痢疾志贺氏I型菌毒素基因的克隆与表达

从痢疾志贺氏l型菌W 30 864株中提取染色体DNA,用EcoRI完全酶解,电泳回收3—7 kb的片段,与载体pUC1 9质粒连接重组,用大肠阡菌痢疾样毒素(SLT）基因探针进行筛选,得到了阳性重组子。实验表明志贺氏毒素基因是位于约4.5kb的EcoR1片段上,包含毒素的A亚单位基因和B亚单位基因。在对克隆株的毒性测定中,乘用Hela—S3细胞试验,证明所产生的痢疾毒素县有杀死细胞的能力。此毒素可引起肠积水和充血,可使小鼠肢体麻痹并致死,克隆重组株的痢疾毒素产量是亲本野生株W30 864的16涪。此外,实验中还对克隆株和产生SLT的菌株的毒素产量做了比较。     

痢疾志贺氏菌亚群的比较基因组学研究与进化分析

利用大肠杆菌K12 MG1655株全基因组ORFs和痢疾志贺氏菌A1型Sd51197株特异性ORFs探针制备的芯片, 研究了痢疾志贺氏菌13个血清型代表株的基因组组成. 结果显示, 该血清群成员的基因组中包含有2654个保守的源于大肠杆菌ORFs; 共同缺失了219个涉及前噬菌体基因、分子伴侣、特异性O抗原合成等大肠杆菌原有的基因; 并通过水平转移获得了一些特异性基因, 如Ⅱ型分泌系统相关组分、铁转运相关因子等. 根据基因组组成所作的进化树, 发现A1, A2, A8和A10这四型菌与其他痢疾志贺氏菌亲源关系较远. 研究所得结果为进一步深入探索痢疾志贺氏菌的生理过程、致病性和进化奠定了基础.     

痢疾志贺氏菌亚群的比较基因组学研究与进化分析

利用大肠杆菌K12MG1655株全基因组ORFs和痢疾志贺氏菌A1型Sd51197株特异性ORFs探针制备的芯片,研究了痢疾志贺氏菌13个血清型代表株的基因组组成.结果显示,该血清群成员的基因组中包含有2654个保守的源于大肠杆菌ORFs;共同缺失了219个涉及前噬菌体基因、分子伴侣、特异性O抗原合成等大肠杆菌原有的基因;并通过水平转移获得了一些特异性基因,如Ⅱ型分泌系统相关组分、铁转运相关因子等.根据基因组组成所作的进化树,发现A1,A2,A8和A10这四型菌与其他痢疾志贺氏菌亲源关系较远.研究所得结果为进一步深入探索痢疾志贺氏菌的生理过程、致病性和进化奠定了基础.     

183株志贺菌的菌群分布及药敏分析

目的了解本地区细菌性痢疾菌群分布及药敏情况。方法对183株志贺菌进行菌群分型及药敏分析。结果183株志贺菌有福氏志贺菌168株（91．8％）;宋内志贺菌9株（4．9％）;痢疾志贺菌4株（2．2％）;鲍氏志贺菌2株（1．1％）。药敏试验显示志贺菌对四环素、氨苄西林、复方新诺明耐药严重;对头孢他啶、阿米卡星、诺氟沙星比较敏感。结论本地区志贺菌主要是福氏志贺菌Ⅱa,应根据药敏试验结果选择合适抗菌药物。     

志贺氏菌III型分泌系统及其致病机理

摘要:志贺氏菌的侵袭能力归功于其具有的特殊武器——III型分泌系统,这方面的研究一直以来都是病原微生物领域关注的焦点,本文将对近年来志贺氏菌III型分泌系统的研究进展进行简要综述。     

550例支原体药敏结果分析

目的：了解本地区感染泌尿生殖系的解脲、人型支原体耐药情况。方法：对性病科和妇科门诊近3年来550例支原体感染者用支原体药敏试剂盒进行司巴沙星（SPA）、克拉霉素（CLA）、可乐必妥（CRA）、交沙霉素（JOS）、阿奇霉素（AZI）、罗红霉素（ROX）、强力霉素（DOX）、美满霉素（MIN）、氧氟沙星（ODL）、乙酰螺旋霉素（ASP）、四环素（TET）、红霉素（ERY）12种抗生素的药敏试验。结果：统计近3年耐药率,总计依次是4.2%、8.4%、10.4%、23.2%、23.8%、29.6%、29.6%、33.0%、43.1%、55.3%、61.9%、82.7%。结论：耐药率司巴沙星、克拉霉素、可乐必妥较稳定,基本低于10%,其余均较高且大部分呈逐年增长趋势,且解脲和人型支原体耐药性有较大差异。     

宋内氏志贺氏菌的分布与分型初步研究

沙市菌痢患者中,宋内氏菌在六十一七十年代占10.4—11.8%,进入八十年代上升到25.8%;各年龄组中0—4岁组患者的菌株数占总数的51.7%;在季节分布上,宋内氏菌的季节高峰比福氏菌早一个月。对192株宋内氏菌用上海市防疫站的φ1～6噬菌体裂解试验可分为5个噬菌体型,其中Ⅰ型占75.5%,并有逐渐上升的趋势;在抗药性上,依其对SD、TC,CM、SM的抗药性可分为7个型,其中以抗SD、TC、CM、SM及抗SD、CM、SM型占71.3%;在生化分型方面,观察到有不同的生化反应株和少数异常生化反应株。     

金黄色葡萄球菌L型耐药现状分析

本文目的探讨金黄色葡萄球菌（金萄菌）Ｌ型耐药现状,达到合理应用抗菌药物。采用方法：对１９９２～１９９７年细菌室分离的金葡菌Ｌ型５３０株的耐药性前后３年进行对比。结果显示,苯唑西林、头孢哌酮、阿米卡星、利福平耐药率有显著差异（Ｐ＜００１）,金葡菌Ｌ型耐药性已发生变迁。治疗金葡菌Ｌ型菌感染,要选择敏感、窄谱、主要作用于细胞膜和影响细菌蛋白质合成的抗菌药物。为避免Ｌ型菌回复,必要时同时选用作用于细胞壁的抗生素,以达到彻底消灭病原菌。     

300例肿瘤患者痰培养及药敏结果的分析

本文通过对３００例肿瘤患者痰培养及药敏的实验结果进行分析,说明在肿瘤患者中呼吸道感染不仅见于革兰氏阳性菌,而且还常见于革兰氏阴性菌及真菌。其中革兰氏阳性菌主要是金黄色葡萄球菌（３８株）,肠球菌（３７株）,化脓性链球菌（９株）,革兰氏阴性菌主要是肺炎克雷伯氏菌（３９株）,铜绿假单胞菌（２７株）等,从药敏实验结果观察到革兰氏阳性菌对万古霉素较敏感,而对其它抗生素均有不同程度的耐药性,革兰氏阴性菌对另四代头孢菌素,头孢哌酮,头孢噻腭及对氧哌嗪青霉素的耐药率低于２０％。     

绍兴地区男女泌尿生殖道支原体感染特点及药敏差异分析

目的 了解绍兴地区男女泌尿生殖道支原体属感染的特点,比较男女两性对几种抗菌药物的耐药情况的差异.方法 应用法国生物梅里埃公司MycoplasmaISI试剂盒对2010年1月至201 1年10月男女两性泌尿生殖道标本进行支原体培养及药敏试验,统计解脲脲支原体和人支原体的检出率及耐药情况.结果 共1722例泌尿生殖道感染病例中,支原体属阳性869例,总阳性率50.46％,其中单纯解脲脲原体(Uu)感染702例,单纯人型支原体(Mh)感染29例,Uu及Mh混合感染138例;714例男性中支原体阳性190例,阳性率26.61％,1008例女性中支原体阳性679例,阳性率67.36％;男性单纯Uu感染耐药率较高的主要是:环丙沙星(80.50％)、氧氟沙星(63.60％),女性单纯Uu感染耐药率较高的主要是:环丙沙星(91.97％)、氧氟沙星(73.72％)、红霉素(47.81％).男女两性单纯Uu感染对红霉素、阿奇霉素、克拉霉素和交沙霉素的敏感性差异有统计学意义(P＜0.05).结论 男女两性泌尿生殖道支原体感染以Uu为主,且两者对多种抗菌药物的敏感性具有显著性差异,临床应根据药敏结果合理选取使用抗菌药物.     

2003年至2007年大肠埃希菌的临床分离及耐药趋势分析

目的了解2003年至2007年大肠埃希菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析2003年至2007年间所有标本中大肠埃希菌的分离率、标本和病区的分布构成情况以及对17种抗菌药物的耐药率。结果五年间大肠埃希菌的总分离率变化不明显,但其阳性分离率呈上升趋势,从2003年的5.02%增至2007年的6.26%;其在泌尿生殖道标本（尿液标本和尿道分泌物标本）的分离率最高（50.5%）,其次是呼吸道标本（36.66%）;病区分布以重症监护室最高（20.7%）,其次是普外科（18.3%）,所有内科病区（不含ICU）占46.6%;大肠埃希菌对12种抗菌药的耐药率大于50%,仅对其中5种的耐药率每年均低于50%。结论大肠埃希菌的临床总分离率没有明显变化,但阳性分离率有呈上升趋势,其对多数抗菌药物有较高的耐药性,所以感染的治疗应当依据抗菌药物的体外敏感试验。     

2005～2008年儿童菌痢病原菌与药敏分析及临床意义

目的了解儿童细菌性痢疾病原菌的分布特征及药敏特点,为临床更严谨更规范使用抗生素提供支持与依据。方法对2005年10月至2008年10月57例儿童菌痢的菌型、药敏及耐药性进行分析。结果儿童细菌性痢疾病原菌亚型分类中宋氏痢疾杆菌（D群）占14．0％,福氏痢疾杆菌（B群）占86．0％;痢疾杆菌对常用抗生素耐药率由低到高依次为头孢噻肟,丁胺卡那霉素,庆大霉素,头孢哌酮,头孢三嗪,头孢他啶,头孢唑啉,环丙沙星,氯霉素,复方新诺明,氨苄青霉素;痢疾杆菌单株对多种抗生素的总耐药率为39．2％,多重耐药率为43,9％,且各组间差异无显著性（χ^2=1．608,P=0．996）,痢疾杆菌的耐药问题依然严重。结论新乡市区儿童细菌性痢疾病原菌亚型分类D组已呈明显上升趋势,但总体仍以B群感染为主（86％）;痢疾杆菌的耐药问题依然严重;对儿童菌痢选用抗生素应结合药敏首选头孢噻肟等第三代头孢类抗生素或头孢唑啉,年长儿也可选用丁胺卡那霉素、庆大霉素等氨基苷类,而以环丙沙星为代表的喹诺酮类药物不宜作为儿童尤其7岁以下小儿菌痢的备选药物;氯霉素、复方新诺明及氨苄青霉素已不再作为小儿菌痢的抗菌选择。     

2004年至2005年MRSA调查分析

目的调查龙岩市第一医院2004年至2005年各病区各类标本MRSA分离率及对常用抗生素耐药率。方法用VITEK 32细菌仪GPI卡鉴定及Slidex Staph-k it、MRSA胶乳凝集试验确认,用VITEK 32细菌仪GPS101做药敏,并统计分析。结果共检查229株SA,其中2004年MRSA为56.6%,耐药率苯唑西林、青霉素G为100%,优力新、头孢噻吩为100%,红霉素79%,四环素73%,环丙沙星71%,氯洁霉素36%,万古霉素0%;2005年MRSA为59.4%,耐药率苯唑西林、青霉素G、优力新、头孢唑啉为100%,红霉素94%,环丙沙星89%,氧氟沙星88%,四环素76%,氯洁霉素50%,利福平43%,万古霉素0%。结论该院SA耐药性监测显示临床分离SA的耐药性和交叉耐药性已相当严重,必须采取相应的措施严密监测、控制和预防MRSA感染,严格执行院内消毒隔离制度,防止MRSA扩散,定期对临床分离菌株的耐药性进行分析,避免万古霉素过度使用,防止耐万古霉素SA产生。     

人乳头瘤病毒16L1-减毒志贺氏杆菌为载体疫苗的构建及免疫效应初步鉴定

为预防高危型人乳头瘤病毒16型(HPV16)诱发宫颈癌,制备以减毒志贺氏杆菌为载体的HPV16预防疫苗,以期载体可介导机体产生粘膜免疫反应,达到预防HPVl6感染的目的。为此构建了以HPV16L1为免疫原的减毒志贺氏杆菌苗,并初步鉴定候选疫苗的减毒特性和免疫效果。利用基于志贺氏杆菌virG／icsA基因的表达载体(pHS3199),将HPV16L1基因插入后构成pHS3199-hpv16L1质粒,电穿孔法将其转入减毒志贺氏杆菌sh42,经筛选获得重组减毒sh42-HPV16L1工程菌。用免疫印迹法检测HPV16L1蛋白表达,连续传代法确定其传代和目的蛋白表达的稳定性;豚鼠角膜巩膜炎症试验检测细菌的毒力和菌苗的免疫效果;小鼠红细胞凝集抑制试验检测免疫血清对病毒样颗粒(VLP)的中和活性。免疫印迹检测证实,重组菌株sh42-HPV16L1可稳定表达HPV16L1;豚鼠角膜巩膜炎症试验证实,该候选菌苗无致病性。减毒sh42-HPV16L1经结膜囊途径免疫豚鼠,可以产生特异性体液免疫应答,免疫动物体内的血清、肠道、阴道分泌物中抗HPV16L1 VLPIgG、IgA含量显著高于对照组,并且sh42-HPV16L1免疫动物血清可明显抑制HPV16L1 VLP引起的小鼠红细胞凝集。因而sh42-HPV16L1将是一种潜在的HPV16候选预防疫苗。     

2006-2009年铜绿假单胞菌医院感染临床分布及耐药性变迁

目的:调查铜绿假单胞菌(PA)4年来临床分布,了解临床分离PA时多种常用抗菌药物耐药谱的动态变迁,比较分析不同感染部位PA的耐药状况,为临床合理选用抗菌药物提供依据.方法:应用回顾性调查方法,对临床2006～2009年送检标本中分离的PA药敏试验进行统计分析.结果:队感染以呼吸道为主,主要分布在呼吸科和神经外科等科室;PA对临床常用的抗菌药物中左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率相对上升较快,分别由2006年的25.8%、16.5%上升至2009年的52.8%、40.1%;对阿米卡星、亚胺培南、美洛培南、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率相对较稳定,且耐药率较低;对部分抗生素的耐药率在2009年有所回落.结论:PA对阿米卡星、亚胺培南、美洛培南、哌拉西林/他唑巴坦的敏感性较高,而对其它10种抗菌药物耐药现象严重,临床应根据药敏结果选择单一或联用抗菌药物,可有效控制和减缓细菌耐药性的增长;2009年PA对部分抗生素耐药率下降进一步提示合理用药的重要性.     

483例儿童扁桃体腺样体肥大分离菌的分布和药敏特征

目的:分析儿童手术切除的扁桃体腺样体分离菌的分布及药敏特征,为其临床预防和治疗提供指导。方法:将483例扁桃体腺样体进行细菌培养,分析潜在致病菌组成及其药敏特征。结果:扁桃体和腺样体的细菌培养阳性率分别为66.43%和52.88%,主要病原菌及其分离率分别为金黄色葡萄球菌(20.71%)、流感嗜血杆菌(15.11%)、肺炎链球菌(10.97%)、A群链球菌(6.42%),金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率达82%,21%菌株为MRSA,流感嗜血杆菌β-内酰酶检测阳性率为30.92%,复方新诺明和氨苄西林耐药率较高,分别为50.69%和30.14%,肺炎链球菌对青霉素耐药率为32.08%,红霉素、四环素、复方新诺明耐药率高,分别为81.13%、79.25%和69.81%,A群链球菌对青霉素仍然100%敏感,红霉素、克林霉素、四环素的耐药率高,分别为83.87%、77.42%、58.06%。结论:扁桃体和腺样体主要分离菌有金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、A群链球菌,不同检出菌的耐药性差异明显,临床可根据常见检出分离菌的分布及药敏特征预防和治疗感染。     

云南地区鸭源沙门菌的分离鉴定及耐药性和毒力基因分析

【背景】沙门菌是一种重要的食源性人兽共患病原菌,可引起多种食源性疾病。【目的】了解云南地区鸭源沙门菌病的流行现状、耐药现象及毒力基因携带等基本情况。【方法】无菌采集云南各地区病死鸭肝脏样品169份进行沙门菌分离,对分离株进行血清分型鉴定、药敏及相关耐药基因、毒力基因筛查。【结果】分离到鸭源沙门菌48株,分离率为28.40%,鉴定出3种血清型,其中肠炎沙门菌为优势血清型。分离株对青霉素G、林可霉素、克林霉素和利福平的耐药率达100%,每株菌至少对3类6种及以上的抗生素耐药,单株最高可耐14种,产生了22种耐药谱型。共检出耐药基因5种,bla_TEM和tetB检出率分别为27.08%和22.92%,tetA、sul2和EBC的检出率较低。毒力基因共检出10种,其中,SPI-1(avrA)、SPI-3(mgtC)、SPI-4(siiD)、SPI-5(sopB)和bcfC检出率均高达100%,SPI-2(ssaQ)、spvB、spvC、pefA和stn的检出率均达60%以上,cdtB未检出。【结论】云南地区鸭源沙门菌主要流行血清型为肠炎沙门菌,耐药性及多重耐药情况严重,耐药机制复杂,耐药基因与耐药表型符合率低,毒力基因检出率较高。研究结果可为云南地区鸭群沙门菌病的防控和净化提供参考。     

志贺氏菌福氏2a 301株ipaH4.5突变株的构建及生物学功能分析

利用λ-Red重组系统对福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因进行缺失突变,构建了福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因缺失突变株?ipaH4.5,利用低拷贝质粒构建ipaH4.5缺失突变株的回复突变株△ipaH4.5HF。PCR方法证实了ipaH4.5基因的缺失和回复。对野生株、突变株和回复突变株的生长代谢及细胞侵袭能力进行比较;ELISA方法检测3株菌侵袭鼠J774巨噬细胞后培养上清中炎性因子的水平。生长代谢实验表明缺失和回复ipaH4.5不影响志贺氏菌的生长速度,侵袭实验表明缺失和回复ipaH4.5也不影响志贺氏菌对HeLa细胞和鼠J774巨噬细胞的侵袭能力,表明ipaH4.5基因与志贺氏菌的生长代谢和侵袭能力无关;鼠J774巨噬细胞培养上清中细胞因子水平的改变提示该基因在志贺氏菌侵入细胞后抑制宿主细胞炎症反应。     

292株铜绿假单胞菌的标本分布及耐药性分析

目的分析临海市第一医院铜绿假单胞菌感染的临床标本分布及耐药变迁。方法对2002年至2004年分离292株铜绿假单胞菌采用德灵公司的autoSCAN-4半自动微生物鉴定系统进行鉴定。用K-B法做药敏测定,对其耐药率进行统计分析。结果292株铜绿假单胞菌以痰及咽拭子标本中分离率最高,为66.1%;其次为脓液和分泌物,分别为20.9%、5.1%。对抗生素平均耐药率分别为阿米卡星27.4%,庆大霉素33.6%,环丙沙星34.2%,左氧氟沙星28.8%,哌拉西林59.2%,头孢噻肟58.6%,头孢曲松61.6%,头孢他啶19.2%,头孢哌酮/舒巴坦32.2%,亚胺培南13.7%,氨曲南24.7%。结论铜绿假单胞菌是医院内感染的重要细菌,其耐药率问题日趋严重,尤其对3代头孢菌素及碳青霉烯类抗生素的耐药率呈逐年增高的趋势。     

142例儿童感染肺炎链球菌的耐药性分析

目的分析儿科病房的肺炎链球菌的主要分布情况以及耐药现状。方法收集宁波市妇女儿童医院儿科病房2010年1月1日至2012年12月31日临床分离的142株肺炎链球菌,采用法国生物梅里埃公司的VITEK-60型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定。采用纸片扩散法（K—B法）做药敏试验,用参考菌株做质量控制。药敏试验结果按NCCL2002版判断标准,对照参考菌株判断敏感,中介和耐药。结果分离的142株肺炎链球菌的送检科室以呼吸科最多62株,其次是小儿监护病房21株,新生儿科送检标本中未培养出肺炎链球菌。分离的142株肺炎链球菌的标本以痰液标本最多103株。分离的142株肺炎链球菌对克林霉素,红霉素的耐药率分别为98．5％和95．07％且呈现逐年上升;对氨苄西林、氨苄西林舒巴坦钠、头孢呋辛、头孢曲松和万古霉素的敏感率分别为84．51％、89．44％、93．66％、97．89％和100％。结论本地区住院儿童的肺炎链球菌来源仍以呼吸道为主,对广谱半合成青霉素仍较敏感,对β-内酰胺酶抑制剂的广谱半合成青霉素敏感率更高,对头孢类敏感率更高,未发现对万古霉素耐药菌株。在门急诊可选用广谱半合成青霉素作为治疗肺炎链球菌的首选用药,在病房可选用敏感性更高的头孢呋新或头孢曲松治疗肺炎链球菌．但为了延缓耐药性的产生,应动态监测肺炎链球菌的耐药情况,合理选择抗生素,提高疗效。