培养-增强套式PCR检测肺炎支原体感染

应用培养 增强套式多聚酶链反应 (C ENPCR)检测 44例肺炎支原体感染住院患儿咽拭子标本。在检测的 44份咽拭子标本中 ,肺炎支原体的检测阳性率为 38.6 3%。结果显示 ,C ENPCR检测MP感染敏感性较高 ,可用于MP感染的临床检测     

大鼠呼吸道细菌和支原体混合感染的诊断

大鼠呼吸道细菌和支原体混合感染的诊断柳家玉,杨文华西医科大学实验动物中心成都６１００４１在普通大鼠的生产和科研、教学中,常见大鼠呼吸系统存在程度不同的病理损害,严重者引起生长迟缓甚至死亡。这是普通大鼠群中呼吸系统疾患很难解决的问题之一,将其用于科研的...     

用PCR检测细胞培养中支原体污染

细胞培养中支原体污染已经成为严重的问题.为了扩增6种支原体(精氨酸支原体,口腔支原体,人型支原体,猪鼻支原体,发酵支原体及莱氏支原体)核糖体RNA操纵子的16s和23s DNA间区,设计了三个通用PCR引物(F1,F2及R1).当以6种支原体DNA为模板时,引物F1和R1产生340到468bp的片段,引物F2和R1产生145到211bp的片段,当用Hela细胞或E.coli DNA作为模板,用引物F1和R1时,在电泳中未观察到特定区带.此法最小能检出8.5fg精氨酸支原体DNA,相当于13个精氨酸支原体.这说明,当这些支原体污染细胞培养时,能用PCR法检测出来.     

杭州地区儿童肺炎支原体感染分析

目的调查杭州地区呼吸道感染儿童肺炎支原体（MP）感染情况和流行特点,为临床治疗和防止其爆发流行提供依据。方法随机采集在本院就诊并有呼吸道感染患儿的咽拭子,用FQ-PCR测定标本中MPDNA含量,若结果〉125拷贝为阳性,〈25拷贝为阴性。用统计学软件SPSS10．0分析MP感染和各调查因素之间的关系。结果在1502例呼吸道感染患儿标本中共检出391例MP阳性,阳性率占26．0％（391／1502）。感染机会、性别差异无显著性。7～15岁的儿童更容易感染,感染率占48．0％-62．1％。一年之中以夏秋季感染率最高,其中7月份高达37．3％。结论杭州地区MP引起儿童呼吸道感染的流行特点和南方其他地区的报道基本一致。     

儿科呼吸道疾病中肺炎支原体感染的结果分析

目的探讨儿科肺炎支原体（MP）感染特点,辅助临床医师早期诊断,合理用药。方法测定我院一年来2013例儿科呼吸道疾病患儿的肺炎支原体抗体（IgM）。结果2013例呼吸道感染患儿,检出肺炎支原体抗体（IgM）阳性者769例,占38.2%,769例阳性分别表现为肺炎369例（48%）,支气管炎238例（31%）,咽炎92例（12%）,哮喘70例（9%）。其中,肺炎组与各组相比较,具有统计学意义。MP IgM感染的检出率明显高于其他各组（P〈0.01）。结论MP感染是患儿不可忽视的病原体,检测患儿血清MP抗体能够及早诊断,指导治疗。     

多聚酶链反应技术诊断生殖支原体的研究进展

本文不近年来应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术快速诊断生殖支原体（Ｍｇ）的研究进展作一综述,内容包括Ｍｇ的分子生物学特性、引物的设计、ＤＮＡ提取以及此法在检测Ｍｇ中的临床应用和注意事项。     

肺炎支原体和沙眼衣原体致儿童急性下呼吸道感染的研究

本文旨在研究儿童社区获得性急性下呼吸道感染(ALRTI)中肺炎支原体(MP)和沙眼衣原体(CT)的感染特征。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测2006年10月～2008年2月因ALRTI收入复旦大学附属儿科医院的患儿呼吸道标本中MP和CT的DNA,并分析2种病原体感染患儿的临床特征与实验室检查结果。在1312份深部鼻咽分泌物标本中,MP和CT检出率分别为7.85%(103/1312)和2.97%(39/1312)。MP在5岁以上患儿中的检出率为33.33%(30/90),而CT在3个月以内患儿中的检出率为6.28%(31/494)。MP感染后易出现40℃以上高热,较少发生发绀与重症呼吸道感染;白细胞计数常无明显升高,但C反应蛋白升高较多见。CT感染后40℃以上高热和重症呼吸道感染少见,C反应蛋白升高也较少见。结果提示,在5岁以上儿童的社区获得性ALRTI中,MP是重要的病原体;而在3个月以内儿童中,CT为常见病原体之一。     

生殖支原体快速检测的研究进展

生殖支原体是泌尿生殖道感染疾病的重要病原体,本文阐述筛选生殖支原体的多种快速诊断方法,高敏感性和特异性的分子生物学方法有助于生殖支原体的快速诊断,这些方法包括免疫荧光显微技术、免疫印迹法、DNA探针、聚合酶链反应等。     

聚合酶链反应快速检测胃组织和唾液中的幽门螺杆菌

针对幽门螺杆菌（ＨＰ）尿素酶Ａ基因设计一对引物进行聚合酶链反应,检测１株ＨＰ标准株和７株临床分离株均阳性,而４株其它肠道菌均阴性,特异性１００％。１０倍系列稀释试验表明敏感性达到１００ｐｇＤＮＡ水平。从３５例胃镜检查者取幽门旁组织块进行快速和常规尿素酶试验,细菌培养及ＰＣＲ检测,１５例ＨＰ阳性者ＰＣＲ检测也为阳性,其中７例阳性者有３例唾液ＰＣＲ检测为阳性,表明ＨＰ确存在于口腔中。本研究采用直接热裂解法处理临床标本,取其粗提物行ＰＣＲ,免除复杂的酚一氟仿抽提步骤,该法简便快速,且损失小,成功率高,在临床实验诊断中有推广价值。     

山羊关节炎─脑炎前病毒的PCR检测

山羊关节炎─脑炎前病毒的ＰＣＲ检测相文华,丁恩雨,秦运安,吕晓玲,沈荣显（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨１５０００１）关键词聚合酶链反应,山羊关节炎—脑炎病毒,整合山羊关节炎—脑炎（ＣａｐｒｉｎｅＡｒｔｈｒｉｔｉｓ－Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ,Ｃ...     

应用聚合酶链反应检测口蹄疫病毒的实验研究

聚合酶链反应用于直接检测口蹄疫病毒(FMDV),可快速、灵敏地检出乳鼠组织或细胞繁殖的病毒的核酸。其灵敏度可达0.062pg,整个检测过程可缩短至4～5个小时内完成,比其它检测方法都敏感和快速。本文还探讨了直接用PCR扩增合成生物素化核酸探针检测口蹄疫病毒核酸的存在。     

人头发DNA的提取及其基因扩增

头发是犯罪现场最容易得到的材料之一。本文报道从人的头发中提取DNA的方法以及利用PCR(聚合酶链反应)技术,从少量人发DNA扩增大量拷贝数的基因片段。对基因扩增得到的大量基因片段进行进一步的基因分析,将为法医物证学提供客观证据,具有重要价值。     

老慢气患者下呼吸道微生态学的研究

为深入探讨老慢气的发病机理,运用微生态学原理对３２例老慢气患者下呼吸道以纤难支气管和环甲膜穿刺的方法采取气和必物标本,以进一步探讨老慢患者与菌群失调的关系。结果表明,老慢气患者下呼吸道需氧菌主要为肺炎链球菌、奈瑟菌、甲型链球菌。肺炎链球菌和奈瑟菌的检出率分别为５０％和４３．７５％。厌氧菌主要为消化链球菌、韦荣菌、优杆菌、丙酸力。消化链球菌检出率为８７．５％、韦荣菌为３４．３８％。药敏实验表明,肺炎     

ELISA间接法检测呼吸道合胞病毒和副流感病毒血清IgM和IgA抗体

建立了检测呼吸道合胞病毒(RSV)和副流感病毒(PFV)血清特异性IgM和IgA抗体的间接ELISA方法。在方法统一的基础上比较了检测IgG、IgM和IgA抗体的结果,证明检测血清IgM和IgA可以作为RSV和PFV感染的早期诊断指标。检测了120份临床急性下呼吸道感染患儿的血清,RSV-IgM检出率为33.3％,RSV-IgA为36.7％;PFV-IgM为27.5％,PFV-IgA为31.6％。提出了对RSV和PFV感染以检测特异性IgA替代IgM或两者互补的设想。     

端粒酶RNA和端粒酶活性在人生殖道癌细胞株中的表达

本文采用反转录套式PCR(nested RT-PCR)和PCR端粒重复扩增(TRAP)方法分别检测了5种人生殖道癌细胞株端粒酶RNA(hTR)基因及端粒酶活性的表达。结果表明,宫颈癌HeLa和SiHa细胞株,绒毛膜癌JAR和BeWo细胞株及卵巢癌OCCI细胞株hTR及端粒酶活性均呈强阳性。但正常卵巢、宫颈和胎盘组织hTR和端粒酶呈阴性或弱阳性。提示反转录套式PCR和端粒重复扩增法可以简便而有效地检测端粒酶RNA及端粒酶活性。端粒酶的激活与肿瘤细胞增殖密切相关,并可能成为一项具有临床价值的肿瘤标志物。     

应用PCR对尖锐湿疣和外耳道乳头状瘤中HPV DNA的分型检测

从手术切除的24例女性和12例男性尖锐湿疣新鲜标本中,以及42例女性尖锐湿疣、16例男性外耳道乳头状瘤和4例女性假性湿疣的石蜡包埋标本中,提取组织的基因组DNA,用人工合成的人乳头瘤病毒6.11和16型E6区特异性寡聚核苷酸引物,通过PCR进行HPV DNA的分型检测。结果66例女性尖锐湿疣中,感染HPV6型者4例,感染11型者12例,6+11型混合感染者49例;阴性1例,总检出率达98.4％。4例女性假性湿疣中1例为HPV6型感染,阳性率25％。16例男性外耳道乳头状瘤中HPV6+11型感染者5例,6+16型感染者3例,6+11+16型多重感染者8例,阳性率100％。12例男性尖锐湿疣中,HPV11型感染者7例,6+11型4例,阴性1例,总阳性率91.6％。还对细胞学上空泡化和非典型空泡化尖锐湿疣标本的HPV感染做了比较,未发现差异。     

应用聚合酶链式反应扩增和光敏生物素标记的cDNA探针检测马铃薯纺锤块茎类病毒

以含马铃薯纺锤块茎类病毒(potato spindle tuber viroid,PSTV)RNA的总核酸为模板,加入人工合成的互补DNA引物,用反转录酶合成PSTV cDNA;在聚合酶链式反应系统中,用两个PSTV特异性引物进行cDNA扩增,用以制备光敏生物素标记的PSTV cDNA探针。用此探针进行斑点杂交检测含PSTV的马铃薯核酸提取液和汁液均出现阳性杂交信号,而健康马铃薯的核酸提取液和汁液的结果均为阴性。光敏生物素标记探针检测纯化PSTV的灵敏度可达5pg;检测感染PSTV的马铃薯块茎汁液的可测出最高稀释度为1:400。