影响木薯次生胚状体发生及植株再生因素的研究

研究了在外植体的不同发育阶段中,碳源以及不同的生长激素配比对木薯次生胚状体诱导及植株再生的影响。结果表明：以固体成熟培养基上生长１５ｄ的胚状体子叶为外植体,次生胚状体的产量最高,达２９．３个成熟胚状体／１个外植体。在次生胚状体的诱导阶段,以麦芽糖（４０ｇ／Ｌ）代替蔗糖作碳源,能同时提高次生胚状体的产量（３２．５个胚次体／１个外植体）及植株再生频率（７４．３％）。２,４－Ｄ与ＰＰ３３３;（０．１ｍｇ／Ｌ）配合能提高植株再生频率到７７．６％。２,４－Ｄ与ＢＡＰ（２ｍｇ／Ｌ）或激动素（２．０ｍｇ／Ｌ）配合则大大降低了胚状体诱导及植株再生频率。     

几种生长素对木薯体细胞胚发生和植株再生的作用

木薯（ＭａｎｉｈｏｔｅｓｃｕｌｅｎｔａＣｒａｎｔｚ）嫩叶外植体在含２,４－Ｄ（１－１６ｍｇＬ－１）或ＮＡＡ（４０ｍｇＬ－１）的诱导培养基上能直接诱导初生体细胞胚胎发生,而低活性的生长素ＩＢＡ或ＩＡＡ（４０ｍｇＬ－１）或低浓度的２,４－Ｄ（０．１ｍｇＬ－１）则不能。而以木薯初生体细胞胚切段为外植体时,次生体细胞胚的诱导对生长素的活性或浓度的要求降低。降低生长素浓度或活性能缩短体细胞胚诱导时间并促进根的形成,有利于提高体细胞胚的再生频率。体细胞胚外植体在诱导培养基上的培养时间对下一步体细胞胚胎发生的诱导产生影响。通过石腊切片观察,在含２,４－Ｄ诱导培养基上,木薯体细胞胚不能形成芽分生组织。结果表明,２,４－Ｄ等生长素类物质对诱导木薯体细胞胚胎发生是关键因子,但对体细胞胚的进一步发育和植株再生起抑制作用。     

花生体胚诱导再生体系及基因枪转化条件的初步探讨

以花生上胚轴为外植体,研究不同Picloram(毒莠定)浓度处理和不同基因型对体细胞胚胎发生及植株再生的影响,并利用基因枪将含GUS基因的pCAMBIA2301质粒载体轰击体胚,对基因枪转化条件进行了初步探索.结果表明:外植体在添加5 mg/ L Picloram+1 mg/L Glutamine(谷氨酰胺)的MB培养基上诱导的体胚发生率、产胚数及植株再生率最高.不同基因型以‘中花8号'体胚再生率最高(体胚诱导率为55.36%,植株再生率为56.79%).在氦气压力为1 100 psi,轰击距离为9 cm时,体细胞胚GUS瞬时表达率可达到22.95%.     

番木瓜体细胞胚胎发育与植株再生

以番木瓜(穗中红-48)漏斗型体细胞胚胎为材料,探讨体细胞胚胎发育及植株再生的适宜条件。研究结果表明,附加2%椰乳、0.1mg/L ABA及40g/L蔗糖的MS固体培养基较适合番木瓜漏斗型胚状体的发育及成熟。充分成熟的子叶型胚状体在大量元素减半、蔗糖含量30g/L的MS培养基上,配合15001x光照可再生健康小植株;再生率为78%。     

影响大豆体细胞胚诱导因素的研究

体细胞胚的诱导是大豆体外再生的关键。基因型,诱导光周期,外植体的英位,蔗糖浓度等因素,可导致诱导频率及正常胚比例不同,影响植株再生。本研究选用黑龙江省主栽大豆基因型的未成熟子叶,在含高浓度生长素的MSB培养基上诱导体细胞胚产生。合丰25和东农7819为优选基因型,生育前期下部英位大小为2－4mm未成熟子叶体细胞胚发生效果最好;四种光周期下体细胞胚诱导频率相近,但连续弱光了正常胚比例高;NAA诱导优于2－4,D;10mg/1NAA与1．5％蔗糖配比组合最佳。     

白刺花胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生和萌发

探讨不同因素对白刺花下胚轴、子叶2种外植体胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生和萌发的影响。以B5和MS为基本培养基,研究2,4-D、6-BA和TDZ对白刺花下胚轴和子叶胚性愈伤组织的诱导;在MS培养基上添加不同浓度2,4-D,研究胚性愈伤组织增殖情况;采用ABA,探究对体细胞胚发生的影响。结果表明:下胚轴比子叶更易诱导胚性愈伤组织,筛选出2种外植最佳的胚性愈伤组织诱导培养基均为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L 6-BA,胚性愈伤组织诱导率分别为77.3%和41.0%。15.0 mg/L ABA、0.2 mg/L 2,4-D和2.0 mg/L 6-BA有利于体细胞胚发生,1/3MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+2.0 g/L活性炭+25 g/L蔗糖+7 g/L琼脂的培养基可使体细胞胚萌发率达80%以上,再生植株移栽成活率高达90%。白刺花外植体种类及培养基类型均会影响胚性愈伤组织的诱导,其中下胚轴诱导效果优于子叶;MS培养基较适合启动细胞脱分化形成愈伤组织,2,4-D对胚性愈伤组织的增殖保持有调控作用,ABA有利于体细胞胚的发生。     

木薯体细胞胚胎发生及植株再生研究

对木薯体细胞胚胎发生的影响因素进行了优化研究。结果表明,基因型对木薯体细胞胚胎发生影响很大,在供试的六个品种中,“华南 8 号”的体细胞胚胎发生率和产胚量最高,分别为 65% 和19个;侧芽茎尖为最佳外植体,体细胞胚胎发生的最佳培养基为MS +0.5mg/L CuSO4 + 4 mg/L 2,4-D。同时,对木薯体细胞胚再生成完整植株的主要影响因素作了分析,建立了一个高效的植株再生体系。     

棉花高频体细胞胚胎发生及再生体系建立

棉花的体细胞胚胎发生率低,限制了转基因棉花的发展。为了扩大可再生棉花的基因型,发展新疆优质棉花的特点,以新疆的主要栽培品种新陆早33为材料,以下胚轴为外植体,使用葡萄糖,麦芽糖作为主要碳源,用Phytagel固化,对不同激素的浓度组合和培养条件进行探索,对棉花胚性愈伤的诱导到体细胞胚胎的发生阶段进行优化,体细胞胚胎成熟以后进行萌发培养可以获得正常的植株。通过试验证明,有利于棉花的愈伤组织生长的激素浓度为KT 0.1 mg/L,2,4-D 0.1 mg/L,下胚轴的中部诱导愈伤形态最好。体细胞胚胎发生阶段以KT,IBA组合,以低盐培养基进行子叶胚的成苗,建立了再生体系。     

从木薯嫩叶直接诱导初生体细胞胚胎发生和芽的形成

以木薯（ＭａｎｉｈｏｔｅｓｃｕｌｅｎｔａＣｒａｎｔｚ）品种“南植１８８”的嫩叶为外植体,用１０～８０ｍｇ／ＬＮＡＡ能直接诱导初生体细胞胚胎发生和芽的形成。与用４ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ诱导木薯嫩叶产生初生体细胞胚及其植株再生相比,ＮＡＡ具有以下特点：它不仅能直接诱导初生体细胞胚发生,而且能直接诱导芽的形成;而２,４Ｄ只能诱导体细胞胚胎发生而不能诱导芽的形成。ＮＡＡ诱导初生体细胞胚较快,在培养９～１３ｄ后就能见到初生体细胞胚的形成,在培养１０～１４ｄ就能见到芽的形成;而２,４Ｄ所诱导的体细胞胚至少在培养１５ｄ后才能见到。ＮＡＡ诱导的初生体细胞胚的植株再生频率可高达４８％;而２,４Ｄ所诱导的体细胞胚的再生频率只有４．１％。实验结果还证实,在供试的另外１６个木薯品种中,有１２个品种能够直接从嫩叶诱导初生体细胞胚胎发生或芽的形成。     

白鹤芋体细胞胚胎发生及组织学研究

本研究以白鹤芋品种‘Mojo’的根茎为外植体,研究不同外源激素配比对体细胞胚胎发生的影响,筛选出最佳胚性愈伤及体胚的诱导配方。其后采用体式显微镜和石蜡切片技术对体胚发生途径中的典型时期进行形态学和组织学观察。结果表明,4 mg/L 2,4-D与0.5 mg/L KT作用时,白鹤芋胚性愈伤组织诱导效果最佳,诱导率达87.44%;体细胞胚胎诱导的最佳配方为1.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA。白鹤芋是单子叶植物,其体细胞胚胎的形态形成过程与单子叶植物胚的形态形成过程类似。研究结果表明,白鹤芋体细胞胚胎的形态形成主要分为以下几个阶段:胚性细胞、胚胎、球形胚、椭圆形胚、盾形胚、子叶型胚、成熟体细胞胚。     

‘哲引3号’ב北京杨’杂交子代悬浮细胞系的建立和植株再生

采用“固—液—液—固”培养方法,分别以［‘哲引3号杨’（Populus pseudo-simonii×P.nigra ‘Zhenyin3#’）ב北京杨’（P.×beijingensis）］杂交子代的种子、子叶和下胚轴为材料,开展了多个杂交子代悬浮细胞系建立和培养研究,结果显示：（1）不同基因型的种子愈伤诱导率差异显著,不同基因型的子叶、下胚轴愈伤诱导率差异不显著;不同基因型的初始悬浮细胞系密实体积差异均显著。（2）采用静置分层和细胞筛双层过滤结合的方法能把游离胚性细胞从初始悬浮细胞系中分离出来,不同基因型来源的游离胚性细胞数量差异不显著。（3）种子和子叶来源的胚性悬浮细胞系能在不含NH+4的液体培养基中诱导出球形愈伤,这些愈伤薄片能在含有CPPU的分化培养基上实现植株再生,最后共获得了20个基因型的来自种子球形愈伤的再生植株和另外20个基因型的来自子叶球形愈伤的再生植株。     

欧石楠体细胞胚发生和植株再生

以欧石楠茎段为外植体,研究其体细胞胚胎发生和植株再生。对影响茎段不定芽分化及胚性愈伤组织诱导的主导因子进行比较分析,并研究其体胚萌发、生根及移栽;同时,采用树脂切片法对茎段脱分化产生胚性愈伤组织及体胚发育过程进行组织细胞学观察。结果表明,接种在1／2WPM基本培养基上的茎段,胚性愈伤组织诱导率为88．7％,显著高于其他处理,不定芽诱导率可达90．6％,平均分化倍数为3．6个,平均分化苗高3．82cm;体细胞经过成熟培养后。在添加1．0mg·L-1 ZT和0．3mg·L-1 IBA的1／2WPM培养基上萌发,萌发的体胚在I／2WPM附加0．2mg·L-1 NAA和0．3mg·L-1 IBA的培养基上形成完整的体胚苗植株,体胚苗生根率达到87．4％,经炼苗后移栽到蛭石：珍珠岩=3：1（V／V）的栽培基质中,成活率可达63．7％。在显微镜下可观察到球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚;体细胞胚以间接方式发生,表现为愈伤组织外层细胞直接发生和愈伤组织组织内部细胞发生。     

花生体细胞胚的诱导及其植株再生

采用不同成熟度的花生胚轴为外植体进行体细胞胚诱导及植株再生研究,结果表明,成熟胚轴在高浓度2,4－D的MS培养基中,经过30d左右的培养,可直接诱导产生出大量的体细胞胚,含40mgL~－12,4－D的培养基中体细胞胚的诱导率达100％,平均每个外植体产生11．58个体细胞胚．体细胞胚的继代培养需降低2,4－D的浓度（1－20mgL~－1）．未成熟胚轴的体细胞胚诱导及继代培养的2,4－D浓度宜为10mgL~－1．将诱导的体细胞胚转接到合5－10mgL~－1BA的MS培养基中,体细胞胚能够萌发再生成无根小植株,将其转接到生根培养基中可获得完整小植株．     

花楸合子胚诱导体细胞胚胎发生研究

分别以完整成熟胚、切去一个子叶的成熟胚和切下的子叶为外植体,以MS为基本诱导培养基、1/2MS为基本分化培养基,进行了花楸体细胞胚胎发生研究。结果表明:以完整合子胚作为外植体的体胚诱导率最高,为100%,最佳植物生长调节剂组合为5 mg.L-1NAA+2 mg.L-16-BA;NAA和6-BA浓度及二者的交互作用对愈伤组织和体胚诱导率的影响极显著;光照配合延长继代间隔时间有利于体胚发生。实体观察结果表明,花楸体胚发生方式有直接发生和间接发生两种;体胚发育经历了球形期、心形期、鱼雷形期和子叶期。组织学观察结果表明,体胚具有两极性,子叶期体胚结构完整。     

大豆体细胞胚增殖保存与萌发植株体系的建立

以大豆(Glycine max(L.)Merr.)未成熟子叶为外植体,用高浓度生长素诱导东北地区主栽大豆的18个基因型体细胞胚胎发生,诱导率为0.29%～77.62%.在此基础上成功地诱导10个大豆基因型产生可继代增殖的体细胞胚,诱导率在5.2%～22.1%之间.经在固体培养基上多次继代增殖,首次建立了可在固体培养基上继代增殖的大豆体细胞胚萌发再生体系,继代一年以上的体细胞胚仍具有萌发能力和正常育性,得到了结荚植株.此体系的建立为大豆的遗传转化提供了新的、更为有效的受体体系.     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因导入大豆的研究

用苏云金芽孢杆菌(BacillusthuringiensisBerliner)杀虫晶体蛋白(Bt)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因通过基因枪轰击和根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)介导转入大豆(Glycinemax(L.)Merr.),诱导大豆转基因植株再生。大豆主栽品种“中黄4号”和品系8502未成熟子叶有较强体细胞胚分化能力。体细胞胚的脱水处理显著促进“中黄4号”体细胞胚的萌发。未成熟子叶的预培养有利于根癌土壤杆菌感染子叶外植体体细胞胚的分化。基因型和受体的选择,转基因体系的改进,体细胞胚的脱水处理等是提高大豆转基因效率的重要因素。     

橡胶树未成苗体细胞胚的茎芽分化及利用

以橡胶树未成苗体细胞胚为试材,选取未成苗双子叶胚、连体胚、多子叶胚、单子叶胚和子叶愈伤化胚作为外植体,研究不同体细胞胚类型的外植体分化茎芽的情况,并利用其进行幼态微型芽条的培育研究。结果表明:在植株诱导培养基中培养80d后,未成苗双子叶胚、连体胚、多子叶胚、单子叶胚、子叶愈伤化胚均能分化出芽,双子叶胚分化率最高(达90%),单子叶胚最低(20%),多子叶胚和连体胚最多可分化出芽3个,双子叶胚2个。幼态微型芽条增殖的最优培养基为MS+6-BA2mg·L-1或MS+6-BA2mg·L-1+KT1mg·L-1,而添加NAA对芽的伸长有抑制作用;适宜幼态微型芽条伸长培养的基本培养基为MS。     

枣合子胚和体细胞胚发育过程的观察与比较

本实验对临猗梨枣、壶瓶枣、晋矮1号等13个品种的枣胚的发育过程进行了观察,并诱导晋矮1号成熟胚的愈伤组织通过体细胞胚发生途径形成再生植株。结果表明:体细胞胚产生于愈伤组织的表层细胞或内部细胞。在鱼雷胚期已有导管的分化,子叶期的维管组织呈“Y”形。枣合子胚及体细胞胚的发育均经历了原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚五个时期。大多数品种的枣胚从球形胚期或心形胚期即开始败育,只有极少数品种可发育到成熟胚,而且合子胚形成的能力、胚败育时发育的程度等均存在着大的品种间差异,同一品种甚至同一子房内胚的发育进程也不同步。     

何首乌体细胞胚的诱导及植株再生研究

以何首乌茎尖、茎段为外植体,经体细胞胚发生途径,进行胚性愈伤组织诱导、体细胞胚的诱导、植株再生的研究.并采用临时压片法对体细胞胚的发育过程进行观察.结果表明愈伤组织诱导最适培养基为Ms＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L,体细胞胚诱导最适培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L.将产生的体细胞胚首先接种于MS基本培养基使其充分发育后转入MS＋6-BA 2.0 mg/L培养基中诱导出芽,出芽率高于直接采用Ms＋6-BA 2.0 mg/L培养基诱导.体细胞胚的发育过程是首先在愈伤组织表面形成许多瘤状突起即胚性细胞团,胚性细胞团继续发育成球形胚、盾形胚,球形胚、盾形胚成熟后发育成植株.     

盐肤木体细胞胚胎发生及植株再生

以盐肤木(Rhus chinensis Mill.)幼胚为外植体,研究不同植物生长调节剂组合对其愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生的影响,以建立盐肤木体细胞胚胎发生及植株再生体系。结果表明,最适愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 0.2 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,诱导率为84.57%,诱导出的初代愈伤组织白色或淡黄色,质地疏松,表面光滑,为非胚性愈伤。初代愈伤组织转移到1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基上培养1个月后,长出淡黄色质地紧密的胚性愈伤组织,诱导率高达100%,在此培养基上胚性愈伤组织增殖倍数为854.73%。所获得的胚性愈伤组织转接到1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖4%的培养基上培养1个月后可诱导体细胞胚胎发生,诱导率可达32.67%。诱导得到的体细胞胚胎经历球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚进一步分化发育成苗。无菌苗炼苗后栽种到泥炭土∶蛭石∶珍珠岩为2∶1∶1的生长基质上,能100%稳定成活。经过细胞学观察分析,体细胞胚的发育与合子胚相似。