从少量培养细胞中同时提取微量蛋白和RNA的方法探讨

为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2～ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍 苯酚 氯仿一步抽提RNA法和分子克隆实验手册裂解液制备蛋白质的方法 ,作为对照 .自制试剂提取的总RNA ,18S、2 8S清晰可见 ,2 8S比 18S带亮度强 2～ 3倍 ,带与带之间无拖尾现象 ,5S隐约可见 ,而且成功地进行了Northern印迹、RT PCR分析 ,与经典方法差异不大 ;用此法所提蛋白质 ,经SDS PAGE检测 ,蛋白分离效果很好 ,无杂质 ,且Western印迹检测Giα蛋白 ,可见一条清晰的特异带 ,与常规提取蛋白质 ,结果相似 .从微量细胞中同时提取的RNA和蛋白质 ,得率高、纯度好 ,具有化学完整性和生物学性质     

荧光胺的合成和应用

近几年来,在蛋白质化学研究中,分析微量化的重要方面之一是使用荧光方法。在氨基酸、多肽、蛋白质测定中,荧光胺(Fluorescamine)可与游离的氨基反应,产生荧光的物质,借此测定的灵敏度可提高达10~(-12) 克分子。荧光胺在柱层析、薄层层析中都可用来测定氨基酸和多肽;也有用作抗体荧光标记的荧光试剂。此试剂已有Hoffman-La Roche公司生产出售,由于此试剂价格昂贵,因而很多实验室都不能普遍使用。本实验室使用国内的现有试剂,参照了有关的方法尝试合成该试剂,现已初步合成。合成的试剂与进口的Hoffman-La Roche公司的产品作了比较,基本符合。并且就此试剂在溶液     

定量测定生物材料中少量蛋白质的一种简便方法

Lowry 等人通常使用定量测定蛋白质的方法需要操作40分钟左右,并且需要三种试剂。经 Miller 改进的这种技术,测定时间缩短约20分钟。通过以下方法可以缩短测定时间:用升高温度(50℃)以缩短显色时间和改用两种试剂,即用较小体积、较浓的碱性铜试剂和较多量、较稀的酚试剂。     

桐柏野大豆种子粗蛋白质测定及方法探讨

野大豆因其高蛋白、低油脂含量等特点,越来越引起人们的关注。为了快速精确测定野大豆粗蛋白质含量,采用半微量凯氏法和消化—分光光度法对采自桐柏的8个野大豆样品进行蛋白质含量的测定,并分析比较两种测定方法。试验结果显示,采用消化—分光光度法测定的野大豆的蛋白质含量与经典的半微量凯氏法测定结果一致。半微量凯氏法适用范围广,测定结果精确,而消化—分光光度法相对于半微量凯氏法简化了试验操作,缩短了分析时间,又没有特殊的仪器设备和试剂要求,更便于普及应用。     

介绍一种快速灵敏的银染新方法

银染已成为凝胶电泳中检测微量蛋白质的一项十分有效的实验技术,但实际运用中仍存在着不少问题,对试剂及水要求很高,背景深,导致条带不清是其主要问题。为了解决这些问题,我们比较研究了多种银染程序,主要通过提高反应温度,改变固定及还原步骤的试剂配方,摸索出一套快速、灵敏的新方法,整个染色可在一小时内完成。固定之后,在含有乙醇的醋     

超氧阴离子对水稻幼苗光合色素含量的影响

分别用不同浓度的铜试剂和百草枯对水稻幼苗进行叶面喷施后,于４,２４,４８,７２ｈ分别测定叶片中叶绿素和类胡萝卜素含量的动态变化．结果表明,处理后叶片中光合色素含量降低．铜试剂及百草枯对叶绿素和类胡萝卜素含量的影响有相似的规律．在处理后的４ｈ,光合色素含量开始发生变化,铜试剂处理后幼苗叶片中光合色素含量在７２ｈ最低,百草枯处理后幼苗叶片光合色素含量在４８ｈ达最低,降低的幅度与铜试剂及百草枯的浓度成正相关．     

植物中超氧阴离子自由基测定方法的改进

通过对植物超氧阴离子自由基测定反应中动力学曲线的分析, 确定了最佳的反应介质、反应参数和羟胺浓度, 以三氯甲烷代替乙醚作为植物色素萃取试剂, 克服了植物超氧阴离子测定中存在的诸多问题, 提高了测定结果的准确性、重复性和可比性。     

生物富硒对灵芝营养成分的影响

在人工栽培灵芝中,通过外施硒盐以生物转化法获得富硒灵芝,以不同含硒量的富硒灵芝子实体为试样,系统研究了灵芝生物富硒后对其主要营养成分多糖、蛋白质、氨基酸和矿物质等的影响。结果表明：硒可以明显提高灵芝中多糖、蛋白质以及氨基酸的含量,但并不改变灵芝蛋白质的分布和蛋白质中氨基酸的组成配比,而对矿质元素则有不同的影响,如富硒灵芝子实体中人体必需微量营养元素硒有极明显地增加,而铜和钼等人体必需微量元素的含量有一定量的增加,但铁、钙、锶等矿质元素的含量则有所下降。     

DABITC／PITC双偶合法在蛋白质手工固相顺序分析中的应用

Edman化学降解法迄今仍然是蛋白质(或多肽)顺序分析中最基本和最有效的方法。根据蛋白质(或多肽)在反应中的状态不同,可分液相顺序分析法和固相顺序分析法。固相顺序方法,由于操作方便,洗涤干净,肽不会因洗涤和抽提而受损失等优点而迅速发展。但是由于Edman降解反应产物PTH-氨基酸检出的局限性,影响了Edman液相和固相顺序法的灵敏度和精确度。近十年来,发展的高灵敏的顺序方法,主要集中于二点:一是采用放射性同位素,荧光基团或有色Edman试剂;二是     

微量铜对燕麦叶中氮素转化的意义

研究铜素肥料在泥炭土及其他土壤上的效用的学者们指出,在提高氮素营养的情况下,植株对铜素肥料的需要也有所增长。许多工作指出了缺铜对植物氮素代谢的影响。在大多数情况下,缺铜能导致种子、果实、叶子及植株其他的器官中全氮、蛋白质氮及各种类型的非蛋白质氮含量的增加。在综合的工作中总结这类结果时得出结论,铜素是以某种方式参与蛋白质的利用过程,并促进它     

铜污染对昆虫生长发育及繁殖影响的研究进展

铜(Cu)是生物体生长发育所必需的微量营养元素,参与或构成许多含铜酶及含铜生物活性蛋白质,但是过度摄入Cu会对生物体产生危害。Cu中毒由许多因素而定,如物种、遗传、年龄和食物等。在生态系统中昆虫种类多,数量大,分布广,往往会取食、转移和代谢环境中的Cu,从而对自身生长发育及繁殖造成影响。通常表现为发育历期延长,体重下降,体长变短,化蛹率、羽化率、产卵率、孵化率、存活率降低,种群数量减少等。本文以近几年Cu2+胁迫对昆虫生长发育及繁殖影响的研究进行综述。     

怎样应用甘油銅新試剂來演示唾液对淀粉的作用

甘油铜试剂是目前一种比较新的醛类及还原糖试剂。在讲人体解剖生理学消化器官的消化作用一节时,如有需要演示唾液对淀粉的消化作用,我们建议使用甘油铜试剂来代替过去常用的斐林溶液(Fehlings solution)和本立狄溶液(Benedicts solution),因为甘油铜试剂不仅在配制时简便省料,而且在使用上也非常方便和满意。现特介绍于下,提供同志们参考。配制方法甘油铜是氢氧化铜溶解于甘油中而生成的可溶性络化合物。配制时可先把氢氧化钠30克溶解200c.c.水中制成冷溶液;另把结晶硫酸铜15克溶解于200c.c.水中制成冷溶液,然后把两种溶液在500c.c.     

蛋白质特异性断裂试剂研究进展

蛋白质特异性断裂试剂是近年来发展起来的一些具有特异性断裂肽键功能的化学工具．这些断裂试剂可分为两类,一类通过氧化断裂机制实现蛋白空间结构特异性切割,另一类通过水解断裂机制实现序列特异性切割．蛋白质特异性断裂试剂在蛋白质序列测定,蛋白质的结构与功能研究,蛋白质与核酸相互作用研究以及新型化学治疗药物的合成等方面有着广阔的应用前景．     

酵母和植物中铜的转运系统及其调控

铜是生物正常生命活动所必需的微量矿质元素。酵母和植物中有复杂的机制来调节铜的摄取、分布、螯合以及输出。本文集中讨论了酵母和植物中铜离子的转运体、铜的金属伴侣及其基因转录水平的调控。     

氨基PEG化试剂的合成及其修饰能力的测定

分别用氰脲酰氯法及Ｎ－羟基丁二酰亚胺活性酯法合成了蛋白质的氨基ＰＥＧ化试剂ｍＰＥＧｃｃ和ｍＰＥＧ－ＧＳ,并研究了它们对蛋白质的修饰作用。在合成过程中,通过分析反应体系中微量水分的存在对ｍＰＥＧｃｃ合成效率的影响,及溶剂中小分子可活化杂质成分对ｍＰＥＧ－ＧＳ合成产物质量的影响,发现去水剂的存在,可使ｍＰＥＧｃｃ产率提高７倍;二氧六环优于ＤＭＦ,且二氧六环的预处理也很重要。同时,为了测定活化ＰＥＧ修饰     

酵母和植物中铜的转运系统及其调控

铜是生物正常生命活动所必需的微量矿质元素。酵母和植物中有复杂的机制来调节铜的摄取、分布、螯合以及输出。本文集中讨论了酵母和植物中铜离子的转运体、铜的金属伴侣及其基因转录水平的调控。     

应用蛋白染色剂考马斯蓝D—250测定蛋白质的方法

在生物化学的研究中,普遍应用Lowry的Folin酚试剂的呈色反应,测定酶制剂的蛋白含量。由于植物材料中常含有酚类化合物,或能与Folin酚试剂起呈色反应的物质,例如有酪氨酸或色氨酸基团的小分子,往往使蛋白质的测定值比实际的高。用者马斯蓝(Coomassie Brilliant Blue)对蛋白质的染色作用,已广泛应用于蛋白质分离的凝胶电泳技术中。近来,Bradford应用考马斯G—250(Coomassie BrilliantBlueG—250)与蛋白质束缚时产生的颜色反应,发展了一种蛋白质的快速测定方法,操作方便,再现性好,测定的浓度范围在0—1000微克/毫升。下面我们除介绍这一方法外,并应用这个方法与Folin酚试剂法,对     

用邻苯三酚红钼络合显色法测定临床样品蛋白质含量

长期以来,实验室对蛋白质含量甚微的尿液、脑脊液蛋白质定量分析缺乏满意的方法。一些文献报道的微量蛋白定量法,均有较严重的缺点。Bradford、Pierce等先后报道用考马斯亮兰G-250染料结合法测定微量蛋白质有不少优点,但测定蛋白质浓度的线性范围不宽,蛋白质浓度低时线性较差,比色皿及实     

铜离子影响谷氨酰胺发酵的研究

研究了铜离子对谷氨酰胺发酵的影响,结果表明,微量铜离子对生成谷氨酰胺有促进作用,高浓度铜离子对微生物细胞有毒害作用。     

对斐林试剂和双缩脲试剂应用的探究

人教社新版高中《生物》第1册教材中有“实验-生物组织中可溶性还原糖、蛋白质、脂肪的鉴定”的实验。可溶性还原糖用斐林试剂鉴定,蛋白质用双缩脲试剂鉴定。斐林试剂与双缩脲试剂都是由甲液（NaOH）和乙液（CuSO4）组成,参加鉴定反应时,却是以不同的反应物身分出现。但是,它们是否可以互换？在使用时是否可以颠倒加入的顺序等？为此笔者做了实验探究．现简述如下供大家探讨。