神经毒素原性酪酸梭菌与E型肉毒梭菌毒素的精制及特性比较

对首次自Ｅ型肉毒中毒食品中分离到的一株神经毒素原性酪酸梭菌（ＬＣＬ１５５）所产生的神经毒素,同Ｅ型肉毒梭菌（Ｅ１５３）所产生的神经毒素进行了精制及特性比较,发现（１）两菌神经毒素的分子量,Ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥ测试均为３２０ｋＤａ;ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测试则均为１４７ｋＤａ,非毒性非血凝素部分均为１２８ｋＤａ;用胰蛋白酶激活神经毒素后发现两菌神经毒素均由分子量为１０３ｋＤａ的Ｈ链和４８ｋＤａ的Ｌ链组成。（２）两菌神经毒素柱层析图像基本一致,但在菌体毒素提取效果及精制效果诸方面,分离的酪酸梭菌却都较差。（３）胰蛋白酶激活试验表明：两菌神经毒素达到最大毒力所需激活时间不等。在相同温度下,分离的酪酸梭菌毒素只需５ｍｉｎ,而Ｅ型肉毒梭菌毒素却需３０ｍｉｎ,提示两菌神经毒素激活动力学上存在差异。（４）琼脂双扩散试验结果表明两菌神经毒素的抗原性是一致的,没有发现沉淀线呈交叉或部分交叉现象。     

沿微山湖地区神经毒素原性酪酸梭菌的土壤分布调查

为了解神经毒素原性酪酸梭菌在微山湖地区土壤的分布情况,我们采集了该地区的土壤样品进行调查。５０份土样培养上清中,有１８份（３６％）检出了肉毒毒素,经中和试验证实均为Ｅ型。从其中的７份阳性样品中分离到产毒菌株,对分离菌株进行毒性测定、生化特性检查及其神经毒素基因的ＰＣＲ检测,所有菌株均具有Ｅ型肉毒神经毒素基因并产生相应毒素,但其生化特性与Ｅ型肉毒梭菌不同,而与酪酸梭菌一致。结果说明沿微山湖地区土壤中确实存在神经毒素原性酪酸梭菌,而且阳性率很高。对神经毒素原性酪酸梭菌的分布进行流行病学调查并从土壤中分离到该病原菌,这在国际上尚属首次。     

肉毒杆菌二元毒素和细胞外酶

对肉毒中毒和肉毒毒蛋白的研究已有近百年历史,肉毒杆菌神经毒素（ＢｏＮＴ）作用机制研究的进展已使它成分为分析神经递质释放的胞吐分子机制和用于临床治疗的有用工具。近年发现,肉毒梭状芽胞杆菌Ｃ和Ｄ型菌株除分泌ＢｏＮＴ外,尚合成另外两类与ＢｏＮＴ结构和生物活必完全不同的蛋白质,肉毒二元毒素和肉毒细胞外酶,它们分别影响细胞骨架和细胞的生长发育,也成为分析相关生命过程的有效工具药,本文综述了这两类蛋白质的有关     

梭菌神经毒素分子作用机制研究进展

近年来发现梭菌神经毒素为锌内肽酶一新家族,它们特异作用于神经胞吐装置的蛋白质成分,可能由此而导致毒素的强毒性。梭菌神经毒素的细胞毒作用分结合、内移、跨膜和胞浆内毒性四步。根据这四步对梭菌神经毒素分子的作用机制作一扼要阐述。     

肉毒毒素研究进展

肉毒毒素是肉毒梭菌产生的一种神经毒素,能够通过抑制神经肌肉接头处的乙酰胆碱释放而引起肌肉麻痹.肉毒毒素在培养液中以复合物形式存在,其中的毒性组分由3个非同源性结构域组成,是一种新型的金属蛋白酶.不同血清型的肉毒毒素能够特异性地作用于不同底物,这些底物在神经细胞的胞外分泌过程中发挥重要作用.肉毒毒素在胞吞胞吐机制的研究以及临床医学应用方面具有宝贵的价值.     

抗生素相关腹泻的机制和处理

抗生素相关腹泻（ＡＡＤ）的病原微生物包括艰难梭菌、产气英膜梭菌、金黄色葡萄球菌、克雷伯杆菌、念珠菌以及沙门菌等,引起轻度ＡＡＤ的病因主要有：（１）肠道中糖类或胆酸代谢功能混乱;（２）抗生素致肠粘膜的变态反应或毒性效应;（３）抗生素对肠蠕动的药理学效应,接受抗生素治疗的患者应避免大量的不宜吸收的糖类。轻微的ＡＡＤ可以经中断抗生素治疗以及减少饮食中糖类而缓解,仅严重的艰难梭菌所致的ＡＡＤ则需要特殊的抗     

兰州市婴幼儿艰难梭菌带菌状况

在兰州市随机采集的２１６名健康婴幼儿粪标本经分离并对其培养特性、菌落菌体形态特征、生化反应特性以及毒素原性等进行一系列检查,检出了３７人的粪便含有艰难梭菌（１０４─１０８／ｇ）,检出总阳性率为１７．１％,新生儿、婴儿及幼儿各年龄组的检出阳性率分别为１３．５％（１９／４１）、３３．３％（１３／３９）、１３．９％（５／３６）。３７株分离菌中毒素原性阳性者仅有８株（２１．６％）,均分布于婴儿与幼儿两组。新生儿１４１人中２７人的粪标本为胎粪,只有１人（３．７％）含艰难梭菌（２×１０６／ｇ）,但不产毒素。所有婴幼儿中有２２人因各种原因曾用过抗菌药物,但仅有２人的粪便含艰难梭菌,而且均为非产毒株,表明艰难梭菌检出率与药物服用之间似无显著的相关性。     

东亚钳蝎神经毒素在大肠杆菌中的表达

以山西风陵渡东亚钳蝎（ＢｕｔｈｕｓｍａｒｔｅｎｓｉＫａｒｓｃｈ）的尾腺总ＲＮＡ为模板,根据已知的蝎神经毒素保守氨基酸序列设计引物,利用ＰＣＲ技术,扩增并克隆了两个蝎神经毒素基因．序列分析表明,由两个基因导出的氨基酸序列（ＢｍＫＭｍ１和ＢｍＫＭｍ２）与已知的蝎神经毒素ＢｍＫⅠ、ＢｍＫⅡ、ＢｍＫⅢ、ＢｍＫＭ１、ＢｍＫＭ９有很高的同源性．将ＢｍＫＭｍ２基因重组到大肠杆菌分泌型表达载体ｐＥｘＳｅｃ１中进行表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明表达产物被分泌到细胞周间质及培养液中．经ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ纯化后的蛋白质注射小白鼠表明表达产物有生物学活性     

酪酸梭菌与婴儿型双歧杆菌对产气荚膜梭菌试管内生物拮抗作用的研究

用酪酸权菌（Clostridium butyricum）和婴儿型双歧杆菌（Bifidobacterium Infantis）对产气荚膜梭菌（Clostriduim perfringens）进行试管内的生物拮抗试验。将酪酸梭菌、婴儿型双歧杆菌及酪酸梭菌和婴儿型双歧杆菌分别对产气荚膜酸菌以一定的比例等量混合接种于GAM液体培养基中进行厌氧培养。实验证明酪酸梭菌和婴儿型双歧能明显抑制产气荚膜梭菌的生长,并且比各自单独培养时显示了较强的生物拮抗作用。     

艰难梭菌相关性腹泻的治疗进展及对我国的启示

艰难梭菌相关性腹泻（Clostridium difficile associated diarrhea,CDAD）是艰难梭菌感染（Clostridium difficile Infection,CDI）引起的一种机体严重疾病。随着艰难梭菌感染率的增加及高毒力株027／NAP1／BI的出现,导致该病在全球特别是北美、及欧洲等地区爆发性流行,对于该病的控制引起全球研究者的高度重视。本文就其治疗进展进行综述,并结合我国实际分析该病防治中存在的问题并提出建议。     

酶联免疫吸附试验检测A型产气荚膜梭菌肠毒素

本实验建立了双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测产气荚膜梭菌肠毒素的实验体系。以家兔单特异ＩｇＧ包被酶标板,辣根过氧化物酶标记的绵羊ＩｇＧ作为指示物,可检测出１．２５ｎｇ／ｍｌ（０．１２５ｎｇ）的产气荚膜梭菌肠毒素,线性范围大,重复性及稳定性好,对培养上清及粪便滤液检查无非特异反应。是产气荚膜梭菌食物中毒实验室诊断的一种快速可靠的检测方法。     

反向间接胶乳凝集试验法检测粪便A型产气荚膜梭菌肠毒素的结果及评价

本文以１０种５２株供试菌分别与７个不同年龄组的健康人粪便混合,共配成３６４份模拟标本,采用反向间接胶乳凝集（ＲＰＬＡ）试验法与生物学试验法（小鼠致死试验、豚鼠皮肤血管透性因子试验,Ｖｅｒｏ细胞毒性试验）检测各标本中的Ａ型产气荚膜梭菌肠毒素（简称Ｃｐ－Ｅｎｔ）。除产气荚膜梭菌之外的其他菌种培养液２３８份标本（３４株）,ＲＰＬＡ与生物学试验结果完全一致,均为阴性。产气荚膜梭菌１２６份标本（１８株）中有７０份标本的ＲＰＬＡ同生物学诸法完全一致地检出了Ｃｐ－Ｅｎｔ．有１株７份标本（ＣｐＮＣＴＣ８７９７）的ＲＰＬＡ为阳性,而各生物学试验却均为阴性,该菌株经ＰＣＲ检查证明确为肠毒素原性产气荚膜梭菌,表明ＲＰＬＡ比生物学试验法更灵敏。有５株（ＣｐＮＣＴｃ８２３８,ＣｐＮＣＴＣ１０６１１,ＣｐＮＣＴＣ１０６１４,ＣｐＮＣＴＣ１０６１２,ＣｐＬ－５２）３５份标本ＲＰＬＡ与各生物学试验结果均为阴性,但经ＰＣＲ检吉证明该５株菌均为肠毒素原性产气荚膜梭菌,后经超声波破碎菌体提取物对其中部分菌株进行试验的结果仍然显示了ＲＰＬＡ与生物学法的一致性。有２株（ＣｐＮＣＴＣ８６８６,ＣｐＮＣＴＣ８４４９）１４份标本的所有结果均为阴性,ＰＣＲ     

酪酸梭状芽胞杆菌研究进展

酪酸梭状芽胞杆菌（Clostridium butyricum）是属于硬壁菌门（Firmicutes）梭菌纲（Clostridia）梭菌目（Clostridiales）梭菌科（Clostridiaceae）梭菌属（Clostridium）的一种革兰阳性菌（以下简称酪酸梭菌）。早在1877年就开始了对酪酸梭菌的研究。近130年以来,不同国别的不同研究者曾经先后用了10来种不同的名称记录或描述这个菌种（表1）,1980年学术界规范地将其统一命名。尽管早已有文献报道酪酸梭菌是人的正常肠道菌,但是在i999年2月由联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）联合在罗马召开的第52次食品添加剂专家委员会的会议文件中还是再次指出了酪酸梭菌是人的正常肠道菌这一事实。酪酸梭菌是严格的厌氧菌,产生丁酸,所以也有人将其称为丁酸梭菌。它们不仅存在于人的肠道中,也存在于动物肠道和土壤中。在一定条件下形成孢子。     

住院腹泻患者艰难梭菌快速检测结果分析

目的 了解住院腹泻患者艰难梭菌带菌情况,为抗生素相关腹泻患者的诊断和治疗提供参考。方法 收集2015年9月至2016年8月住院腹泻患者粪便标本163份,用艰难梭菌快速检测试剂盒检测艰难梭菌。结果 艰难梭菌检出总阳性率为20.86%（34/163）,其中春季16.67%、夏季15.79%、秋季17.86%、冬季27.87%,经比较差异无统计学意义（2=2.943,P＞0.05）;成人粪便标本阳性率为22.52%（25/111）,儿童粪便标本阳性率为17.31%（9/52）,差异无统计学意义（2=0.583,P＞0.05）;男性粪便标本阳性率为21.69%（18/83）,女性粪便标本阳性率为20.0%（16/80）,差异无统计学意义（2=0.202,P＞0.05）;艰难梭菌阳性患者抗菌药物平均使用天数为12.74 d,阴性患者为8.21 d,差异有统计学意义（t=－7.81,P＜0.01）。结论 住院腹泻患者艰难梭菌阳性率高低与抗菌药物使用时间长短有关。     

抗生素与肠道菌群及难辨梭菌的关系

抗生素与肠道菌群及难辨梭菌的关系大连医科大学附属二院呼吸内科大连１１６０２３刘宇,顾俊明从１９４０年青霉素Ｇ应用于临床以来,抗生素的研制和临床使用突飞猛进地发展［１］。据１９９０年世界卫生组织（Ｗ．Ｈ．Ｏ）的一项调查表明,抗生素已经成为医院内应用具广...     

具有中等毒性的马氏钳蝎神经毒素的纯化和初步晶体学研究

运用柱层析技术对产自淅川和常德的马氏钳蝎毒素进行分离纯化,得到８种哺乳动物神经毒素。运用制备型等电聚焦电泳技术,对常德样品中具有中等毒性的蝎神经毒素（ＢｍＫ５）进一步纯化,获得了高纯度样品。两个产地的蝎毒素ＢｍＫ５均已经成功地获得了大晶体。空间群均为Ｐ２１２１２１,晶胞参数分别为：ａ＝３８．４６埃,ｂ＝３７．２８埃,ｃ＝３６．９７埃（淅川）;ａ＝３８．４４埃,ｂ＝３７．５５埃,ｃ＝３６．８３埃（常德）。对两个产地的晶体分别收集了２．１埃（淅川）和１．６２埃（常德）分辨率的衍射数据。     

酪酸梭菌与婴双歧杆菌对艰难梭菌体外生物拮抗作用的作用

用酪酸梭菌（Clostridium butyricum)和婴双歧杆菌（Bifidobacterium infantis)单独或联合艰难菌（Clostridium difficile)进行试管内的生物拮抗作用,将酪酸梭菌、婴儿双歧杆菌单独或酪酸梭菌和婴儿双歧杆菌联合分别与艰难梭菌以一定的比例等量混合后,接种于GAM液体培养基中进行厌氧培养。证明酪酸梭菌和婴儿双歧杆菌能明显抑制艰难梭菌的生长,并且两菌联合比各自单独培养时显示出更强的生物拮抗作用。     

ICU患者艰难梭菌分离培养与流行病学特征研究

目的 了解ICU患者艰难梭菌的定植和感染情况,为预防艰难梭菌的流行提供参考。方法 收集2016年9月至2017年6月福建医科大学附属第一医院ICU中139例住院时间＞7 d的患者的粪便样本,对其进行选择性厌氧培养和质谱鉴定。对艰难梭菌培养阳性标本进行毒素基因（tcdA、tcdB、cdtA、cdtB）的PCR检测以及毒素A、B表型检测。收集所有患者的临床资料,并对艰难梭菌培养阳性患者的临床特征和实验室检查结果进行单因素分析和多因素回归分析。结果 艰难梭菌检出率为17.27%（24/139）。其中,14株艰难梭菌的tcdA和tcdB基因检测阳性,占58.3%（14/24）;10株为tcdA和tcdB基因检测阴性,占41.7%（10/24）。所有菌株二元毒素基因（ctdA/ctdB）均未检出。单因素分析提示,高龄、长时间住院、高淋巴细胞数、使用β-内酰胺类抗生素是艰难梭菌定植的高危因素;多因素回归分析提示,使用β-内酰胺类抗生素是艰难梭菌定植的独立危险因素（OR=3.881,P=0.039）。结论 我院ICU可能存在艰难梭菌感染和传播的风险,对具有高龄、长期住院以及使用抗生素等高危因素的患者应进行艰难梭菌的监测,以防艰难梭菌的传播、感染和艰难梭菌相关性腹泻的发生。     

梭菌神经毒素分子作用机制的相关研究进展

厌氧梭菌产生的神经毒素可以引起严重的神经失调,甚至威胁生命.作为具有很高同源性的7种毒素分子,它们既具有相似的发病机制又有不尽相同的结构基础和分子作用方式,从而产生不同的毒素活性.主要就神经毒素分子作用机制相关的毒素蛋白结构、毒素受体、毒素活性的发生、毒素与底物的作用、底物的调节作用与应用等内容的研究进展作一综述.     

中国的E型肉毒中毒及其病原菌的特点

本世纪３０年代中期,几乎同时在原苏联与美国分别发现海鱼引起的肉毒中毒并认定其病原菌为一新型即Ｅ型的肉毒梭菌之后,世界各地也相继发现Ｅ型肉毒中毒发生,且多为沿海地区居民因食用处理不当的鱼,鱼子及各种海栖动物肉所导致。而我国的Ｅ型肉毒中毒及其病原菌的地理分布状态以及中毒诱因等方面在国际间具有某些独特之处。在我国,除大连新金县罐头鱼引起的一起Ｅ型肉毒中毒之外,Ｅ型中毒主要发生在海拔４～５千米的青藏高原或远隔海域的东北平原和华北平原;中毒均为食物中毒型,原因食品及发病因素基本上都是生吃冬藏肉或豆谷类发酵食品。我国的Ｅ型肉毒梭菌也多分布于黄土高原或内陆平原,而在沿海的泥沙和鱼类中则很少能检出该菌。华北平原微山湖周边几个县发生的３起食物中毒型Ｅ型肉毒中毒已经证实均系酪酸梭菌产生的Ｅ型神经毒素所引起,并又查明该湖周围土壤中确有Ｅ型神经毒素原性酪酸梭菌存在,此乃世界上最早的发现