烟草几丁酶β—1.3—葡聚糖酶的抑菌作用

从三个方面对激发子诱导烟草几丁质酶,β－１．３－葡聚糖酶的病理功能进行了测定,结果表明：①两种酶对赤星菌的菌落生长有抑制作用并可抑制孢子萌发,对其它被测病原物抑制作用非常微弱;②两种酶对赤星菌等有明显的攻击作用,直接攻击抱子的反应在３０ｍｉｎ内可见,到１６ｈ前后引起孢子破裂;③扫描电镜观察,酶对寄主生活叶面上的赤星菌有同样攻击作用。     

干旱诱导性启动子驱动的海藻糖—6—磷酸合酶基因载体的构建及转？…

通过ＰＣＲ程序克隆拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）的干旱诱导性启动子Ｐｒｄ２９Ａ及来自酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｈａｎｓｅｎ）的海藻糖－６－磷酸合酶基因（ＴＰＳ）,并将它们组成可在植物中表达的载体ＲＴ。通过根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｎｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）ＬＢＡ４４０     

烟草β—1,3—葡聚糖酶cDNA克隆,大肠杆菌表达及植物表达载体的 …

用０．１５％乙烯利诱导烟草幼苗后,提取叶片总ＲＮＡ,并通过反转录及多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出β－１,３－葡聚糖酶基因的ｃＤＮＡ。将其克隆至载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ后,完成了此基因的全序列分析。测序结果表明：所克隆的ｃＤＮＡ除第１００８位碱基与所报道的不同外,其它序列完全一致。为制备抗血清,构建了此基因的大肠杆菌表达载体,并在表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙＳ中得到表达,进行了Ｗ     

烟草Rubisco活化酶的纯化及其特性

利用３５％饱和硫酸 分部、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｃｅｌ和ＦＰＬＣ＝－ＭｏｎｏＱ柱层析等步骤从烟草叶片Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶,并制备了其性抗体。此法不仅快速,而且比活力高。以往认为菠菜和拟南芥Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶由两种亚基组成。通过快速制备的粗提液分析,发现烟草Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶同一各４２ＫＤ的亚基组成。即使在有多种收白酶抑制的情况下,此亚基仍很易降３９ＫＤ的亚基。ＡＴＰ不仅对酶的活性所必需,而且也有利     

酶降解烟叶中细胞壁物质

烟叶中以细胞壁物质存在的碳水化合物在燃吸时产生不良影响,在一定条件下向烟叶中施加一定量的纤维素酶和果胶酶,使部分细胞壁物质降解为水溶性糖,烟质得到改善,纤维素酶和果胶酶最佳用量均为每克烟叶30u酶量（活力）,最佳作用条件为;烟叶水分25%,作用温度50℃,作用时间4h,且在真空条件下可使细胞壁物质降解更有效,可降解烟叶中细胞壁物质10%左右,烟叶的评吸质量得到明显改善。     

烟草花叶病毒复制酶介导抗性的研究进展

在抗病毒植物基因工程中,利用病毒的复制酶基因是一种很有前途的方法。本对烟草花叶病毒（TMV）的基因组结构及其编码的蛋白的功能作了简介,同时较详细地阐述了由TMV复制本科的通读部分、全长复制酶以及突变或缺失的复制酶介导的对病毒抗性的研究进展。     

烟草Rubisco活化酶的纯化及其特性

利用35％饱和硫酸铵分部、DEAE－Sephacel和FPIC－MonoQ柱层析等步骤从烟草叶片中纯化了Rubisco活化酶,并制备了其专一性抗体。此法不仅快速,而且比活力高。以往认为菠菜和拟南芥Rubisco活化酶由两种亚基组成。通过快速制备的粗提液分析．发现烟草Rubisco活化酶由一种42kD的亚基组成。即使在有多种蛋白酶抑制剂存在的情况下,此亚基仍很易降解为39kD的亚基。ATP不仅对酶的活性所必需,而且也有利于维持酶的稳定性。该酶的热稳定性远比Rubisco差。     

几丁质酶基因表达载体构建及转化烟草的研究

构建了一个含有多个调控序列的带有几丁质酶基因的植物表达载体,通过发根农杆菌的Ri质粒介导转化烟草的三个品种：K326,RG11,VA116,在卡那霉素抗性培养基上筛选,获得了7株再生植株,以PCR检测、DNA斑点杂交证明表达载体构建成功,几丁质酶基因导入烟草并整合到烟草基因组中。     

从感染TMV的番茄叶纯化胞外β—N—乙酰氨基已糖苷酶

番茄系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ）诱导叶β－Ｎ－乙酰氨基已糖苷酶活性升高。番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩,－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｃＣ－２５离子交的层析,ＰＢＥ９４（ＰｏｌｙｂｕｆｆｅｒＥｘｃｈａｎｇｅｒ９４,Ｓｉｇｍａ）聚焦层析和ＳＥＰＨＡＤＥＸｇ－１５０凝胶层析纯化,获得纯化的β－Ｎ－乙酰氨基乙糖苷酶。凝胶层析测得该酶的分子量为１４５ｋＤ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ     

烟草节杆菌肌酐酶发酵培养基优化

对烟草节杆菌发酵产酶培养基进行了优化。在烟草节杆菌的初始发酵培养基条件下,肌酐酶初始酶活仅为9.2U/g湿菌。首先,通过肌酸诱导、金属离子筛选实验发现肌酸和金属离子对烟草节杆菌产肌酐酶酶活有重要影响;然后再通过碳源和氮源优化,以玉米浆和酵母膏作为复合氮源,可溶性淀粉为碳源,肌酐酶产量可达到108.5 U/g湿菌;在以上基础上,最后通过两次正交试验优化初始发酵培养基,最优培养基组成为:肌酸0.3%,玉米浆0.3%,可溶性淀粉0.4%,酵母膏0.7%,Fe~2+0.003%,Mn~2+0.006%,Mg~2+0.005%,K_2HPO_40.1%,KCl 0.5%。在优化后的发酵培养基条件下,烟草节杆菌肌酐酶酶活达到182.82 U/g湿菌,为初始发酵培养基酶活的19.87倍。     

烟草—烟草花叶病毒互作中的质膜NADPH氧化酶

以NN烟草(NicotianatabacumL.)品种“SamsunNN”(与烟草花叶病毒(TMV)发生非亲和互作)和普通烟草(N.tabacumL.)“3002”品种(与TMV发生亲和互作)叶片为材料,采用差速离心法和两相法制备密闭的正向型质膜(PM)囊泡。用SOD敏感的依赖于NADPH的Cytc的还原表示质膜NADPH氧化酶产生超氧阴离子(O-·2)的活性。加入0.01%TritonX_100可使酶活性提高约80%,证明NADPH结合位点在质膜电子载体蛋白胞质结构域上,而O-·2在质膜外侧生成,在反应过程中发生了跨质膜的电子传递。质膜NADPH氧化酶的活性可部分地被哺乳动物NADPH氧化酶的专一性抑制剂DPI(diphenyleneiodonium)抑制,最大抑制达70%。受TMV侵染后,NN烟草NADPH氧化酶活性显著升高,而普通烟草的酶活性基本不变。对质膜NADPH氧化酶在烟草_TMV互作早期活性氧生成和启动过敏反应中的作用展开讨论     

表达β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶基因的转基因烟草及其抗真菌病的研究

利用烟草碱性β－１,３－葡聚糖酶及菜豆碱性几丁质酶基因构建了组成型表达的双价植物表达载体ｐＢＬＧＣ,利用农杆菌介导法转化了烟草,并得到了转基因植株。对其进行分子生物学分析的结果表明,部分转基因植株在所有检测中都显示较强的阳性反应,这说明外源基因已整合到烟草基因组中得到正确表达。活体接菌实验初步表明,转基因植株与对照相比,对赤星病的侵染具有较强的抵抗能力。     

番茄叶片胞外β—N—乙酰氨基已糖苷酶的部分性质研究

用从系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ）的番茄叶胞外蛋白提取液中纯化的β－Ｎ－酰氨基已糖苷酸为材料,研究了该酶的部分性质,以Ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧＮＡｃ）或Ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－Ｄ氨基半乳糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ）为底物,该酶的最适ＰＨ在４．８－５．０之间,最适温度在４４－４７℃之间,对酶的热稳定性研究表明,温度对酶的     

豌豆过氧化氢酶在烟草叶绿体中的过量表达提高了植物的抗逆性

通过构建融合番茄RuBP羧化酶小亚基转运肽基因(rbcS-3)和CAT基因编码阅读框(ORF)的双元表达载体,采用农杆菌介导的叶圆盘转化法将融合基因转入烟草,使其能够定向导入叶绿体中发挥作用。在含有50mg/L潮霉素的培养基上筛选获得转CAT烟草30多个株系,并对其进行了分子生物学的验证和生理指标的检测。对获得的抗性植株用PCR、RT-PCR、植株总蛋白Western blot和叶绿体蛋白Western blot分析表明,目的基因已经整合到烟草基因组中,并能正常表达,且在叶绿体rbcS-3转运肽的作用下能定向进入叶绿体中。对转基因植株生理指标的检测发现,在20% PEG₆₀₀₀模拟干旱条件下,野生型烟草的相对电导率提高幅度为43.4%,而转CAT植株的相对电导率仅提高8.8%,表明在干旱胁迫下转CAT烟草的质膜透性小于野生型烟草;经20% PEG₆₀₀₀处理后,野生型和转CAT基因烟草的叶绿素含量都下降,下降幅度分别为68.0%和20.4%;另外,经20% PEG₆₀₀₀处理的野生型烟草叶片的Fv/Fm下降幅度为5.3%,而转CAT基因烟草叶片的Fv/Fm下降幅度0.9%,这些结果表明,在叶绿体中过量表达CAT对干旱胁迫下的细胞质膜、叶绿素和PSⅡ具有一定的保护作用。此外,经150 μmol/L百草枯处理后发现,处理3h后,野生型烟草和转CAT烟草的相对电导率分别比对照提高67.9%和13.5%,而野生型和转CAT烟草的Fv/Fm都下降,降幅分别为23.7%和3.9%,这表明在百草枯氧化胁迫下转CAT烟草的质膜和PSⅡ的损伤程度都小于野生型烟草。总之,豌豆CAT基因在烟草叶绿体中过量表达,提高了转基因烟草的抗旱性和抗氧化性。