背根切断对脊髓后角Ⅱ板层BDNF,NT-3表达的影响——免疫组织化学研究

目的　采用免疫组织化学技术探讨切断背根 (L1)后脊髓Ⅱ板层脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经营养因子 3 (NT 3)表达的变化。方法　将成年雄猫 5只行单侧L1背根切断术 (对侧为非手术侧 )。术后 5天取L1脊髓制作2 0 μm厚冰冻切片 ,用BDNF及NT 3抗体分别进行免疫组化染色。观察BDNF、NT 3免疫阳性反应物在脊髓的分布 ,计数单位面积内Ⅱ板层BDNF阳性膨体密度及NT 3阳性细胞数。结果用t检验进行统计分析。结果　BDNF样免疫反应物在Ⅱ板层主要分布于神经膨体 ,NT 3样免疫反应物在神经元及胶质细胞均有分布。背根切断后 ,手术侧Ⅱ板层BDNF阳性膨体数量明显较非手术侧者减少 (P <0 0 1)。而手术侧Ⅱ板层NT 3阳性神经元及胶质细胞数量则较非手术侧者明显增加(P <0 0 1)。结论　背根切断后脊髓Ⅱ板层BDNF ,NT 3的表达发生不同变化。BDNF减少 ,而NT 3表达增多。提示BD NF和NT 3在脊髓损伤修复中的不同作用。     

BDNF和NT—3在鸡胚脊髓发育中的表达——免疫组织化学研究

探讨脑源性神经营养因子（BDNF）和神经营养因子3（NT－3）在脊髓发育中的表达。取Hamburger 30期和40期鸡胚腰段脊髓制作20μm厚冰冻切片,分别用BDNF和NT－3抗体行ABC免疫组化染色。观察BDNF、NT－3样免疫阳性反应物（BDNF－IR、NT－3－IR）在两时相脊髓的分布。结果显示：30期组,BDNF－IR主要分布于脊髓腰段腹角神经元的核周质及神经突起内。NT－3－IR则仅限于腹角前群神经元,胞核、胞浆均梁色;40期组,BDNF－IR除腹角染色外,还扩展至整个脊髓肖解神经元及神经突起。另外,亦见一些BDNF－IR的胶质细胞。与之类似,NT－3－IR除分布于腹角前群神经元外,中间带、背角内亦出现了些NT－3阳性神经元。结果表明：BDNF和NT－3在脊髓的表达随发育进程由腹角向背角扩展。提示：BDNF和NT－3的生理作用与脊髓的发育有关。     

神经营养素3和脑源性神经生长因子在大鼠脊髓中的定位表达

神经营养素3（NT－3）和脑源性神经生长因子（BDNF）是神经生长因子（NGF）的同源物,体外实验表明NT－3和BDNF能促进感觉神经元和交感神经元的存活,但是NT－3和BDNF在脊髓中的生物学作用和定位分布还不十分清楚。本用免疫组化ABC法观察了NT－3和BDNF的免疫阳性反应物在大鼠脊髓中的分布。结果表明：呈NT－3样免疫阳性反应的胶质细胞分布于脊髓的后索、侧索和前索中;免疫反应阳性的神经元主要见于脊髓前角,少数见于脊髓后角。BDNF位于大鼠的脊髓前角动物神经元;在脊髓Ⅱ板层中还可见较多的BDNF免疫反应阳性的神经终末。提示NT－3和BDNF在维持脊髓神经元和胶质细胞的生理功能中可能起重要作用。     

BDNF，NT-3在猫背根神经元的自分泌和旁分泌作用初探—原位杂交和免疫组织化学研究

探讨脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养因子 3 (NT- 3)在成年猫背根节 (DRG)神经元是否存在自分泌或旁分泌作用方式。用特异的 trk B、 trk C抗体及 BDNF、 NT- 3的 c RNA探针 ,以免疫组化及原位杂交双标法观察了成年猫 L6DRG神经元 BDNF m RNA与 trk B、 NT- 3 m RNA与 trk C的关系 ,以了解 BDNF、 NT- 3在成年猫 L6 DRG神经元有无自分泌或旁分泌作用。结果表明 ,在成年猫 L6 DRG BDNFm RNA阳性细胞主要是部分中、小神经元 (4 2～ 5 7μm,<42μm) ,而 trk B阳性细胞则主要是部分大神经元 (>5 7μm)。未见双标的 BDNF m RNA和 trk B阳性神经元 ,但见一些双标的卫星细胞。与BDNF者比较 ,大多数大神经元既表达 NT- 3 m RNA,又表达 trk C。这表明在成年猫 L6 DRG神经元 ,NT- 3可能存在自分泌方式。但本文的结果未证明 BDNF在成年猫 L6 DRG神经元存在自分泌。     

转铁蛋白受体单链抗体与BDNF融合蛋白的表达及活性鉴定

脑源性神经营养因子（BDNF）对中枢神经系统的多种神经元具有营养,修复和保护功能,但因无法通过血脑屏障限制了其应用。本文利用抗转铁蛋白受体（TfR）的单链抗体（ox26-scFv）作为脑转运载体,分别扩增单链抗体和BDNF基因,插入pTIG-Trx载体,构建融合基因表达载体pTIG-Trx/scFv-BDNF,在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了高效表达。经Ni-NTA金属鏊合层析柱纯化后,在41Kd处可见目的纯化条带。大鼠GH3细胞免疫酶染色显示,ScFv-BDNF融合蛋白能与转铁蛋白受体特异性结合。同时能够促进鸡胚背根节神经突起的生长,具备了BDNF的生物学活性。为使BDNF能够跨越血脑屏障成为中枢神经系统的治疗药物打下了实验基础。     

C-H_3加强神经生长因子对培养的鸡胚背根神经节细胞的作用

在培养的鸡胚背根神经节上观察了 C-H_3(GhineseH_3)、神经生长因子(NGF)以及 C-H_3和 NGF 的混合剂对神经细胞的影响。主要结果如下:1.C-H_3处理的标本和对照组没有差别。培养3d 的节神经细胞数平均约420个;6d 时,部分细胞衰退,降到200个。2.NGF 能促进节神经纤维外长,增加神经母细胞向神经元的转变。培养3d 的节神经细胞数平均约700个;6d 时720个。NGF 维持神经元的存活,延缓神经元的衰退。3.C-H_3和NGF 的混合剂不仅增进节神经纤维的长出,而且还延缓了长出纤维的消退,消失时程比NGF 组延长一倍。培养3d 的节神经细胞数平均约1000个,是2.4倍于对照,1.4倍于 NGF组;培养6d 时1120个,为对照组的5倍,NGF 组的1.5倍。混合剂的效果比 NGF 更好。结果表明,C-H_3增强 NGF 对培养的节神经细胞存活的效应。     

神经生长因子家族成员NGF、BDNF、NT-3和NT-4在猫L6脊髓的分布

采用免疫组织化学方法观察神经生长因子家庭成员NGF,BDNF、NT3和NT4在成年猫L6脊髓的分布。结果;在L6脊髓灰质均可见四种生长因子的免疫阳性细胞,这些细胞主要是腹角及凝角深部的大神经元及背角浅层的小神经元,灰质内亦内NGF,NT3及NT4阳性的胶质细胞,但数量多少不等,其中NT3者最多,其次是NGF,NT4者最少,此外,Ⅱ板层内还可见较多BDNF及少量NT-3阳性神经膨体,本文结果表明,在成年猫脊髓存在NGF,BDNF、NT3和NT4,但其分布有差异。     

基因重组神经营养蛋白-3在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

建立了能表达基因重组NT 3的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ;通过Southernblot分析表明克隆细胞染色体中有明显的NT 3基因插入 ;用DotELISA和Westernblot实验证实了目的蛋白的表达及其分子量约为 1 4ku .利用EIA方法测定了阳性细胞株表达NT 3的量平均为 2 1 0 0ng/( 1 0 ⁶细胞·48h) ;rNT 3可促进鸡E8背根神经节神经突起生长 ,其长度与rNT 3浓度有明显的量效关系 ;rNT 3的EC5 0 值为 1 6 .7ng/mL ;单克隆抗体 3W3可中和所表达的rNT 3的生物活性 .     

脑源性神经营养因子在大鼠后足切割疼痛中的作用

目的:观察脑源性神经营养因子(BDNF)对大鼠后足切割疼痛的影响。方法:采用纵行切割大鼠后足作为疼痛模型,运用免疫组织化学与免疫荧光双标记方法,观察大鼠后足切割后不同时间点(1-72hr)BDNF在相应节段背根神经节与脊髓内表达的变化。腹腔或鞘内注射BDNF抗体中和内源性BDNF后,以Von Frey尼龙纤维刺激后足行机械痛敏评价。结果:大鼠后足切割后1-24hr内,BDNF在切割侧L42-L5脊髓后角表达明增加,BDNF主要位于后角神经元内与神经末梢,星形胶质细胞与小胶质细胞内未见明显表达;在L42-L5背根神经节,BNDF免疫阳性细胞百分比在切割后1-24hr内也明显增加,增加的主要为大直经神经元;鞘内给予BDNF抗体可明显增加大鼠后足切割后的缩足阈值,而腹腔给予BDNF抗体对大鼠的缩足阈值影响较小。结论:BDNF参与了大鼠后足切割后机械痛敏的过程。     

银杏内酯对胚基底前脑NOS、AChE阳性神经元发育的影响

目的 探讨银杏内酯对胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育的影响。方法 实验分成银杏组,NGF组,BDNF组和单纯对照组。取孕17dSD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于96孔培养板和2块24孔培养板中,分别加入含银杏内酯,NGF,BDNF及不含上述成份的DMEM培养液,于体外培养18d后,96孔培养板行MTT比色分析测定光吸收值（OD值）,以检测培养的神经元活力,2块24孔培养板分别行NADPH-d和AChE组化染色,显微镜下计数各组每了忆中的NOS和AChE阳性神经元数,并用CMM-301图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理。数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果 银杏组MTT比色分析的OD值和NOS,AChE阳性神经元数,细胞面积,细胞周长等指标均明显地好于单纯对照组,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。结论 银杏内酯在促进胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育方面具有类似NGF和BDNF的作用。     

高原鼠兔下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子的放射免疫测定

高原鼠兔已被我们选定为研究高原低氧适应机制的模型动物。我们过去的研究从器官水平乃至细胞和亚细胞水平均已证明该动物对高原低氧是不敏感的,属于高原低氧完全适应型动物。在研究下丘脑神经肽对高原低氧神经内分泌系的调控作用时,我们用大 鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(Corticotropin releasing factor,CRF)的抗原、抗体放射免疫方法测定高原鼠免下丘脑CRF水平,获得了满意的结果,其灵敏度范围为3—200微微克/管,批间和批内变异系数分别为2.69％和7.24％。高原鼠兔下丘脑正中隆起处(Median eminence,ME)的提取物等的稀释液显示出与合成的大鼠CRF及其抗体间放射免疫反应的标准曲线,有很好的平行关系。高原鼠兔和大鼠ME处CRF的水平用此法测定分别为10.13±3.05和17.22±3.88微微克/毫克蛋白。大鼠ME处CRF水平随模拟海拔高度的增加而降低,而高原鼠兔不变化。随着肾上腺双侧切除,下丘脑ME之CRF下降,血浆皮质酮水平急剧下降,本结果提示,高原鼠兔的下丘脑确实含有与大鼠相类似结构与组成的CRF。此测定方法的确立,为研究高原鼠兔低氧神经内分泌适应机理,开拓了新路。     

梅子垭水库生态因子场的地统计学分析

应用地统计学方法,对梅子垭水库的典型理化因子的生态因子场的水平的2维空间格局进行了分析。通过空间相关性的分析,确定了生态因子场的整个空间和不同方位上的空间格局的变化情况。       

原发性高血压患者红细胞中存在抗高血压因子

本研究利用热处理和Sephadex G-150凝胶过滤层析等方法,从原发性高血压病患者(EHS)红细胞中部分纯化了抗高血压因子(AHF)。AHF具有热稳定性,分子量大于6kDa;能明显降低卒中易感型自发性高血压大鼠(SHR_(sp))血压,腹腔一次注入AHF(1.6mg/kg)30min后,SHR_(sp)收缩压从原来的27.6±0.7kPa降低到21.4±0.8kPa(p<0.001),4h后收缩压恢复至原水平。AHF能显著抑制自发性高血压大鼠(SHR)和肾性高血压大鼠(RHR)主动脉(A)及肠系膜动脉(MA)血管平滑肌(VSM)Ca~(2 )内流。且对MA Ca~(2 )内流的抑制作用强于A。以上结果表明:EHS红细胞中存在AHF,能显著降低高血压大鼠血压,其降压机制可能与其抑制VSM特别是小动脉VSM Ca~(2 )内流有关。     

梅子垭水库生态因子场的分形特征

水生态系统由于多了一层水的介质以及水生生物较短的生命周期,使得其生态格局描述相对困难,对其进行定量描述的工作也相对较少。作为一个初步探索,分别应用非线性科学中的分形理论,对梅子垭水库的典型理化因子的生态因子场的水平的2维空间格局进行了分析,确定各浓度的稳定程度。