HeLa细胞端粒酶最适反应条件及活性重建

端粒是真核细胞染色体末端的重复ＤＮＡ序列 ,其生物学功能是防止染色体ＤＮＡ降解、末端融合、非正常重组和染色体的缺失[1] .由于存在“末端复制问题” ,随着老化人体细胞端粒重复序列长度不断缩短 ,但在生殖细胞中由于端粒酶的存在 ,端粒序列并不缩短 .端粒酶是由蛋白质和ＲＮＡ构成的核蛋白 ,是依赖ＲＮＡ的ＤＮＡ聚合酶 ,在ＤＮＡ3’端合成端粒重复序列[2 ] .研究表明 ,在 85 %～ 95 %的人肿瘤细胞中可以检测到端粒酶的活性[3 ,4 ] ,而在正常体细胞中除生殖细胞和造血干细胞等极少数细胞中存在端粒酶活性外 ,均检测不到端粒酶活性 ,这…     

端粒酶抑制剂在肿瘤治疗中的进展

端粒是真核细胞染色体末端含有ＴＴＡＧＧＧ重复结构的复合体 ,有防止染色体降解丢失 ,端端融合和重组建作用 ,端粒酶是一种逆转录酶 ,以自身ＲＮＡ为模板 ,逆转录维持染色体的稳定。目前肿瘤组织端粒酶检出率约 85 - 90 %,而正常组织或良性肿瘤端粒酶检出率〈5 %,说明端粒酶与恶性肿瘤密切相关。端粒酶抑制剂作为新的抗肿瘤策略正成为肿瘤研究的热点 ,现就端粒酶抑制剂在肿瘤治疗中的研究状况做一简单概述。1、阻断端粒酶ＲＮＡ的模板作用对端粒酶活性的抑制1. 1反义核苷酸、反义肽苷及硫代反义核苷酸对端粒酶活性的抑制端粒酶ＲＮＡ序列中…     

人端粒酶催化亚基(hTERT)基因及其表达调控

端粒酶是一种核糖核蛋白复合物 ,能引起染色体的末端结构端粒的完全复制。端粒作为一种保护性结构 ,是由短的重复ＤＮＡ序列组成。在人体中这种序列为ＴＴＡＧＧＧ ,其平均长度为 5～ 1 5ｋｂ[1] ,细胞每经过一次分裂端粒缩短 50～ 2 0 0ｂｐ ,这种分子侵蚀作用使得细胞的分裂次数有了生理限制 ,从而限制了体细胞的寿命。一种逃避这种限制的机制是端粒酶的激活 ,因为端粒酶能弥补端粒的缩短 ,因此端粒酶被认为与细胞的永生化、肿瘤发生和细胞衰老密切相关。近来 ,组成人端粒酶复合物的 3个主要成分已被鉴定。人端粒酶ＲＮＡ成分 (ｈＴＲ)提…     

端粒酶研究的若干进展

端粒酶是一种ＲＮＡ依赖的ＤＮＡ聚合酶。它的生物学功能在于以自身的ＲＮＡ为模板,合成端粒序列,解决了线性染色体的末端复制问题,维持了染色体的稳定性。本文介绍一些新进展：如端粒酶蛋白的ｃＤＮＡ已被克隆;端粒酶活性检测中出现误差的可能原因;端粒酶活性的调控因子ＴＲＦ１及新发现的ＴＲＦ２;端粒酶活性同肿瘤诊断及预后间的关系;端粒酶的激活同肿瘤发生间的关系;反义核酸抑制端粒酶活性的可能性及其可能发生的问题等。     

端锚聚合酶(Tankyrase)和端粒

端粒是真核细胞染色体末端的一个特殊结构 ,由一段具有特定重复序列的ＤＮＡ和端粒结合蛋白组成 ,是维持染色体结构稳定的重要因素。端粒ＤＮＡ的复制不是由ＤＮＡ聚合酶完成的 ,而是由端粒酶 (ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ)催化合成后添加到染色体的末端。正常细胞随着细胞分裂活动的进行 ,端粒ＤＮＡ逐渐缩短 ,当缩短到一定程度时 ,染色体结构被破坏 ,细胞进入衰老期并以死亡而告终。但当细胞发生癌变时 ,由于端粒酶的重新激活 ,这种端粒ＤＮＡ随分裂活动发生渐进性缩短的趋势受到阻遏 ,使正常细胞转化成具有无限分裂能力的永生化恶性细胞。研究…     

端粒酶与血液系统肿瘤

端粒 (ｔｅｌｏｍｅｒｅ)是真核细胞染色体末端的ＤＮＡ 蛋白质复合物。端粒酶 (ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ)是由ＲＮＡ和蛋白质组成的特殊核糖核蛋白复合体 ,具有逆转录酶活性 ,能以自身ＲＮＡ为模板 ( 5′ ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ 3′)合成端粒。在正常人体细胞中端粒酶活性表达受抑 ,而在肿瘤形成时可被激活。因此在某些永生细胞和肿瘤细胞中随着ＤＮＡ的复制 ,其端粒不会缩短。1 .端粒酶在血液系统肿瘤表达端粒酶在人体细胞大多为阴性 ,但在胚系细胞、精子细胞、小肠陷窝细胞、毛囊细胞、上皮细胞、活化淋巴细胞、子宫内膜细胞和大多数肿瘤细…     

流式原位荧光杂交——测定端粒长度

端粒是染色体末端ＤＮＡ重复序列与特异结合蛋白的复合体。脊椎动物端粒重复序列是 5′ＴＴＡＧＧＧ3′。端粒长度可以作为细胞的“分裂时钟” ,反映细胞的分裂能力。作为染色体末端的帽状结构 ,端粒还有其他生物学功能 :保证染色体完整性 ,使真正的遗传信息得到完整复制 ;保护染色体末端 ,防止染色体异常重组而影响细胞分裂 ;指导染色体与核膜相接。端粒 端粒酶系统对细胞增殖、细胞衰老、细胞永生化、癌变、发育生物学、ＨＩＶ感染的免疫反应、免疫缺陷等有重要意义[1～ 3] 。因此端粒动力学的研究十分重要。1 .ＤＮＡ印迹杂交端粒长度测…     

端粒与端粒酶

端粒与端粒酶任波（湖北医学院生物教研室武汉４３００７１）染色体在细胞世代中保持其稳定性应起码具备３个结构要素,即ＤＮＡ复制起点,着丝粒以及端粒（ｔｄｏｍｅｒｅ）。端粒是真核生物染色体末端的特殊结构,由蛋白质与ＤＮＡ构成。其中的ＤＮＡ在结构与功能上与其...     

端粒及端粒酶研究的最新进展

端粒是位于真核细胞染色体末端由重复DNA序列和蛋白组成的复合物,它具有保护染色体、介导染色体复制、引导减数分裂时的同源染爸体配对和调节细胞衰老等方面的作用。正常体细胞每分裂一代,端粒就会缩短一段,而端粒酶的作用是将一段端粒序列加到端粒末端,从而维持端粒长度。正常体细胞中是没有端粒酶活性的,而在大多数肿瘤细胞中都发现了端粒酶的表达,提示端粒和端粒酶在癌症发生和肿瘤细胞行为中具有重要作用。     

DNA的G—四联体螺旋结构

ＤＮＡ的Ｇ┐四联体螺旋结构刘定燮王昌才（第一军医大学分子生物学研究所,广州５１０５１５）关键词ＤＮＡＧ－四联体螺旋端粒是由独特的ＤＮＡ序列及相关蛋白质组成的线性真核染色体末端结构,它参与稳定染色体末端及其精确复制等过程。端粒ＤＮＡ一般由富含Ｇ的简单重...     

端粒和端粒酶的发现历程

端粒是染色体末端的特殊结构,它由简单重复的DNA序列和与之结合的蛋白质构成,保护染色体末端不被降解或融合,并使染色体能够完全复制。端粒酶是特殊的逆转录酶,它利用自身的RNA亚基作为模板复制出端粒DNA。端粒和端粒酶的研究进程中贯穿着发现现象/问题-提出概念/模型-实验验证的思路,整个过程就像相继解开一个个谜团一样有趣。因此它是一个很好的科学问题推演的案例。本文以时间为顺序进行整理,重现了这一发现历程。     

高等植物端粒和端粒酶的研究进展

端粒是构成真核生物线状染色体末端重要的DNA-蛋白质复合结构,DNA由简单的串联重复序列组成。它的合成由一个特殊的具有反转录活性的核糖核蛋白-端粒酶完成。端粒对染色体、整个生物基因组,甚至对细胞的稳定都具有重要意义。本文就植物端粒、端粒酶、端粒结合蛋白,以及端粒变化、端粒酶在植物生长发育中的调节作一概述。     

染色体端粒研究进展

染色体端粒(telomere)是真核生物线性染色体两端的特殊DNA--蛋白质复合体结构,由随机重复序列组成的DNA序列和与之相结合的蛋白质分子构成。端粒DNA无论在DNA顺序、功能及其特殊的复制方式都与其它DNA顺序显著不同。本文将近年来对端粒的DNA结构、与端粒DNA相结合的蛋白质分子和在端粒复制中起重要作用的反转录酶--端粒酶(telomerase)的研究进展以及端粒对于真核生物的重要作用作一综述。     

端粒和端粒酶及其在肝细胞癌中的研究进展

摘要：端粒是位于染色体末端的特殊核蛋白复合物,其高度保守的重复序列和蛋白复合物形成保护环结构,以维持线性染色体的稳定性和完整性。端粒酶通过添加富含鸟嘌呤的重复序列,在维持和调节端粒长度、细胞永生性和衰老中起着重要作用。通过研究病变细胞的端粒长度变化趋势和端粒酶活性,可为选择端粒酶作为治疗癌症的标记物提供理论参考。本文针对端粒、端粒酶的结构和日常作用机理,以及它们在肝细胞癌中的研究进展进行综述,以期有助于恶性肿瘤和代谢性疾病的预防、诊断和治疗。     

四链体DNA

端粒（Ｔｅｌｏｍｅｒｅｓ）是真核生物染色体两端的ＤＮＡ片段,它由许多随机重复序列组成,富含Ｇ－Ｃ碱基对,其中双链ＤＮＡ的３′－端伸出一段富－ＧＤＮＡ单链,成为“端粒尾”。推测端粒的主要作用是同端结合蛋白相互作用,确保每条染色体的稳定性和完整性。那么在...     

以端粒酶为靶点的药物设计和基因治疗策略

端粒亦称端区,位于真核细胞染色体末端,随细胞分裂而脱失,缩短至一定程度时体细胞死亡,癌细胞因具有合成端粒的端粒酶而获永生。端粒酶亦称端聚酶,为一含ＲＮＡ的核糖核蛋白,在９０％的癌细胞中过表达,成为肿瘤治疗的新靶点。以端粒酶为靶点的药物设计策略包括端粒酶ＲＮＡ和编码蛋白质的基因以及编码端粒结合蛋白基因的操作。另外,染色体转移、诱导分化、细胞周期调节及常规药物筛选亦为重要的策略。其中针对端粒酶ＲＮＡ模     

端粒及端粒酶的研究进展

端粒是真核细胞染色体末端的特有结构,是由端粒结合蛋白和一段重复序列的端粒DNA组成的一个高度精密的复合体,在维持染色体末端稳定性,避免染色体被核酸酶降解等方面起着重要的作用。端粒的长度、结构及组织形式受多种端粒结合因子的调控。由于端粒的重要性,在哺乳动物细胞里,端粒的长度或端粒结构变化与癌症发生及细胞衰老有密切的关系。由于末端复制问题的存在,随着细胞分裂次数的增加,端粒不断缩短,细胞不可避免的走向衰老或凋亡。由于在细胞分裂过程中端粒长度的不断缩短与细胞分裂代数增加具有相关性,即端粒长度反应了细胞的分裂次数,因此有人将端粒形象的比喻为生物时钟。在90%的癌细胞中,端粒酶被重新激活,以此来维持端粒的长度,使细胞走向永生化。简要综述了端粒、端粒酶及端粒酶结合蛋白的最新研究进展。     

病毒的致癌机制

人乳头瘤病毒16型(HPV-16)造成颈部肿瘤的途径之一可能是活化端粒酶,这种酶的作用是向染色体末端加添端粒TTAGGG重复,由此而使细胞恶性增殖。 位于染色体末端的这些端粒的丧失由细胞龄期及复制决定。当端粒达到一定长度时,细胞便停止分裂。许多肿瘤通过端粒酶避免这一过程的发生。     

高等植物DNA重复序列的主要类型和特点

高等植物核基因组的一个显著特征是其内含有大量的ＤＮＡ重复序列,因此它们在核基因组结构和功能研究中居于举足轻重的地位。一些ＤＮＡ重复序列已日趋广泛地作为分子民用于构建遗传图谱、鉴别品种、研究进化和分离目标基因等。主要介绍高等植物几类重要ＤＮＡ重复序列,如卫星ＤＮＡ、微卫星ＤＮＡ、核糖体ＲＮＡ基因、端粒重复序列和转座子等的若干特点和用途。     

哺乳动物早期胚胎端粒和端粒酶重编程

端粒位于真核染色体末端,是稳定染色体末端的重要元件。端粒酶(TER)是一种特殊的细胞核糖核蛋白(RNP)反转录酶(RT),其核心酶包括蛋白亚基和RNA元件。在DNA复制过程中的端粒丢失可以被有活性的端粒酶修复回来。哺乳动物端粒酶在发育中受调控,端粒的重编程可能是由于早期胚胎不同时期的端粒酶活性而造成的。因此,研究端粒和端粒酶重编程在早期胚胎发育中是非常重要的。该文综述了端粒和端粒酶的结构和功能,及其与哺乳动物早期胚胎发育的关系,并在此基础上展望了端粒和端粒酶在克隆动物胚胎发育的基础研究。