抗草甘膦转基因大豆PCR的检测

目的:建立快速、有效的鉴别转基因作物与非转基因作物及其产品的检测方法体系。方法:用抗草甘膦转基因大豆中的外源CaMV35S启动子和CP4-EPSPS基因引物,应用PCR方法,从中扩增出预期大小的DNA片段,将扩增产物回收后测序。结果:经同源性分析,扩增产物为CaMV35S启动子和CP4-EPSPS基因的一部分序列。结论:初步建立了转基因大豆的检测方法,同时讨论了PCR检测过程中假阴性和假阳性的原因。     

实时荧光定量PCR方法快速检测转基因大豆

针对转基因大豆中普遍含有的35S启动子进行引物设计,以双链DNA染料SYBR GreenⅠ为荧光标记物,利用实时荧光定量PCR方法对大豆样品进行检测。该法检测转基因大豆的检测低限为0.005 nmol/L的35S启动子,线性范围达3个数量级,可快速区分转基因大豆和非转基因大豆,具有快速、简便、灵敏、安全、高通量、低成本等优点,可推广用于转基因植物产品的快速定量检测。     

抗草甘膦转基因大豆PCR检测及问题探讨

转基因植物的检测具有重要的意义。用抗草甘膦转基因大豆中的外源CaMV35S启动子、CP4 EPSPS和巢式PCR引物,应用PCR方法,从中扩增出预期大小的DNA片段。将扩增产物回收后测序,经同源性分析扩增产物为CaMV35S启动子和CP4 EPSPS的一部分序列。与常规PCR相比,巢式PCR在检测转基因大豆中具有更高的特异性。讨论了PCR检测过程中假阴性和假阳性的原因。     

双重数字PCR在转基因大豆检测中的应用

利用微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)平台建立针对MON87705、MON87769、DP356043三种转基因大豆中外源基因的双重PCR检测方法。利用双重数字PCR方法检测特异性、定量范围等参数,优化所用引物探针组合及实验体系程序,检测外源基因与内标准基因的拷贝数。结果表明,所用引物探针组合在数字PCR方法中仅对目标大豆品系有荧光信号,具有特异性,可用于转基因大豆品系的筛选与鉴别。检测了大豆的转基因成分含量,结果与材料标准品参数基本一致,并根据结果设定定量检测限为0.5%,定性检测限为0.05%,可满足低纯度样品检测的需求。双重数字PCR体系能够准确且稳定的满足实际检测需要,在实际应用上具有良好的发展前景。     

转基因大豆MON89788芯片式数字PCR定量方法的建立

针对抗虫耐除草剂大豆转基因品系MON89788,从转基因植物基因组DNA的提取、核酸模板的质量和浓度控制、引物探针的筛选、PCR反应过程的建立等方面建立了一套完整的转基因大豆芯片式dPCR定量检测方法。本实验也对该方法的重复性和定量检测限进行考察。10组5%转基因品系大豆MON89788样品定量重复性RSD在1.17%-9.97%之间,均满足国际上转基因定量结果RSD小于25%的要求。用该方法对转基因含量为5%、1%、0.1%的大豆MON89788进行定量检测,其定量结果为5.20%、0.94%和0.11%,RSD分别为6.2%、3.6%和15.2%。该检测方法的定量限达到0.1%,能满足欧盟对转基因定量标识0.9%的要求。将本实验建立的方法用于转基因大豆的定量检测,能为规范我国转基因监管工作的实施提供强有力的技术支撑。     

大豆油中转基因成分的Nested PCR和Semi-nested PCR检测方法研究

对大豆油中DNA提取方法进行了研究,结果表明CTAB、SDS和Wizard试剂盒提取大豆油DNA均具有良好的效果。利用nested PCR和semi—nested PCR检测大豆（Roundup Ready）油中的转基因成分发现,该方法能够检测到大豆原油中的Lectin基因（112bp）、CaMV35S基因（147bP）和CP4-EPSPS基因（205bp）,检测灵敏度达到10^-6ng／μl;但该方法未能从人豆成品油（一级）中扩增到上述基因,当中的转基因成分DNA含量低于10^-12ng／μl。     

转基因植物的PCR检测

１９９６—２０００年全球转基因作物的种植面积，由原来的１７０万公顷增到４４２０万公顷，５年间猛增了２５倍。近年来，随着转基因作物的种类和产量的不断增加，其产品的安全性问题，即它对人类健康、环境保护和生态平衡等存在的潜在危害，也越来越多的受到人们的广泛关注。至今，已有２０多个国家已开展了基因工程技术的安全性研究，同时还陆续制定了相关的实验研究、工业化生产和向环境释放等一系列安全准则、条例、法规或法律。１９９８年以来，欧盟规定对含有转基因成分的食品及其它商品必须加注标签。最近，日本、韩国、澳大利亚和…     

5种转基因油菜转化体特异性多重PCR检测方法

【目的】全球转基因植物及其产品的数量和种类越来越多,迫切需要可同时精准高效检测多个转化载体的检测方法。【方法】针对RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5个转基因油菜品系的侧翼序列及油菜内源基因cruciferin A(Cru A)序列设计多重聚合酶链式反应特异性引物,通过对转基因油菜、转基因大豆、转基因玉米、转基因水稻、转基因棉花等不同作物进行PCR扩增来测试所选择的引物特异性,优化多重PCR反应引物的浓度,用所建立的检测体系对不同混合比例的转基因油菜进行多重PCR扩增来测试所建立的检测方法的灵敏度。【结果】通过测试,仅在含有目标样品中检测出阳性结果,灵敏度达0.05%,表明所建立的6重PCR检测方法可同时精准检测RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5种转基因油菜转化载体。【结论】所建立的6重转基因油菜转化体特异性PCR检测方法通量高、特异性好、灵敏度高,符合有关转基因产品检测的要求,可作为转基因油菜检测的有效方法。     

转基因大豆GTS40-3-2转化事件特异性PCR检测

GTS40-3-2是抗草甘膦转基因大豆,为建立GTS40-3-2大豆转化体特异性PCR检测方法,本研究以GTS40-3-2标准品为实验材料,根据已公布转基因大豆GTS40-3-2基因与大豆基因组连接序列信息,利用Primer5.0软件设计了5对品系特异性引物,对每对引物进行了退火温度、特异性及扩增效率的PCR检测,结果显示,5对特异性引物均能够从GTS40-3-2中扩增出大小约279bp、238bp、470bp、490bp和257bp的预期产物,可用于特异性检测转基因大豆GTS40-3-2转化事件。以转基因大豆GTS40-3-2含量为5%、2%、1%、0.5%和0.1%的标准品进行PCR灵敏度检测,结果表明5对引物的检测灵敏度均能达到0.1%。通过荧光定量PCR对5对特异性引物的Ct值与溶解曲线比较,最后选择出RRS2引物对为转基因大豆GTS40-3-2品系特异性检测的最适引物。本文结果将为我国未来转基因生物产品成分检测提供科学合理的实验参考。     

转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法

转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步.为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要.建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清.在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后,对获得的DNA进行PCR检测验证.普通PCR验证结果显示,本方法制备...     

应用SDS-PAGE分析和PCR鉴定长发带芒草的高分子量谷蛋白亚基

利用SDS-PAGE分析、PCR扩增和序列测定与分析研究了长发带芒草(Taeniatherumcrinitum)的高分子量谷蛋白亚基及其基因。结果显示,长发带芒草中发现的高分子量谷蛋白亚基与普通小麦中的类似,但迁移率存在较大差异。其中,x型亚基均比Dx2亚基迁移率小或接近,y型亚基均比Dx12亚基迁移率更快。本研究结果揭示了带芒草属具有与普通小麦类似的高分子量谷蛋白亚基,这些亚基在小麦品质遗传改良中具有潜在的利用价值。     

饲料原料中转基因成分的PCR检测

采用PCR检测方法从饲料的主要原料豆粕、玉米蛋白粉中成功地检出启动子35S (35S-promoter,originated from cauliflower mosaic virus)、终止子NOS (nopaline synthase-terminator,derived from Agrobacterium tumefaciens)、耐除草剂基因EPSPS(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase)和抗虫基因CryIA（b）(delta-endotoxin,evolved from Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)等转基因成分,并通过扩增玉米自身蛋白基因Zein( a protein extracted from corn gluten)及大豆自身基因Lectin(chitin-binding protein)的引物和阴阳性对照、阴阳性质控,避免假阳性、假阴性结果。该方法已在口岸进口饲料原料转基因检测中得到初步应用。 Abstract:Based on the heterogenous genes usually used in transgenic crops,the PCR technique was performed with primers derived from CaMV 35S promoter(35S-promoter,originated from cauliflower mosaic virus),NOS terminator(nopaline synthase-terminator,derived from Agrobacterium tumefaciens),EPSPS(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) gene,and CryIA(b)(delta-endotoxin,evolved from Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)gene to detect transgenic agents from feed raw materials of soybean dregs and corn gluten meal,respectively.Endogenous corn Zein(a protein extracted from corn gluten) gene,soybean Lectin(chitin-binding protein) gene and negative,positive control were applied for avoiding false results.The method established here has been succeessfully applied in detecting transgenic elements in imported feed raw material.     

Characterization of Cyanobacteria by SDS-PAGE of whole-cell proteins and PCR/RFLP of the 16S rRNA gene

Planktonic, filamentous cyanobacterial strains from different genera, both toxic and nontoxic strains, were characterized by SDS-PAGE of whole-cell proteins and PCR/RFLP of the 16S rRNA gene. Total protein pattern analysis revealed the mutual relationships at the genus level. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) of the 16S rRNA gene with reference strains proved to be a good method for the cyanobacterial taxonomy. The nonheterocystous strains outgrouped from the nitrogen-fixing ones. With both methods, Aphanizomenon clustered with Anabaena, and Nodularia with Nostoc. In the RFLP study of Anabaena, the neurotoxic strains were identical, but the hepatotoxic ones formed a heterogeneous group. Genetic distances found in the RFLP study were short, confirming that close genotypic relationships underlie considerable diversity among cyanobacterial genera. Received: 16 December 1996 / Accepted: 14 May 1997     

降落PCR法快速检测高羊茅转基因植株

通过CTAB微量提取高羊茅(Festuca arundinacea)转基因再生植株基因组DNA。用9600型PCR仪器设计降落PCR反应程序,对高羊茅转基因植株两个片段OSISAP1(495bp)和GFP-nos(1 000bp)进行扩增;同时进行了PCR扩增的初步检测。结果表明降落PCR法能快速准确检测转基因植株;而且更适合多个基因片段同时检测,从而提高PCR分子检测的效率,以提高转基因植株鉴定效率。     

中国转基因大豆的产业化策略

大豆是事关人民生活和经济社会发展的重要农产品之一,提高大豆生产水平和增加自给能力,是中国农业生产必须解决的重大问题。由于中国耕地资源不足的限制,科技创新是提升大豆生产能力的唯一出路。转基因育种是推动大豆生产发展的颠覆性技术,对美国、巴西和阿根廷等世界主产国大豆产业的发展发挥了重要作用。经过20多年的科技创新,中国转基因耐除草剂和抗虫育种技术已经成熟,这些产品的产业化种植可显著降低大豆生产成本和提升单产水平。基于中国转基因大豆技术发展进度和大豆生产的国情特点,我们提出了采用如下策略科学有序推进产业化工作。一是,在产品应用时间上,按照单一耐草甘膦除草剂、多个基因耐草甘膦和草铵膦等多种除草剂,以及耐除草剂与抗虫等复合性状等产品,依次推进相关种子的产业化;二是,在产品区域布局上,按照靶标杂草和害虫的地理分布特点顶层设计各种耐除草剂和抗虫大豆产品的种植区域;三是,在生物安全管理上,研发应用抗性杂草和害虫种群监测与治理技术,延长转基因产品的使用寿命。同时,还要加强野生大豆资源的保护工作,降低转基因大豆基因漂移对野生大豆生物多样性的影响。