从肿瘤病人少量外周血淋巴细胞克隆抗体基因

建立杂交瘤单抗亲和层析纯化抗原、体外抗原致敏淋巴细胞和RT-PCR克隆人抗体基因的技术.将亲和层析纯化的大肠癌相关抗原CA-Hb3经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定后,与IL-2和丝裂原于体外致敏大肠癌病人10 ml外周血淋巴细胞(PBL),出现淋巴母细胞化和集落形成现象.致敏PBL的总RNA比未致敏PBL的量增加了2.5倍.致敏后RT-PCR扩增的人抗体VH-CH1(IgG)和VL-CL(κ)基因的量比未致敏者多1.3倍.该技术可将鼠源杂交瘤单抗人源化.     

鲟鱼外周血淋巴细胞的分离及最佳体外增殖性反应条件

以小体鲟(Acipenser ruthenus)为研究对象,应用不同浓度的淋巴细胞分离液对鲟鱼外周血淋巴细胞进行分离并探讨其增殖性反应的最佳条件。分别以植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(Con A)和脂多糖(LPS)作为淋巴细胞增殖丝裂原,采用L25(56)五因素五水平正交试验设计,用Enhanced Cell Counting Kit-8法(增强型CCK-8或WST-8)对培养时间、培养温度、细胞密度、胎牛血清浓度及丝裂原浓度等因素进行探索性研究。结果表明:70%的Percoll液(比重为1.092 g/m L)作为淋巴细胞分离液的分离效果最佳。鲟鱼最佳外周血淋巴细胞体外增殖反应条件为:3.625×10~6初始细胞量、20μg/m L的PHA或50μg/m L的Con A或10μg/m L的LPS作为丝裂原、10%-20%胎牛血清(FBS)、20-25℃培养2 d。     

鲟鱼外周血淋巴细胞的分离及最佳体外增殖性反应条件北大核心CSCD

以小体鲟(Acipenser ruthenus)为研究对象,应用不同浓度的淋巴细胞分离液对鲟鱼外周血淋巴细胞进行分离并探讨其增殖性反应的最佳条件。分别以植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(Con A)和脂多糖(LPS)作为淋巴细胞增殖丝裂原,采用L25(56)五因素五水平正交试验设计,用Enhanced Cell Counting Kit-8法(增强型CCK-8或WST-8)对培养时间、培养温度、细胞密度、胎牛血清浓度及丝裂原浓度等因素进行探索性研究。结果表明:70%的Percoll液(比重为1.092 g/m L)作为淋巴细胞分离液的分离效果最佳。鲟鱼最佳外周血淋巴细胞体外增殖反应条件为:3.625×10~6初始细胞量、20μg/m L的PHA或50μg/m L的Con A或10μg/m L的LPS作为丝裂原、10%-20%胎牛血清(FBS)、20-25℃培养2 d。     

香叶天竺葵的组织培养

植物名称:香叶天竺葵(Pelargonium graveolens)。材料类别:叶片、叶柄。培养条件:改良的MS为基本培养基,用固体和液体两种培养方法。固体培养基琼脂用量为7g/L,液体培养基不加琼脂,为防止材料沉没,在三角瓶内加入适量脱脂棉。愈伤组织诱导培养基为:(1)液培+BA 1.5～2mg/L(单位下同)+NAA 0.5～1;     

产黑色素类杆菌ATCC25845内毒素对小鼠集落刺激因子的诱生活性

产黑色素类杆菌(Bacteroides melaninogenicus)是口腔感染的主要致病菌,由该菌产生的内毒素在致病中具有重要作用。本文采用半固体琼脂培养基培养小鼠骨髓细胞.以形成的集落数作为集落刺激因子(CSF)的水平指标,研究了产黑色素类杆菌内毒察的CSF诱生活性。实验发现,在一定范围内,CSF水平随内毒索剂量增加而上升,但当内毒索剂量大于50μg时。CSF水平不再继续上升。产黑色素类杆菌内毒素的集落形成单位数(CFU-C)为66.6±8.5。     

兔抗人外周血单核细胞、兔抗猴脾脏淋巴细胞免疫血清的制备及其在分离人和猕猴胚胎内细胞团中的应用

采用梯度离心的方法用淋巴细胞分离液从浓缩的人白细胞悬液中分离人外周血单核细胞,从猕猴新鲜脾脏中研磨分离猕猴脾脏淋巴细胞;分别将人外周血单核细胞和猕猴脾脏淋巴细胞作为免疫原,每次通过耳缘静脉注射4×108个细胞免疫日本大耳白兔,每周免疫一次,共免疫3次,制备兔抗人外周血单核细胞和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清。体外培养人和猕猴胚胎至囊胚,采用制备的免疫血清,分离人和猕猴囊胚内细胞团,用于建立人和猕猴胚胎干细胞系。结果如下:(1)用半微量细胞毒实验法测得兔抗人外周血单核细胞免疫血清和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清的效价分别为1∶320和1∶640;(2)两种免疫血清成功地裂解了15个人囊胚和33个猕猴囊胚的滋养层细胞,分离出了内细胞团,表明免疫血清的制备取得了成功,为建立人和猕猴胚胎干细胞系奠定了基础。     

人淋巴细胞的体外抗体诱发及其在杂交瘤中的应用

本文应用手术切除的人扁桃体或外伤脾为材料,在体外诱发了针对不同类型抗原的抗体应答,其中包括羊红细胞、卵白蛋白、破伤风类毒素和乙肝病毒表面抗原的抗体应答,并应用破伤风类毒素体外激活的人B淋巴细胞制作杂交瘤。根据多次融合的结果表明其融合率平均为52.1%,抗体阳性率为15.6%,分泌IgM和IgG抗体的阳性集落孔的比例接近1∶1。我们还研究了体外诱发人淋巴细胞产生抗体的条件,发现细胞类群(在本研究中是采用不同的细胞分离方法)是主要的影响因素,值得进一步研究。目前所建立的体外免疫实验系统,主要是应用尼龙毛柱法富集B细胞,在96孔培养板上加上一定剂量范围的抗原刺激。为了协助淋巴细胞反应,可再加10%的T细胞条件培液或少量丝裂原混合物(LPS0.1μg/ml+PWM1μg/ml)。     

土豆汤琼脂培养基培养分枝杆菌的研究

本文报道了一种土豆汤琼脂培养基系统,试验过的16株各群分枝杆菌都能在该培养基上生长。大多数分枝杆菌在土豆汤琼脂培养基上的初生长时间快于罗氏培养基。分枝杆菌H_(37)R_v、鸟型,胃型、堪萨斯、脓肿、不产色和偶发等标准株,在一些土豆汤琼脂培养基上产生两种不同的菌落。初步的研究表明,土豆汤琼脂培养基还可用于胸水、痰内结核杆菌的培养。土豆汤琼脂培养基系用传统的琼脂培养基制作方法,价格低廉,适合在发展中国家的实验室和国内医院检验科推广使用。     

培养基琼脂用量计算的商榷

植物组织培养中,大多数采用固体培养基。固体培养基是以琼脂(又称洋菜)为支持物的。目前一些资料中一般报告用培养基琼脂的百分含量来表示培养基的硬度。笔者认为,这种提法不太科学,而应该用胨力强度(又称凝胶强度)来表示琼脂培养基     

粒单系造血祖细胞(CFU-GM)琼脂半固体培养的原位固定及鉴定染色

用粒单系造血祖细胞（CFU－GM）体外琼脂半固体培养法,琼脂块原位固定,Wright染色与细胞化学和免疫细胞化学技术,对培养人的骨髓CFU－GM进行集落性质鉴定,结果表明：Wright染色能区别集落的性质及细胞的分化程度：CFU－GM的细胞中PAS、POX呈阳性反应;CD14、CD15分别在单核细胞和粒细胞的胞浆或胞膜上表达。该方法对鉴定细胞集落类型、集落中细胞的分化与成熟程度是简便可靠的手段。     

人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)cDNA的克隆和序列测定

用Ficoll-Paque从正常中国人外周血中分离单个核细胞,在RPMI 1640培养基(含10％小牛血清,2mrnol/L谷氨酰胺)中培养2小时,洗涤去除未贴壁细胞,将贴壁单核细胞用含10μg/mLLPS的培养基继续培养2小时。用异硫氰酸胍-酸酚法提取LPS诱导后的单核细胞总RNA,从中取1μg.总RNA作模板,以oli-go(dt)_(15)为引物,使用Promega公司AMV逆转录酶     

刺五加多糖对断奶仔猪外周血淋巴细胞信号传导的影响

为了初步探讨刺五加多糖(ASPS)调节仔猪免疫功能的作用机制,试验研究了ASPS对体外培养的仔猪外周血淋巴细胞信号传导的影响。试验取28日龄断奶仔猪的外周血制备淋巴细胞悬液,分离其中的T、B淋巴细胞,分别与培养体系终浓度为0、40、80、160、320μg/mL ASPS共同孵育,MTT法测定T、B淋巴细胞转化率;在培养体系中加入TLR4抗体初步探讨ASPS影响淋巴细胞的信号传导途径。结果表明,ASPS能显著促进体外培养的仔猪外周血T淋巴细胞转化率以及淋巴细胞IL-2的分泌量(P0.05),而对B淋巴细胞转化率和IL-4水平无显著影响(P0.05)。当培养体系中无TLR4抗体时,ASPS对淋巴细胞分泌TNF-α、NO、iNOS和NF-κB因子水平有显著影响(P0.05),而当培养体系中加入TLR4抗体后,ASPS对上述指标无显著影响(P0.05)。上述结果提示,T细胞可能是ASPS直接作用的靶细胞之一,ASPS调节淋巴细胞免疫功能可能是通过TLR4/NF-κB信号通路起作用。     

B淋巴细胞在多向造血祖细胞生长中的地位

小鼠骨髓细胞在体外培养中,加入用流式自由电泳法分离所得的高纯度正常B淋巴细胞,可使多向祖细胞(CFU-mix)集落增加至5倍;加入小鼠B淋巴瘤细胞株的条件培基(M_(12.4.1)-CM)时,CFU-mix数也可增加至4倍。单集落形态学分析结果表明M_(12.4.1)-CM可加强CFU-GEMm及p-BFU-E等早期造血祖细胞的增殖与分化。小鼠高纯度B细胞样品在体外培养中加入1000 rad照射的骨髓细胞可出现CFU-mix集落,如果再加入适量的小鼠肺条件培基,则CFU-mix数量比对照大15倍,其集落性质为CFU-GEMm,GMm及p-BFU-E。在此培养中加不同稀释度抗小鼠IgM血清,结果CFU-mix的产率与抗IgM血清的浓度成直线反比关系,当加入1:10抗小鼠IgM血清时,CFU-mix为0。作者假设在一定培养条件下,IgM阳性的部分B细胞可返祖转化为CFU-mix。     

猪外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定

从猪外周血分离出单个核细胞,置于EGM-2培养基中培养,通过挑选细胞集落并对之进行免疫组织化学染色和荧光染色来鉴定内皮祖细胞。结果显示猪的内皮祖细胞为长梭形或纺锤形并呈集落生长,能够吞噬已酰化低密度脂蛋(ac-LDL)并结合凝结素BS-1,同时具有内皮细胞标志CD31、flk-1和von willebrand factor(vWF)。这些结果表明能够从猪的外周血中分离培养出内皮祖细胞,为自体内皮祖细胞移植促进猪慢性心肌缺血模型血管新生的研究打下了基础。     

金琥的离体快速繁殖

1 植物名称 金琥(Echinocactus grusonii ) 。 2 材料类别 幼嫩的小球。 3 培养条件 (1)诱导小球培养基为B5+BA 2.0 mg·L-1(单位下同)+NAA 0.2;(2)增殖培养基为B5+BA 0.8+NAA 0.08;(3)生根培养基为1／2B5+BA 0.3+NAA 0.05。3种培养基中蔗糖均为3％,琼脂为0.7％,pH5.8左右,培养温度为(25±2)℃,光照度为2 000 lx,每天光照10 h。 4 生长与分化情况 将金琥小球下部切去1／2,留下上半部,用清水清冼干净,再用无菌水洗5～6次后切成小块,接种到培养基(1)上,经过45 d,刺座开始隆起,1周后,在隆起处开始分化小球,并慢慢长大。 金琥的增殖培养基中,BA浓度超过2.0ng·L-1易导致玻璃化,低于0.5 mg·L-1则增殖缓慢。如利用培养基(1)进行继代增殖,玻璃化十分严重。     

结球甘蓝和青花菜小孢子胚植株再生

结球甘蓝(Brassica oleracea var. capitata)和青花菜(Brassica oleracea var. italica)小孢子胚再生植株频率低是目前影响游离小孢子培养技术有效应用的关键问题之一, 研究其小孢子胚植株再生频率的影响因素, 提高胚再生植株频率, 对促进游离小孢子培养技术在甘蓝类蔬菜育种中更好地应用具有重要意义。该文以结球甘蓝中甘11和青花菜TI-111等基因型为试材, 对影响游离小孢子胚再生成植株的固体培养基类型、琼脂浓度、胚的类型及胚在液体培养基中的滞留时间等因素进行了研究。结果表明: 游离小孢子培养25天的子叶胚在琼脂浓度为1%–1.25%的B5培养基上植株再生频率最高。进一步通过8个不同基因型对上述实验结果进行了验证, 结果显示, 游离小孢子培养25天的子叶胚在1%琼脂浓度的B5培养基上植株再生频率达77.8%–97.2%。     

利用猪血清短期培养人体外周血淋巴细胞的研究

用猪血清代替小牛血清作人体外周血淋巴细胞短期培养,进行染色体分析及淋巴细胞转化的研究。在94例姐妹染色单体差别染色的培养中,培养液分别加入小牛血清与猎血清,细胞有丝分裂指数分别为3.91％和3.78％;21例常规法培养中,分裂指数分别为9.10％和9.21％;5例淋巴细胞转化试验,小牛血清和猪血清培养的转化率分别为69.52％和69.59％;16例阉割后公、母猪血清加入培养基中,细胞分裂指数(SCD法)分别为2.96％和3.14％。以上各项对照试验,均无显著性差异(P>0.05)本研究证实,猪血清可用于人体外周血淋巴细胞短期培养。     

美国叶用莴苣的组织培养与植株再生

1　植物名称　美国叶用莴苣 (Lactucasativavar.longifolia) ,又名大速生菜。2　材料类别　子叶、下胚轴和再生苗真叶。3　培养条件　愈伤组织诱导与分化培养基 :( 1 )MS +NAA 0 .1mg·L- 1 (单位下同 ) + 6 BA 0 .5 ;( 2 )MS +IAA 1 .0 + 6 BA 0 .2。伸长培养基 :( 3) 1 /2MS +GA30 .1 ;( 4 ) 1 /2MS +B95 ;( 5 ) 1 /2MS +GA30 .1 +B95。生根培养基 :( 6) 1 /2MS +IBA 0 .2 +B95。 1 /2MS为MS培养基各成分减半。以上培养基均含 3%蔗糖、0 .7%琼脂 ,pH为 5 .8。培养温度为2 5℃ ,连续 1 2h散射光下光照培养 ,光照度为 2 0 0…     

用印片法制青霉和曲霉的永久封片

(一)材料和方法 1.菌种:青霉(Penicillium chrysogenum),黑曲霉(Aspergillus niger) 2.培养:将青霉和黑曲霉斜面制成悬液,吸0.1ml于马铃薯培养基(马铃薯200克,蔗糖20克,琼脂粉11克,水1000毫升,15磅/吋~2灭菌30分钟)平板上涂布,于28℃培养2天。 3.制片:取两块干净载玻片,在其中一块上涂一层薄胶层(胶为光学树脂),然后用解剖针在青霉或曲霉平板上挖一小块带菌琼脂(约0.5厘米~2),将琼脂块放在薄胶层上(培养面朝下),用另一块载玻片在琼脂块上轻轻按压,然后将琼脂块小心弃去。将印有菌迹的载玻片     

油梨童期茎切段试管培养发根的生物鉴定

材料与方法 种子的发芽 将去皮种子用含有0.5％次氯酸钠(“Purex”,用水稀释10倍)和0.1％吐温20乳化剂的溶液浸泡灭菌。将子叶分开,切下带有1—2厘米厚的子叶的胚轴(带有胚根和胚芽),移栽入营养管内。发芽培养基含有MS培养基的盐分和蔗糖3000(单位:毫克/升,下同)、肌醇100、盐酸硫胺素0.4、活性炭1000和“TC”琼脂8000。在加入琼脂前,pH调整到5.7。每个容积为25×150毫米的试管加入营养琼脂25毫升。试管用聚丙烯罩罩口,以1.05公斤/厘米~2压力消毒15分钟。每个培养管放入一