定期转种法和低温冷冻法保藏致病真菌活性的能力比较

定期转种法和低温冷冻保存法是临床实验室最常用的两种真菌保存方法,为比较两种方法保藏致病真菌活性的能力,本研究使用两种保藏方法对实验室689株致病真菌保藏5年后进行检测。定期转种法是将菌落接种于马铃薯斜面培养基并将其储存在4℃冰箱,每6个月转种1次。低温冷冻法是挑取马铃薯斜面培养基上生长良好的菌落于无菌10%甘油中,放置在-80℃储存。保藏5年后,将两种方法保藏的菌株转种复苏,比较菌株的复活率。对于念珠菌属Candida、新生隐球菌Cryptococcus neoformans、毛癣菌属Trichophyton、曲霉属Aspergillus和孢子丝菌属Sporothirix真菌,两种方法的菌株复活率无统计学差异;对于小孢子菌属Microsporum真菌和马尔尼菲蓝状菌Talaromyces marneffei,使用低温冷冻法保藏的菌株复活率高于定期转种法保藏的菌株复活率;对于着色霉属Fonsecaea真菌,低温冷冻法保藏的菌株复活率低于定期转种法保藏的菌株复活率。因此,我们认为对于常见致病真菌的长期保藏,使用10%甘油作为保护剂的低温冷冻法优于定期转种法,但其不适用于着色霉属Fonsecaea真菌的长期保藏。     

菌种冷冻干燥保藏的影响因素

菌种资源保藏是微生物学及相关学科研究的基础。冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一, 为进一步提高菌种保藏质量人们进行了大量的研究。本文介绍了菌种冷冻干燥保藏方法的原理和优点, 同时详细介绍了菌种冷冻干燥保藏方法的影响因素。     

病原性丝状真菌的菌种保藏方法

目的 探讨常见病原性丝状真菌的菌种保藏方法.方法将73株病原性丝状真菌经过纯化后,接种于马铃薯葡萄糖琼脂斜面分别在4℃和-80℃冷冻管保存,均用10％ (v/v)的丙三醇作为保护剂.结果经过1 a左右的保存,将菌株复活,发现4℃斜面保藏法菌株的存活率为100％,-80℃冷冻管保藏法菌株的存活率为98.6％,有些毛癣菌属...     

中国丛枝菌根真菌的保藏、共享服务与研究利用

2003年中国“丛枝菌根真菌种质资源库（Bank of Glomeromycota in China,BGC）”在北京市农林科学院植物营养与资源研究所建立。目前,该库已保藏丛枝菌根（AM）真菌40种190株,并面向全国开放,提供菌种资源与共享服务等,对国内AM真菌研究与应用发挥了重要作用。本文作者按照菌种利用的研究方向,详细列举了中国保藏的AM真菌菌种资源的研究结果,以期为政府决策、相关研发单位、研究者和生产者等提供参考,以促进中国共生真菌研究的深入开展。     

微生物菌种保藏方法及保藏关键技术

菌种是国家的重要生物资源,也是生产、教学和科学研究的基本材料。为确保菌种的质量和活力,需要正确的菌种保藏方法。阐述了菌种保藏的重要性、菌种保藏常见方法及其存在的问题,探讨了常用菌种的保藏技术及关键点,好的保藏方法可延长菌种的保存时间,又可防止菌种退化。     

保藏条件对丛枝菌根真菌Glomus mosseae侵染的影响

以高粱为宿主植物,接种丛枝菌根真菌Glomus mosseae,测定了经不同保藏温度(18~20,4,-20,-80℃)处理,在不同保藏时间(3,6,12,18,24,30个月)下丛枝菌根真菌G.mosseae对根系的侵染率。结果表明:丛枝菌根真菌G.mosseae在18~20,4,-20℃温度下保藏12~18个月时,需进行转接,用高粱为宿主植物进行更新复壮培养,以保持菌种活力。     

继往开来 实事实载--“中国医学真菌保藏中心”的建立和成长纪实

真菌是一种古老的生物,显微镜问世后,许兰黄癣菌就是最早发现的致病真菌,但由于真菌在自然界位置未定,直到上世纪中叶才明确它是与动物界,植物界并列的真菌（菌物）界。解放前,我国虽然也有几个兼职医学真菌学元老,但多为临床学家兼任,当从患者分离出并认定为真菌所致病,明确诊断,定下疗法,治疗患者,最后总结报告,极少有菌种保藏的研究。我国真菌界元老如杨国亮、曹松年、郭可大、张柏英等教授虽然也从国外带回一些模式菌种,但多用来作观摩对比,谈不上成立保藏中心。当一些模式菌种发生变异,即失去其保藏价值。在食品工业真菌方面尤其如此,损失更大,如众所周知的味精产生菌,最早是由我国专家学者分离出,但不幸被日本人拿走,生产出所谓“味之素（即今味精）”,反而倾销到我国,还保有专利。另外一种红曲,亦为我国独创,既是食物天然添加剂,还能发酵生产酱腐乳等,品味精美,市场价值不菲。其他如茅台,五粮液等酒曲,更是价值连城,非常宝贵。     

微生物菌种保藏方法及关键技术

菌种是国家的重要生物资源,也是生产、教学和科学研究的基本材料。为确保菌种的质量和活力,需要正确的菌种保藏方法。阐述了菌种保藏的重要性、菌种保藏常见方法及其存在的问题,探讨了常用菌种的保藏技术及关键点,好的保藏方法可延长菌种的保存时间,又可防止菌种退化。     

芽孢杆菌冷冻真空干燥法和砂管法保藏过程中存活率的变化

以芽孢杆菌(Bacillus)为材料,用冷冻真空干燥法和砂管法,在4℃条件下进行了六年的菌种保藏对比试验.结果表明,冷冻真空干燥法比砂管法保藏的菌种存活率高,存活率下降速率小;建立了菌种保藏过程中菌种相对存活率随时间变化规律的数学模型L′_f(t)=e~(-0.1323t)和L′s(t)=e~(-0.2900t).该模型的模拟结果能与试验结果较好地吻合.在室温条件下,砂管法的菌种存活率下降速率比4℃条件下大,三个月时存活率为零或接近零;而冷冻真空干燥法保藏菌种存活率与4℃的效果接近.因此冷冻真空干燥法是芽孢杆菌的比较有效的保藏方法.     

菌种冷冻干燥保藏的影响因素

菌种资源保藏是微生物学及相关学科研究的基础.冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一,为进一步提高菌种保藏质量人们进行了大量的研究.本文介绍了菌种冷冻干燥保藏方法的原理和优点,同时详细介绍了菌种冷冻干燥保藏方法的影响因素.     

虫草文化及科学史

根据考古和史料证据推断,人们对虫草的认识有着5 000多年的历史,涉及文化、艺术、历史、哲学、宗教、习俗、医药及生物科学等方面。根据各阶段的特点可分为崇拜时代、本草时代、描述时代和分子时代。(1)崇拜时代(红山文化-神农本草经问世)：中国考古发掘出众多玉蚕和玉琀蝉,反映在远古时期对虫草的蒙昧认识以原始的轮回崇拜为特点。至今中外仍遗留着一些古代虫草崇拜的习俗。(2)本草时代(《神农本草经》问世-1818年虫草属建立)：古代苏美尔人可能使用过一种虫草入药;而中国人2 000年来一直使用白僵蚕、蝉花和冬虫夏草等入药。此时期物化观念对东西方都有较大影响,对于虫草东西方均有“动物化植物”“竹根化蝉”“虫草互变”等认知,反映了物化论的深刻影响。(3)描述时代(1818年-20世纪末)：1818年Fries建立虫草属,揭开虫草菌科学发展300年的篇章。物化论逐渐被近代科学取代;庞大的虫草家族逐渐形成。欧洲和日本流行虫草绘画,加快了虫草知识的普及。19世纪后期兴起利用虫草菌防治害虫,并在20世纪中期形成规模较大的真菌杀虫剂产业。中国将虫草用于食品和药品的古老传统得以传承并发展,在20世纪后期形成较大产业;但欧美各国发展较慢。(4)分子时代(21世纪初以来)：在现代生物科学和技术的带动和支撑下,虫草研究从上世纪末开始进入分子时代。生物药物素研究缓慢进展,而虫草的多基因系统发育、虫草侵染昆虫的分子致病机制以及以基因组学引领的组学研究则快速进展。国际和国内学术交流活跃,对于弘扬虫草文化起到有力的促进作用。     

A decision-based key to determine the most appropriate protocol for the preservation of fungi

The long-term preservation of valuable fungal cultures can be achieved in several ways and the choice of methodology can be problematical. Firstly, there is the decision whether to use a public service culture collection or `in-house' facilities. Secondly, the wide variety of preservation methods available often leads to confusion about which protocol(s) are best suited for specific fungi. No method can be universally applied to all fungi. Some species are notoriously difficult to preserve, whilst other fungi can be preserved by almost any method. A decision-based key has been devised, which uses questions related to fungal characters and user facilities and economics to determine the most appropriate method for long-term preservation of cultures. This key should facilitate the decisions of microbiologists when considering preservation of important fungal cultures.     

Recovery of fungi after storage for over a quarter of a century

This paper discusses the recovery of a sample of strains originally preserved on silica gel over the period 1970–1973. Fifty-three strains were tested of which 18 recovered, demonstrating survival for more than 20 years. The recovery of 26 of the strains is directly compared with that of replicates from oil storage and freeze-drying. A summary of storage of 421 strains by the silica gel technique is given, reporting survival of 64% for a quarter of a century or more. The technique is ideal for preserving sporulating fungi of the Ascomycota and many species of mitotic fungi for laboratories of limited facilities.     

中国大陆地区丛枝菌根真菌菌种资源的分离鉴定与形态学特征

【目的】分离收集保藏中国大陆各个地区不同生态环境的丛枝菌根真菌菌种资源,为丛枝菌根的研究提供资源、奠定基础。【方法】以高粱为宿主植物,采用诱导培养、单孢培养和扩繁培养分离土壤样品中的丛枝菌根真菌菌种并鉴定。【结果】从我国大陆的45个地区50余种宿主植物根区土壤中分离到丛枝菌根真菌135株,隶属于23个种;对各个菌株的形态特征进行了描述。【结论】我国蕴藏着丰富的丛枝菌根真菌菌种资源,文中描述的菌种资源是目前从我国大陆地区获得的种类和数量最多、覆盖范围最广的AM真菌菌种资源。     

Cryogenic light microscopy and the development of cooling protocols for the cryopreservation of filamentous fungi

One hundred and ninety five strains of fungi were observed during freezing and thawing using a cryogenic light microscope. There was no obvious link between taxonomic position and their morphological response to freezing and thawing. The viability of seven of these strains was examined following freezing and thawing in the presence or absence of the cryoprotectants glycerol and dimethyl sulphoxide. Intracellular ice and hyphal shrinkage were not necessarily lethal events, but in many cases they affected the rate and quality of growth. Both cryoprotectants reduced shrinkage, shifted the cooling rate where intracellular ice formed in many cases, and improved the recovery of strains. The results presented aid the development of successful cryopreservation protocols.     

云南嵩明大哨天然虫生真菌及其内生真菌的分离鉴定与抑菌活性分析

【背景】云南存在着丰富的虫草资源,天然虫草群落中蕴藏多样的真菌资源,是挖掘新型抑菌活性化合物的潜在来源。【目的】了解云南嵩明大哨天然虫生真菌及其内生真菌的物种多样性,并从中筛选具有抑菌活性的菌株。【方法】采用组织分离法对所采集的野生虫草样本进行虫生真菌及其内生真菌的分离,并通过形态观察和ITS联合nrSSU、nrLSU、tef-1α、rpb1、rpb2多基因测序进行物种鉴定及多样性分析;通过平板对峙法以7株病原细菌、5株植物病原真菌为病原指示菌进行抑菌活性测试。【结果】共采集86份天然虫草样本,经鉴定隶属于3科5属7种,包括虫草科（Cordycipitaceae）虫草属（Cordyceps）（1种）、白僵菌属（Beauveria）（2种）、鳞翅虫草属（Samsoniella）（2种）、麦角菌科（Clavicipitaceae）泛普可尼亚属（Metapochonia）（1种）,以及线虫草科（Ophiocordycipitaceae）线虫草属（Ophiocordyceps）（1种）。同时,从采集到的虫草样本中分离得到26株内生真菌,分属于9科9属,其中木霉属（Trichoderma）（38%）和镰刀菌属（Fusarium）（19%）为此次分离得到的优势菌属。对所分离保存的真菌按其分离源及种类归属,从虫生真菌和内生真菌菌株中共挑取20株代表性菌株进行抑菌活性筛选,有11株真菌对2株及以上病原指示细菌具有不同程度的抑菌活性,13株真菌对1株以上植物病原真菌具有不同程度拮抗能力;其中Trichoderma sp.Y3-1和Fusarium sp.WZ3-1具有广谱抑菌活性。【结论】云南嵩明大哨分布有丰富的虫生真菌及内生真菌资源,分离所得的真菌对多种病原菌具有不同程度的抑制作用。本研究丰富了云南虫草资源多样性,为云南省虫草及其内生真菌资源的开发利用提供了数据支持,也为下一步从虫草及其相关真菌资源中挖掘抑菌活性物质提供了菌株资源。     

昆明西山森林公园天然虫生真菌及其内生真菌的分离鉴定及多样性分析

【背景】不同地区虫草物种多样性的调查是虫草相关研究的热点之一,虫草真菌区系研究是真菌资源研究的重要内容。【目的】了解云南省昆明市西山森林公园天然虫生真菌及其内生真菌的多样性,增加对虫草真菌区系的认识。【方法】对该地区通过资源调查并采用组织分离法对采集的虫草样本进行虫生真菌及其内生真菌的分离,利用形态特征观察及ITS联合nr SSU、nr LSU、translation elongation factor-1α (tef-1α)、rpb1、rpb2多基因测序进行虫生真菌物种鉴定及多样性分析。【结果】共采集45份云南省昆明市西山森林公园天然虫草样本,鉴定结果表明隶属于2科5属12种,包括虫草科(Cordycipitaceae)的鳞翅虫草属(Samsoniella)(2种,含疑似新种1个)、虫草属(Cordyceps)(4种)和白僵菌属(Beauveria)(4种),以及线虫草科(Ophiocordycipitaceae)的紫枝孢属(Purpureocillium)(1种)和弯颈霉属(Tolypocladium)(1种,为疑似新种),优势属为虫草属(Cordyceps),优势种为环链虫草(C...     

Long‐term preservation of a collection of Rhizoctonia solani using cryogenic storage

Rhizoctonia solani is an important plant pathogen for a number of crops and maintaining an extensive collection of reference isolates is important in understanding relationships of this pathogen with multiple hosts. Current long‐term storage methods typically call for frequent transfer increasing the risk of changes in morphological, physiological or virulence characteristics. Cryopreservation using storage in liquid nitrogen (LN) was evaluated to examine the potential for storage of a R. solani culture collection containing 106 isolates (primarily from sugar beet). Cultures were stored on autoclaved barley grains in the vapour phase of LN. After 60 days, 5 years and 10 years in storage, all isolates were tested for viability by calculating the percentage of barley grains from which R. solani mycelia grew. Five years after initial storage, all isolates except one had no change in viability. After 10 years in storage, 67 of 106 isolates had no significant decrease in viability, 39 of 106 isolates had a significant decrease in viability but only 9 isolates had less than 10% growth, with 4 having no growth. A subset of isolates stored for 10 years were tested for pathogenicity on a susceptible (FC901) and resistant (FC703) sugar beet germplasm. All isolates tested maintained approximately the same level of virulence that they had prior to storage on both germplasms. This indicates that cryogenic methods are suitable for the preservation or storage of R. solani culture collections, although efficacy may vary with individual isolates.