应用电泳滴定曲线预测离子交换层析法的最佳pH条件

电泳滴定曲线(Electrophoretic Titration Curve,ETC)是近年引人注目的一项新技术。它组合等电聚焦-电泳技术进行制备,即在含有两性电解质的聚丙烯酰胺(PAA)胶板上,经预聚焦形成pH梯度后,胶板转90度再经一次电泳,使样品蛋白质按其表面电荷的性质和密度在pH梯度中迁移泳动形成ETC。 ETC的分辨力高,可用于蛋白质的纯度检测,包括单一氨基酸或蛋白质突变体;用于蛋白质表面电荷特性和等电点的检测;用于选择各     

电泳滴定曲线及其应用

电泳滴定曲线法是一种双向电泳法,第一向等电聚焦,以获得固定的pH梯度;然后加样,进行第二向电泳,得到的电泳滴定曲线图,直接反映了在各种pH下,各蛋白质组分之间在迁移率上的差异。该法在选择蛋白质分离纯化的最佳条件;研究蛋白质的突变;研究分子间相互作用等领域,已表现出广阔的应用前景。     

电泳滴定曲线的制备方法

电泳滴定曲线法是运用第一向等电聚焦,再进行第二向电泳,反映各pH下,各蛋白质组分之间在迁移率上的差异.该法在选择蛋白质分离纯化的最佳条件、离于交换剂的类型等方面已表现出广阔的应用前景.作者制备了小牛血清白蛋白和羊抗兔IgG血清的电泳滴定曲线,取得满意结果.     

离子交换高效液相层析法测定腺苷酸环化酶活性

用离子交换高效液相层析（ＨＰＬＣ）分离并同步测定脑组织腺苷酸环化酶（ＡＣ）反应生成的ｃＡＭＰ,从而直接测定ＡＣ活性。１００℃加热１ｍｉｎ终止ＡＣ反应后,混合物在０℃放置２ｈ。在此期间,反应体系中残留的ＡＴＰ水解酶将反应混合物中大部分剩余的ＡＴＰ水解除去。用二氯甲烷抽提除去罂粟碱等干扰物质,使混合物中的ｃＡＭＰ同蓁物质在Ｓｈｉｍ－Ｐａｋ ＷＡＸ－１阴离子交换ＨＰＬＣ术上基线分离,并可定量测定,用此方     

离子交换柱层析法纯化重组人IL—4

用离子交换层析法一步纯化重组人白细胞介素４,该方法简易易行,对样品不产生稀释作用;所得产品具有高纯度（≥９５％）,高生物学活性（≥ＭＵ／ｍｇ）和低毒性（内毒素含量≤０．５ＺＵ／Ｌ）的特点,可满足实验室工作的需要,当与凝胶过滤法结合使用时,所得产品纯度可达９８％,生物学活性进一步提高。     

离子交换柱层析法纯化重组人IL－4

用离子交换层析法一步纯化重组人白细胞介素4,该方法简单易行,对样品不产生稀释作用;所得产品具有高纯度(≥95%),高生物学活性(≥10MU/mg)和低毒性(内毒素含量≤0.5ZU/L)的特点,可满足实验室工作的需要.当与凝胶过滤法结合使用时,所得产品纯度可达98%,生物学活性进一步提高．     

一种快速纯化单克隆抗体的方法——阴阳双层离子交换层析法

本文介绍了一种纯化单克隆抗体的方法——阴阳双层离子交换层析法。利用这种方法从小鼠腹水中分别得到了比较纯的、活力损失较少的二种抗结肠癌单克隆抗体:3B₃McAb和2C₁₀McAb,取得了比较理想的效果。     

普通离子交换剂用于HPLC柱层析法快速分离眼镜王蛇毒

目的　为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。　方法　用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行梯度洗脱 ,各洗脱峰收集后在 Cosmosil 5 C4-AR-3 0 0柱 (4 .6× 1 5 0 mm)上进行逆相 HPLC分析。非单峰组分再进行 HPLC凝胶过滤柱TSKgel Toyopearl HW-40 Fine(4× 2 5 0 mm)层析 ,层析峰组分再进行 HPLC逆相分析。　结果　眼镜王蛇毒经HPLC离子交换柱层析获得了 1 6个蛋白组分 ,其中有 5个组分经逆相 HPLC分析单一组分 ;另外的复合性组分再进行 HPLC凝胶过滤柱层析后又得到 5个单峰蛋白组分。　结论　HPLC离子交换柱层析对分离蛇毒蛋白很有实用价值 ,特别是蛇毒样品量少的情况下 (1 0 ug)也能较好分离。还具有分离时间短 (1 h左右 ) ,无须低温条件等优点。HPLC凝胶过滤柱层析可进一步使蛋白组分得到提纯     

亲和层析法在免疫学中的应用

在免疫学研究中,很早就开始将抗原-抗体反应的特异性用于提纯抗原或抗体。其方法是先使抗原与抗体在液相中可逆结合成为免疫沉淀物,洗涤除去不反应的杂质,然后改变条件使它们解离以获得纯净的抗体或抗原。解离的方法有稀酸法、稀碱法、浓盐法、增温法等四类。     

重组人Fab金属螯合层析法纯化条件的研究

在重组人Fab(rh Fab)表达载体的羧基端插入六个组氨酸, 使其对金属螯合层析介质产生特异性吸附, 可用金属螯合亲和层析法进行分离纯化. 采用自制金属(铜、锌金属离子)螯合层析介质, 以pH和咪唑两种洗脱方法,对rh Fab段的纯化效果进行了探讨. 结果显示: 铜离子螯合层析介质比锌离子螯合层析介质对rh Fab的亲和能力更强; pH洗脱方法的重复性优于咪唑法; 金属铜离子螯合层析法对rh Fab进行一步纯化可得到纯度大于95%的rh Fab产品.     

重组人Fab金属螯合金层析法纯化条件的研究

在重组人Ｆａｂ表达载体的羧基端插入六个组氨酸,使其对金属螯合层析介质产生特异性吸附,可用金属螯合亲和层析法进行分离纯化。采用自制金属螯合层析介质,以ＰＨ和咪唑两种脱方法,对ｒｈＦａｂ段的纯效果进行了探讨。     

应用滤纸层析法作维生素丙定量测定

(一)利用濾紙層析法分離維生素丙時,氧氣是破壞維生素丙的主要因素,防上這種破壞作用的最有效方法是用CO_2把層析室及溶媒中的O_2排出,並加一定量的H_2S。 (二)以正丁醇、三氯醋酸和水(混合四體積的正丁醇和六體積的4％三氯醋酸水溶液)為溶媒,用CO_2把溶媒及層析室中O_2盡量完全排出,並置飽和H_2S水溶液50—100毫升於層析室內,可以完全防止層析分離時維生素丙的破壞。用這種方法測定動植物組織中維生素丙的總合量時,回收率茌98％以上。 (三)層析室中的H_2S對脫氫維生素丙的還原能力不規律,因此不能用這種方法測定樣品中脫氫維生素丙的含量,只能用以測定還原維生素丙的總合量(浸取液先經H_2S處理然後層析)。     

应用A蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体

应用Protein A亲和层析法,从采集的小鼠腹水中纯化出了抗凝血因子Ⅶ单克隆抗体,用SDS-PAGE和ELISA法分别检测了纯化后单克隆抗体的纯度及效价,结果显示,电泳为两条带,分别为免疫球蛋白G(IgG)的重链和轻链,纯化后的单克隆抗体纯度达到电泳纯,应用间接ELISA法测定腹水效价为1×10-7左右,与未纯化前无差异。结果表明,应用A蛋白亲和层析法能够得到纯度较高的单克隆抗体,适用于高纯度单克隆抗体的制备。     

一般增长曲线模型中的条件最优预测

研究了线性约束条件下的一般增长曲线模型中一类线性可预测变量和Φ-线性可预测变量的最优预测问题,分别得到了条件最优线性无偏预测和条件最优Φ-线性无偏预测,并证明了它们在几乎处处意义下的唯一性.     

尿素酶试验的最佳pH

尿素酶试验过去一直用来鉴别变形杆菌。由于变形杆菌的尿素酶活性很强,对于实验条件无特殊要求。除变形杆菌外,具有较强尿素酶活性的细菌还有克雷伯氏菌,耶尔森氏菌。而柠檬酸杆菌和阴沟杆菌,则被认为是尿素酶阴性的细菌,或少数为阳性或迟缓阳性,在菌属鉴     

核酸层析法转基因快速检测体系的建立及应用

随着我国转基因研究及产业化进程提速,转基因检测的重要性日益凸显,因而快速、高效的分子检测新方法的研发具有重要的生产实践及科研意义。在转基因检测中,常规PCR技术具有检测范围广的特点,但较为费时费力,且对实验条件要求较高;而胶体金蛋白试纸法检测方便、快捷,但可检范围窄。基于此,建立了一套基于核酸层析法快速转基因检测的方法体系。将经液氨研磨后的样品通过一管法提取DNA后直接进行PCR扩增,再将PCR扩增产物滴加到胶体金检测卡上,通过直接观察胶体金卡条显色状况进行结果判别。此方法最终检验出玉米内参基因ZSSⅡB及Zein、大豆内参基因SPS、水稻内参基因Lectin,转基因元件启动子CaMV35S及终止子NOS,以及抗虫基因Cry1Ab/1Ac、抗除草剂基因Bar、Pat、CP4-EPSPS及选择标记基因NPTⅡ、Pmi等外源基因;并成功检出特异性转基因事件Mir604及Bt11。研究获得的核酸层析检测方法具有灵敏度高、省时省力且对检测条件要求低等优点,集PCR法与蛋白试纸检测法二者优势于一身,可广泛应用于转基因产品的精确快速检测,为我国转基因生物安全监管提供了良好的技术支撑。     

溶液的pH对离子交换法提取赖氨酸的影响

氨基酸的分离和提取,工业上以离子交换法为主,L-赖氨酸的提取也不例外。影响离子交换过程的因素较多,关键是选择合适的离子交换树脂,其次应注意选择合适的操作条件。当离子交换树脂和提取的对象已经确定,则选择合适的操作条件就成为主要矛盾,最重要的操作条件是交换时的pH值。     

层析法纯化破伤风毒素的试验研究

为了获得高纯度的破伤风毒素,用疏水层析和离子交换层析纯化破伤风毒素。破伤风毒素培养滤液经Phenyl Sepharose疏水层析除去大部分杂质,再经DEAE Sephadex离子交换层析进一步纯化。经两步层析纯化后,毒素纯度达到2000Lf/mg PN以上,回收率为52%~73%。用此方法,连续纯化五批毒素,均获得高纯度的破伤风毒素。试验证明破伤风毒素经疏水层析和离子交换层析可得到有效纯化。     

细胞分裂素的Sephadex LH-20层析法

在研究植物内源激素的分布和消长规律时,需要从植物样品中提取,分离和纯化内源激素,随后进行定性和定量分析。关于植物内源激素的提取、分离和生物鉴定的技术方法,我们已经有过介绍。近来,我们运用交联葡聚糖LH-20(Sephadex LH-20)柱层析来分离和纯化细胞分裂素类物质,获得了较好的结果。