高良姜素通过PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌发展并增加曲妥珠单抗抗肿瘤活性

本文旨在研究中药高良姜素对人乳腺癌的治疗作用,对乳腺癌治疗靶向药物曲妥珠单抗抗癌活性影响及其机制。通过建立乳腺癌肿瘤移植模型,研究高良姜素、曲妥珠单抗以及联合用药后的乳腺癌肿瘤进展,试验结束后获取组织进行免疫化学和免疫荧光分析,并进一步检测不同药物处理对细胞侵袭和转移能力的影响,通过TUNNEL法进行细胞凋亡分析,通过流式细胞术测定细胞周期,使用蛋白质印迹测定PTEN和AKT途径相关蛋白的表达,使用定量PCR测定PTEN以及AKT途径mRNA水平。结果显示,与对照组相比,高良姜素处理可以促进乳腺癌细胞中PTEN表达进而降低蛋白激酶B水平,抑制凋亡相关蛋白MDM和p53的激活,并增加Caspase-3的表达,最终抑制乳腺癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡,而体内实验显示,高良姜素可以抑制裸鼠体内的肿瘤生长,并促进曲妥珠单抗的体内抗肿瘤活性。上述结果表明,高良姜素通过调控PTEN/AKT抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制乳腺癌肿瘤进展,同时增加曲妥珠单抗抗癌活性。     

虫草素联合阿霉素干预乳腺癌细胞增殖及转移作用

研究了虫草素联合阿霉素在体外抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及转移作用,评估了联合用药的作用效应,为虫草素在临床应用上增强抗乳腺癌作用提供了科学数据。研究结果表明,联合用药比单独用药作用效果更明显,根据Chou-Talalay法显示出在80μmol/L虫草素联合1μmol/L阿霉素的条件下,联合用药协同作用最优,CI值为0.665,细胞抑制率达到60.31%±1.06%;与对照组相比,平板克隆形成实验证明联合用药显著抑制细胞增殖,克隆形成率仅为7.03%±1.19%;显微观察细胞形态变化表明联合用药明显影响细胞生长;Hochest 33258染色、DNA Ladder发现联合用药对细胞凋亡诱导作用更显著,细胞凋亡率可达78.52%±11.18%;细胞划痕愈合实验检测联合用药显著抑制细胞迁移,细胞迁移率仅为18.82%±2.43%。本研究确证虫草素可协助阿霉素治疗乳腺癌的增敏作用。     

虫草素对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

本文探究蛹虫草活性成分虫草素对四氯化碳（CCl₄）造成的小鼠急性肝损伤的保护作用及其分子机制。首先建立四氯化碳致小鼠急性肝损伤的动物模型,通过检测血清生化指标、肝功指标的变化及HE染色观察组织切片病理的病变情况,评价虫草素的保肝效果,进一步通过Western blot检测虫草素能否通过激活Nrf-2/Keap1信号通路及其下游抗氧化因子（HO-1、NQO-1）的表达来提高机体抗氧化损伤能力以及抑制炎症因子（TNFα、TNFβ、IL-6、IL-10）的表达。对比模型组结果显示,虫草素能极显著降低（P<0.01）小鼠血清中ALT、AST及肝脏中MDA水平,并能极显著提高肝脏中SOD水平（P<0.01）;HE染色结果显示虫草素能有效降低改善受损肝组织中的炎细胞浸润及纤维组织增生;Western blot结果表明虫草素能够通过激活Nrf-2信号通路,促进下游抗氧化因子及抗炎因子的表达,从而降低炎症反应。虫草素对CCl₄致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,其机制与Nrf-2信号通路相关,实验结果为后续蛹虫草及虫草素的开发应用奠定基础。     

海兔素对人乳腺癌SK-BR-3细胞的抑制作用及机制研究

本文阐述了海兔素(Aplysin)对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨了其可能的作用机制.分别采用CCK-8法和流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测定不同剂量海兔素对SK-BR-3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并以Western blot测定SK-BR-3细胞中EGFR、Akt及ERK表达水平和磷酸化水平.结果发现,20、30、40、45、50、55、60 mg/L海兔素处理SK-BR-3细胞24 h后,细胞的生长增殖明显受到抑制,呈量效依赖性,其IC25和IC50值为分别为29.4和33.7 mg/L; IC25和IC50剂量海兔素可明显诱导细胞凋亡,并下调SK-BR-3细胞EGFR、Akt及ERK的磷酸化蛋白表达水平,但是不影响总蛋白表达水平.表明海兔素对人乳腺癌SK-BR-3细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其作用机制可能与海兔素抑制细胞中EGFR蛋白磷酸化,进而阻断下游效应分子Akt和ERK的活化有关.     

虫草素衍生物体外抗肿瘤活性及体内药代动力学研究

本实验以虫草素为母核,合成三个虫草素衍生物,研究其体外抗肿瘤活性以及在大鼠体内的药物代谢动力学。以人肝癌细胞HepG2为研究对象,通过MTT法测定三种虫草素衍生物对其抑制作用。通过HPLC方法考察三个虫草素衍生物大鼠血浆药物浓度随时间变化趋势,检测大鼠血浆中药物含量并评价其药动学特性。研究发现,虫草素衍生物对HepG2细胞的抑制率增加。虫草素及三个衍生物IC_(50)值分别为0.12、0.11、0.07、0.06μM。虫草素衍生物T_(max )时间延长,药物在体内存在时间延长;随着C_(max)的升高,药物在体内的作用浓度升高。     

戴氏虫草菌丝体水提物对放射损伤小鼠体液免疫的作用

为了研究戴氏虫草菌丝体水提物对γ射线辐射损伤小鼠的脾细胞产生抗羊红细胞抗体、血清溶血素水平、淋巴细胞增殖等的影响,以＾６０Ｃｏ γ射线放射损伤小鼠为动物模型,采用脾细胞ＳＲＢＣ溶血反应（ＱＨＳ）比色法测定脾细胞产生抗羊红细胞抗体,溶血素测定（ＨＣ５０）比色法测定血清溶血素水平,ＭＴＴ比色法测定淋巴细胞增殖。结果表明在一定剂量条件下,戴氏虫草菌丝体水提物可以恢复γ射线辐射损伤小鼠脾细胞产生抗ＳＲＢＣ抗体的能力和血清溶血素的水平,同时也能够恢复脾Ｂ淋巴细胞的增殖能力和脾淋巴细胞数目。因此我们初步认为戴氏虫草菌丝体水提物对放射损伤小鼠体液免疫具有保护作用。     

虫草素对786-O和ACHN肾癌细胞系增殖、迁移和凋亡机制探究

探究肾癌细胞系经虫草素给药刺激后,细胞凋亡及迁移的机制。体外培养肾癌786-O细胞系和肾癌ACHN细胞系,采用MTT法、细胞迁移实验、HE染色、免疫荧光染色及蛋白免疫印记法;检验不同浓度虫草素处理肾癌细胞系增殖抑制率、细胞迁移情况、细胞形态变化和细胞核形态差异,检验凋亡相关基因蛋白表达情况,探究虫草素诱导肾癌细胞的凋亡机制。随着浓度剂量提高,虫草素能够显著促进肾癌细胞系凋亡,抑制迁移。形态学研究表明,HE染色观察发现癌细胞数量明显降低,并且细胞核明显变大。免疫荧光染色发现MMP-2、MMP-9和BCL-2蛋白表达显著降低,Bax、Casepase-3和Casepase-7蛋白表达显著增加,肾癌细胞可通过AKT/mTOR信号通路诱导肾癌细胞凋亡。     

木犀草素负向调节核糖体蛋白S12表达抑制MDA-MB-231细胞增殖与侵袭CSCD

木犀草素(luteolin,Lut)对多种肿瘤细的生长具有抑制作用,但对乳腺癌细胞的生物学行为的影响尚不明确,本研究旨在探讨Lut对乳腺癌细胞增殖与侵袭的影响及其作用机制。首先体外培养乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF7),免疫印迹实验检测细胞静息状态下核糖体蛋白S12(ribosomal protein S12,RPS12)表达水平。并采用MTT法、免疫印迹法分别测定不同浓度Lut处理后细胞的增殖水平,胞内RPS12及c-Myc的表达,以及PI3K/Akt、mTOR和S6K的磷酸化。同时采用c-Myc及PI3K/Akt、mTOR抑制剂处理组细胞,分别检测细胞增殖水平以及细胞内RPS12以及c-Myc表达。随后构建RPS12启动子报告基因,研究Lut对其转录的影响。最后在细胞内过表达c-Myc,或采用siRNA沉默RPS12表达,检测细胞侵袭和迁移的变化。结果显示,RPS12在乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7细胞系中均呈高水平表达。采用不同浓度Lut处理细胞后,其增殖均明显降低,PI3K/Akt、mTOR及S6K磷酸化水平与对照组相比有所减弱,c-Myc和RPS12表达也显著受到抑制,PI3K/Ak和mTOR抑制剂也具有类似结果。此外,抑制c-Myc后可显著降低乳腺癌细胞内RPS12表达以及转录活性,但细胞过表达c-Myc后RPS12水平显著增高,而沉默RPS12则可以显著抑制细胞的侵袭和迁移。以上结果表明Lut能够抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的增殖与侵袭,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路进而下调c-Myc的表达,最终抑制RPS12表达有关。     

木犀草素对表皮生长因子诱导的人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制（英文）北大核心CSCD

本研究的目的是探讨木犀草素体外抑制表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导的乳腺癌细胞增殖的机制。MTT法检测了木犀草素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响以及木犀草素对EGF诱导的乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。Western blot法检测了木犀草素对EGF受体、磷脂酰肌醇3蛋白激酶(PI3K)/Akt、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/Erk1/2及转录活化因子3(STAT3)蛋白表达的影响。结果显示,木犀草素能显著抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖,但对MCF-7细胞的影响更显著,因此本文后续实验以MCF-7为研究对象。进一步研究结果显示,木犀草素对EGF诱导的MCF-7细胞增殖也有显著的抑制作用,Western blot结果表明,木犀草素和EGFR通路阻断剂AG1478均能抑制EGF诱导的EGF受体和STAT3蛋白磷酸化水平,木犀草素、Akt通路抑制剂LY294002以及Erk1/2通路阻断剂PD98059均能显著抑制EGF诱导的Akt和Erk1/2蛋白磷酸化水。以上结果揭示,木犀草素能抑制人乳腺癌细胞EGF信号通路,其中PI3K/Akt、MAPK/Erk1/2、STAT3信号通路是其发挥作用的主要下游信号转导通路。本实验结果为将木犀草素开发成新型抗乳腺癌药物提供了理论依据。     

木犀草素对表皮生长因子诱导的人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制（英文）

本研究的目的是探讨木犀草素体外抑制表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导的乳腺癌细胞增殖的机制。MTT法检测了木犀草素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响以及木犀草素对EGF诱导的乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。Western blot法检测了木犀草素对EGF受体、磷脂酰肌醇3蛋白激酶(PI3K)/Akt、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/Erk1/2及转录活化因子3(STAT3)蛋白表达的影响。结果显示,木犀草素能显著抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖,但对MCF-7细胞的影响更显著,因此本文后续实验以MCF-7为研究对象。进一步研究结果显示,木犀草素对EGF诱导的MCF-7细胞增殖也有显著的抑制作用,Western blot结果表明,木犀草素和EGFR通路阻断剂AG1478均能抑制EGF诱导的EGF受体和STAT3蛋白磷酸化水平,木犀草素、Akt通路抑制剂LY294002以及Erk1/2通路阻断剂PD98059均能显著抑制EGF诱导的Akt和Erk1/2蛋白磷酸化水。以上结果揭示,木犀草素能抑制人乳腺癌细胞EGF信号通路,其中PI3K/Akt、MAPK/Erk1/2、STAT3信号通路是其发挥作用的主要下游信号转导通路。本实验结果为将木犀草素开发成新型抗乳腺癌药物提供了理论依据。     

大孔树脂分离纯化虫草素及其抗纤维化作用

利用大孔树脂分离富集北冬虫夏草发酵液中的虫草素。通过筛选可知NKA-Ⅱ型大孔树脂对虫草素的吸附与解吸效果最好。发酵液经树脂吸附6 h后,再以4倍树脂体积的50%乙醇解吸3 h,所得样品虫草素含量达31.5%,经反复结晶后得到纯度>98%的虫草素。结果表明:虫草素可明显抑制TGF-β1引起的人胚肺成纤维细胞α-SMA蛋白表达量的增加,并表现出一定的浓度依赖性,提示虫草素可能具有抑制肺纤维化活性。     

从蛹虫草小麦培养基残渣分离虫草素及提取物对肝癌细胞的抑制效果

从蛹虫草Cordyceps militaris小麦培养基残渣中分离和纯化虫草素,并进行了提取物体外人肝癌细胞Hep G2 (human hepatoma cell line,Hep G2)的抑制作用研究。以蛹虫草小麦培养基残渣为原料,热超声水提取虫草素,探究pH值、温度、浸提时间和超声功率对虫草素的提取效果,用苯乙烯型弱极性大孔吸附树脂(AB-8)柱层析分离、重结晶纯化虫草素,并用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)、红外光谱法(infrared spectroscopy,IR)鉴定。虫草素处理肝癌细胞Hep G2后,倒置相差显微镜下观察肝癌细胞形态变化,并用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium,MTT)法测定细胞生长情况。结果表明：固液比1:50、pH值6.0、温度60 ℃、浸提时间3 h和超声功率300 W时提取效果好。经鉴定,分离提取物的虫草素纯度达到99%以上。不同浓度的虫草素对肝癌细胞Hep G2有明显的抑制作用,且与虫草素浓度和作用时间呈正相关,被抑制的细胞凝集、变圆、碎裂增加。本提取工艺得到的虫草素纯度高,工艺简单易扩大,且提取物对肝癌细胞增殖作用具有明显的抑制作用,为其在功能性食品添加剂方向的应用提供了数据基础。     

紫草素对人脑胶质瘤U251 细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察紫草素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞的增殖和凋亡的影响。方法:应用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分别检测2.5、5、10μM/L的紫草素对U251细胞的体外抑杀作用以及凋亡诱导作用,进一步应用Western blot方法检测紫草素对凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达水平的影响。结果:紫草素对人U251胶质瘤细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。紫草素可明显上调U251细胞Bax的表达,下调Bcl-2的表达,与对照组相比存在显著性差异(P0.05)。结论:紫草素对人胶质瘤U251细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡作用。     

大蓟炭中香叶木素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其机制研究

研究大蓟炭中香叶木素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制。采用硅胶和Sephadex LH-20柱层析从大蓟炭中分离鉴定了三个黄酮类化合物,经NMR和MS鉴定他们的结构分别为香叶木素(1)、刺槐素(2)和柳川鱼黄素(3)。采用MTS方法检测不同浓度的香叶木素对MCF-7的细胞活力的影响;流式细胞术检测不同浓度的香叶木素处理对MCF-7细胞凋亡的作用;Western blot法检测香叶木素处理对细胞PARP、P-JNK等细胞凋亡相关蛋白表达的影响。MTS及流式细胞术结果显示香叶木素能显著抑制MCF-7的增殖并且诱导细胞凋亡;香叶木素可上调P-JNK促进细胞凋亡。结果表明香叶木素在体外实验能通过激活JNK细胞凋亡通路抑制MCF-7的增殖及促进细胞凋亡。     

秦皮甲素对AGEs致损的ECV304细胞增殖及氧化应激的影响

为研究秦皮甲素对血管内皮细胞的保护作用,采用CCK-8法观察秦皮甲素对体外AGEs培养的人脐静脉内皮细胞增殖的影响。检测不同浓度AGEs以及秦皮甲素作用后对内皮细胞一氧化氮(NO)、不对称二甲基精氨酸(ADMA)水平的影响以及内皮细胞氧化应激有关指标:活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD);脂肪代谢相关指标:乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、总胆固醇(total cholesterol,CHO)、甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL),同时分别检测粘附相关因子:血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达水平。结果显示200 mg/L AGEs对人内皮细胞ECV304增殖有显著抑制作用,秦皮甲素可对抗AGEs导致的内皮细胞增殖抑制,并呈浓度依赖性。在25 mg/L时,保护效应达到最高。秦皮甲素可抵抗ROS生成。同时可改善细胞的脂类代谢:胆固醇、LDL以及TG含量在秦皮甲素作用后改善明显。秦皮甲素可显著抑制内皮粘附因子VCAM-1的表达。秦皮甲素还可上调NO水平,下调ADMA水平。总之,秦皮甲素可有效促进人血管内皮细胞增殖并在改善氧化应激,脂代谢,粘附因子和NO释放等方面发挥作用。     

虫草素的抑菌活性及机理研究

虫草素为蛹虫草等食药保健品的主要活性成分.为进一步评价分析虫草素的抑菌活性及机理,通过最低抑菌浓度及抑菌圈实验测定、扫描电镜观察虫草素对6种常见细菌的抑菌谱及效果,测定供试菌的生长曲线、胞内紫外吸收物质泄露和菌体形态变化,分析虫草素抑制菌体生长及破坏细胞结构机理.结果表明,在溶解度范围内虫草素对3种G+菌有明显抑菌效果...     

低分子量核桃仁蛋白酶水解物抑制MCF-7细胞增殖

摘要：用木瓜蛋白酶制备核桃仁蛋白酶水解物,通过细胞增殖分析试验,研究其对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖的影响,结果显示：水解物具有明显的抑制细胞生长作用,IC50值为1.62mg/mL。用超滤方法将核桃仁蛋白酶水解物,分为10～5kDa、5～3kDa和＜3kDa3个组分,研究不同分子量范围的组分对MCF-7细胞增殖影响的结果表明,MW＜3kDa的低分子量组分具有较强的增殖抑制作用。对3个不同组分进行氨基酸含量分析,结果表明：具有较强抑制癌细胞生长作用的低分子量组分中,疏水性氨基酸及中性极性氨基酸含量较高,酸性极性氨基酸含量少于其他组分。     

藏红花素诱导人胶质瘤U251细胞内质网应激性凋亡的研究

目的：研究藏红花素对人胶质瘤U251细胞的促凋亡作用和可能的机制。方法：不同浓度藏红花素处理U251细胞后,MTT法检测细胞活力,TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果：①藏红花素显著抑制U251细胞的增殖,并诱导其发生凋亡。②藏红花素增加了U251细胞胞浆内钙离子的含量,并上调了内质网分子伴侣GRP78的表达。③藏红花素处理后的U251细胞内质网相关凋亡分子CHOP,Caspase-4,JNK活性明显增高。结论：藏红花素通过诱导内质网应激性凋亡抑制人胶质瘤U251细胞的增殖。     

虫草素对肺癌细胞生长及迁移的影响

探讨虫草素对非小细胞肺癌细胞株H1781细胞凋亡及迁移的影响及作用机制。培养H1781细胞并分组,对照组用不含药物的培养基处理,虫草素组用含有10、20、30和40 μmol/L虫草素处理,处理24 h后测定细胞活力,通过显微镜观察细胞形态学,HE染色观察虫草素对细胞整体的影响,细胞免疫荧光技术检测细胞中MMP-9和DAPI核染色情况观察细胞凋亡,Western blotting检测凋亡等相关蛋白表达。与对照组相比,虫草素处理24 h后,H1781细胞系活力显著降低;细胞数量明显减少;HE染色观察发现随着虫草素浓度增加,细胞数量及细胞集团明显变少,免疫荧光技术检测发现药物处理后细胞凋亡明显促进;划痕实验发现虫草素明显降低细胞迁移能力;Western blotting实验中Bax、cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,MMP-9、Bcl-2蛋白表达明显下调。虫草素对肺癌H1781细胞迁移有抑制作用、对凋亡有促进作用,推测其作用机制为上调促凋亡蛋白表达、下调抗凋亡蛋白表达。     

藏红花素诱导人胶质瘤U251细胞内质网应激性凋亡的研究

目的:研究藏红花素对人胶质瘤U251细胞的促凋亡作用和可能的机制。方法:不同浓度藏红花素处理U251细胞后,MTT法检测细胞活力,TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果:①藏红花素显著抑制U251细胞的增殖,并诱导其发生凋亡。②藏红花素增加了U251细胞胞浆内钙离子的含量,并上调了内质网分子伴侣GRP78的表达。③藏红花素处理后的U251细胞内质网相关凋亡分子CHOP,Caspase-4,JNK活性明显增高。结论:藏红花素通过诱导内质网应激性凋亡抑制人胶质瘤U251细胞的增殖。