去了其抑菌功能。 此外,对精氨酸残基修饰的结果还表明,抗菌肽D的免疫原性与精氨酸残基有关。但是,抗菌肽D的免疫决定簇与其生物活性中心并不完全平行。     

荆芥体外抗阴道毛滴虫作用机制的实验研究

目的探讨荆芥体外杀灭阴道毛滴虫的作用机制。方法将浓度为1∶4的荆芥水提液作用于体外培养的阴道毛滴虫,并采用透射电镜观察经药物作用2 h和4 h后阴道毛滴虫的超微结构变化。结果荆芥作用后阴道毛滴虫多聚核糖体解聚,粗面内质网脱颗粒,胞质内可见大量空泡;随药物作用时间延长,核膜不完整,核质变疏松;最终,胞膜破损,内容物外溢,虫体死亡。结论荆芥可破坏阴道毛滴虫的内膜系统,具有较强的抗滴虫作用。     

溶氧对杀菌肽-X发酵工艺的影响

本研究采用 30L自动控制发酵罐研究了重组杀菌肽 X工程菌的基本发酵条件。经 12h发酵培养 ,发酵培养基中氨苄青霉素浓度为 0和 100μg/mL时 ,包涵体得率基本一致 ,干重分别为1.24和1.20g L ;控制溶氧为 20%～30%和溶氧自然变化 (转速分别为 250和150r/min)的条件下 ,包涵体得率有较大差异 ,干重分别为0.05、0.71和1.24g L。在较优化的发酵条件下 ,目的融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 45%～50%。     

肝杀菌肽与酒精性肝病相关的铁过剩

酒精性肝病是一种由于过量食用酒精而导致的肝损伤性疾病,该病往往伴发肝脏铁过剩而出现铁沉积,进而导致肝纤维化甚至肝硬化而威胁生命.最新研究发现,酒精性肝病造成的铁过剩是由于一种铁调节激素肝杀菌肽的浓度异常所致,乙醇代谢可以减少肝杀菌肽在肝内的表达,肝杀菌肽浓度降低可使血清铁升高而引发肝脏铁沉积,这项研究为预防和治疗酒精性肝病的相关并发症带来了希望.     

乳杆菌生态消毒剂对阴道毛滴虫的抑制作用研究

目的:在实验室对以乳杆菌发酵液为主要成分的乳杆菌生态消毒剂进行杀灭阴道毛滴虫效果观察.方法:采用定量抑菌试验方法进行.结果:以该剂原液、5倍稀释液和10倍稀释液对阴道毛滴虫作用4 h以上,对滴虫的抑制率都超过90%以上.结论:伊清爽乳杆菌阴道生态消毒剂具有抑制阴道毛滴虫的作用,是新一代保健型阴道卫生用品.     

乳酸杆菌的代谢产物对体外培养的阴道毛滴虫的影响

目的研究乳酸杆菌代谢产物对体外培养的阴道毛滴虫的杀伤作用。方法检测不同浓度的乳酸杆菌代谢产物对体外培养的阴道毛滴虫在不同作用时间下的杀伤率。结果乳酸杆菌代谢产物浓度10%,作用时间2 h、4 h和6 h体外培养毛滴虫的杀伤率分别为26.43%、37.47%和46.35%;浓度25%时杀伤率分别为43.56%、74.65%和90.15%;浓度50%杀伤率分别为92.36%、95.23%和99.01%。结论乳酸杆菌代谢产物的浓度越高,对体外培养的毛滴虫的杀伤力越大,作用时间越长,效果越好。     

柞蚕蛹抗菌肽D对大肠杆菌K_(12)D_(31)的作用

本文报道了不同浓度的柞蚕蛹抗菌肽D,对大肠杆菌K_(12)D_(31)的杀灭作用动力学。在LEG培养液中,抗菌从D的浓度在5微克/毫升时显效。浓度在10微克/毫升以上时,其杀菌速度大于细菌的增殖速度。固定抗菌肽浓度为10微克/毫升,细菌浓度在3×10~7个细菌/毫升,培养在磷酸钾盐缓冲液中,4小时后能全部杀灭。同样浓度细菌在LEG培养液中,4小时后细菌数下降到约为10~2个细菌/毫升,但不能全部杀灭。同时还提供了柞蚕蛹抗菌肽D和B对大肠杆菌K_(12)D_(31)作用不同时间的电镜照片。     

肽类生长因子对抗癌基因的诱导作用

观察了肽类生长因子对２ＢＳ细胞中抗癌基因表达的影响,结果表明,ＥＧＦ或ＦＧＦ均可明显诱导２ＢＳ细胞中Ｒｂ基因的表达,其幅度分别为３０５％,２４３％;ＥＧＦ也可诱导２ＢＳ细胞中ＴＧＦβ１基因表达增加３０－５０％,但ＦＧＦ对ＴＧＦβ１的表达无明显影响;ＥＧＦ或ＦＧＦ对Ｐ５３基因的表达均无明显诱导作用。上述结果为生长因子作用机制研究及生长因子与抗癌基因的关系提供了新的线索。     

细胞松弛素D对小鼠乳腺腺癌细胞系(MA782/5S-8102)细胞的作用

本文研究了细胞松弛素D(CD)对小鼠乳腺腺癌细胞系(MA782/5S-8102)细胞的作用,统计了在0.4微克/毫升CD作用下的多核细胞形成率,并与HEp2细胞及正常婴兔肾原代培养细胞进行比较。结果表明:CD处理48小时后,肿瘤细胞形成大量的多核,≥3核的细胞数在MA782/5S-8102细胞中为37.05％,在HEp2细胞中为18.37％。正常婴兔肾原代培养细胞经同样处理后≥3核的细胞数只有0.059％。肿瘤细胞多核形成的比例会随CD处理时间的延长而显著增高,并出现排核现象。CD处理96、144小时后的多核细胞数,MA782/5S-8102细胞分别为47.90％,53.12％,HEp2细胞分别为43.94％,51.94％,而正常婴兔肾原代培养细胞则仅为0.26％和0.39％,亦未见排核现象,肿瘤细胞和正常细胞对CD的不同反应,有可能作为鉴别肿瘤细胞与正常细胞的一个简便易行的工具。     

脑细胞生长肽对GM耳毒性的预防作用

目的：观察脑细胞生长肽（cerebral cell growth peptide,CCGP)对庆大霉素（gentamicin,GM)引起的豚鼠耳中毒的预防作用）。方法：用脑干听觉诱发电位（brainstem auditory evoked potential,BAEP)和组织化学方法分别检测动物听阀的变化和耳蜗毛细胞线粒体内琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH)及溶酶体内的酸性磷酸酶（acid phosphatase,ACP)活性变化,并在三组动物进行耳蜗受损毛细胞计数。结果：CCGP能降低GM引起的BAEP反应阈的上升幅度,保护耳蜗毛细胞SDH和维持溶酶体的完整性,减轻毛细胞的损伤。结论：CCGP能降低GM的中毒性;保护耳蜗毛细胞SDH,维持毛细胞的能量代谢,减少溶酶体损伤,降低溶酶体内水解酶逸出引起的毛细胞自溶性损伤,可能是CCGP预防GM耳毒性的机制之一。     

宫颈癌细胞系中HPV病毒感染与P16和E-cadherin表达的相关性分析

目的探讨宫颈癌细胞系中HPV感染状态与P16和E-cadherin表达之间的相关性。方法应用免疫细胞化学染色、免疫荧光、Western-blot以及RT-PCR的方法检测HeLa、SiHa和C33A三个细胞系中P16和E-cadherin的表达情况。结果HPV阳性的两个细胞系HeLa和SiHa中P16的表达呈强阳性而E-cadherin的表达呈弱阳性,HPV阴性的细胞系C33A中P16的表达为弱阳性而E-cadherin呈强阳性表达。结论宫颈癌细胞系中HPV的感染与P16的表达呈正相关而与E-cadherin的表达呈负相关。     

降钙素基因相关肽和心房肽对犬冠脉的舒张作用

本实验利用冠脉内给药和离体血管灌流等方法观察比较了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）和心房肽（ＡＮＰ）对犬冠脉循环的影响及其对犬大小冠状动脉的舒张作用。结果显示,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ均能明显增加冠脉血流量、降低大小冠脉阻力,两者均呈剂量依赖性舒张大小脉冠脉血管。ＡＮＰ的作用显著小于ＣＧＲＰ,其中大冠脉对两者的反应性显著小于小冠脉,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ对冠脉的舒张作用均无内皮依赖性。结果提示,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ直接     

联合补充维生素D、胶原肽和钙对成骨细胞发育的影响研究

目的：观察联合补充维生素D、胶原肽和钙对MC3T3-E1成骨细胞增殖及对骨保护素细胞内核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）、骨保护素（Osteoprotegerin,OPG）基因表达的影响。方法：α-MEM培养基培养MC3T3-E1细胞。检测Ca2+（20 μg/mL）、维生素D（0、10-12、10-11mol/L）、胶原肽（0、50、100μg/mL）三者交互作用剂量对MC3T3-E1细胞增殖的作用及RANKL、OPG mRNA表达。结果：维生素D、胶原肽和钙交互剂量作用下细胞增殖水平无明显差异。维生素D联合钙能够明显降低RANKL mRNA表达水平,提高OPG mRNA表达水平,降低RANKL/OPG比值。而胶原肽联合钙对RANKL以及 OPG mRNA表达无明显影响。结论：维生素D联合钙可通过抑制小鼠成骨细胞RANKL mRNA表达、促进OPG mRNA表达,从而促进骨的形成,抑制骨的吸收。维生素D和钙联合补充胶原肽,对成骨细胞RANKL,OPG mRNA表达并无明显影响。     

阴道毛滴虫症状株和带虫株黏附蛋白33基因的克隆和序列比较

目的分析和比较阴道毛滴虫症状株和带虫株黏附蛋白33基因序列。方法提取阴道毛滴虫各分离株基因组DNA,PCR扩增目的基因,构建重组质粒,克隆,鉴定和序列比较。结果黏附蛋白33基因长度约为930bp,成功构建pMD-18T-ap33重组质粒。同GenBank上的黏附蛋白33基因序列比较,症状株黏附蛋白33基因序列与已知序列有2个碱基不同,而带虫株黏附蛋白33基因序列与已知序列有1个碱基存在差别。结论阴道毛滴虫症状株和带虫株黏附蛋白33基因序列存在差异。     

脑钠肽和D二聚体对老年心功能不全严重程度的关系及预后的影响

目的：探讨BNP和D二聚体对老年心功能不全严重程度的关系及预后的影响。方法：以2010年1月-2012年12月来我院就诊的慢性心功能不全患者为观察对象,根据心功能不全程度分为无症状组、心功能不全II级、III级、IV级3,另取健康体检者为对照,比较各组间BNP、D二聚体水平及相关性分析。结果：各患者组BNP和D二聚体水平与对照组相比明显增加（P〈0．05）;BNP与心功能不全分级、LVEDD、LAD呈直线正相关关系（P〈0．05）,与LVEF呈直线负相关关系（P〈0．05）;D二聚体与心功能不全分级、LVEDD呈直线正相关关系（P〈0．05）,与LVEF呈呈直线负相关关系（P〈0．05）,与LAD直线关系无统计学意义（P〉0．05）;BNP水平1000pg／mL以下治疗有效率80．2％,疗效优于1000pg／mL以上者（Riditz=15．245,P=0．000）,D二聚体5μg／mL以下者治疗有效率85．4％,疗效优于5μg／mL以上者（Riditz=26．354,P=0．000）。结论：BNP和D二聚体与老年心功能不全严重程度和超声心动图指标密切相关,可以作为疾病预后预测。     

牛骨胶原低聚肽对小鼠伤口愈合作用的研究

目的：研究牛骨胶原低聚肽对正常小鼠伤口愈合的影响及探讨其可能作用机制。方法：SPF级ICR雄性小鼠240只,随机分为1个对照组和5个BCOPs剂量组（0.375、0.75、1.5、3.0、6.0g/kg·BW）。用打孔器建立皮肤打孔手术模型,术后连续灌胃16 d,并在术后第4、8、12、16 d分批处死老鼠,测量不同时间点小鼠伤口剩余面积,检测血清中基质细胞衍生因子（SDF 1α）浓度,并进行HE染色行病理组织学观察。结果：与对照组相比,牛骨胶原低聚肽组小鼠术后伤口面积明显缩小（P＜0.05）,血清SDF 1α浓度显著增加（P＜0.05）。并且同一时间点HE染色显示,牛骨胶原低聚肽组小鼠皮肤伤口上皮化水平、血管增生及纤维母细胞水平均优于对照组。结论：牛骨胶原低聚肽具有促进小鼠术后伤口愈合的作用,其机制可能与提高血清SDF 1α浓度有关。