核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达

红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)是调节抗氧化基因表达的关键转录因子.γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)是肺内主要的抗氧化基因,但Nrf2如何调节γ-GCS表达目前仍不清楚.该文采用香烟烟雾提取物(CSE)诱导大鼠气道上皮细胞为研究对象,探索Nrf2调节γ-GCS基因表达机制.细胞免疫荧光显示,Nrf2蛋白质在CSE处理1、3和6h组,主要在胞核中表达.细胞免疫化学与Western印迹显示,γ-GCS蛋白质在CSE1、3、6h组表达明显增强,其中Western印迹结果高于对照组(P0.05);Nrf2胞核蛋白质表达增强.p-aPKCι/ζ蛋白质在CSE1、3h组表达增强,与对照组相比差异显著(P0.05).RT-PCR结果表明,γ-GCSmRNA在CSE1、3、6h组表达明显高于对照组(P0.05).γ-GCS活性在CSE1、3、6h组增高并高于对照组(P0.05).GSH含量在CSE3、6h组明显高于对照组(P0.05).预先加入aPKCι/ζ抑制剂RO813220,Nrf2胞浆蛋白质表达增强,GSH含量、p-aPKCι/ζ蛋白质、γ-GCS蛋白质与其mRNA和活性均明显低于CSE3h组(P0.05).相关性分析显示Nrf2与γ-GCS、γ-GCS活性、p-aPKCι/ζ呈正相关,p-aPKCι/ζ与Nrf2、γ-GCS、γ-GCS活性呈正相关(P0.05).以上结果表明,CSE可能通过aPKCι/ζ-Nrf2信号通路调节γ-GCS的表达水平和活性.     

Bach1与Nrf2调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶对大鼠慢性阻塞性肺疾病的作用

为了探讨Bach1 (BTB and CNC homology 1)与红系衍生的核因子相关因子2（Nrf2）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的表达变化在慢性阻塞性肺疾病（COPD）中的作用和意义,用气管内注入脂多糖及熏香烟的复合刺激法建立大鼠COPD 模型．观察两组大鼠的肺组织病理学改变,测两组大鼠的肺功能指标;应用免疫组化、Western印迹、原位杂交和逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）等方法检测Bach1与Nrf2及γ GCS 在两组大鼠的肺组织中的表达．结果显示,COPD组的肺功能指标（FEV_0.3、FEV_0.3/FVC%、PEF）明显恶化;光镜下肺组织病理改变符合COPD的特征性改变;γ GCS与Nrf2 的mRNA及蛋白质表达在COPD组大鼠肺组织中明显增强;而Bach1 mRNA及蛋白质在COPD组和对照组的表达无明显差别．且核/胞浆分离技术表明,Nrf2蛋白在对照组主要表达于胞浆,胞核中表达水平较弱,在COPD组胞浆、胞核均有表达,但是在胞核中的水平明显升高;Bach1蛋白在对照组主要表达于胞核中,胞浆中无明显表达,在COPD组主要表达于胞浆,胞核中无明显表达．相关性分析表明,γ-GCS mRNA与FEV_0.3、FEV_0.3/FVC%、PEF均呈负相关;Nrf2蛋白表达与γ GCS mRNA呈正相关;Bach1蛋白与γ GCS mRNA呈负相关．上述结果提示,Bach1与Nrf2和γ-GCS可能均在大鼠COPD的发病中发挥作用,且Bach1和Nrf2可能通过竞争性机制调控γ-GCS的表达,影响COPD的发生和发展．     

PPAR-γ/PGC-1α对支气管哮喘豚鼠肺组织Nrf2/γ-GCS-h作用

目的：观察PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h在豚鼠支气管哮喘肺组织中表达而探索PPAR-γ/PGC-1α对Nrf2/γ-GCS-h作用。方法：40只健康雄性豚鼠随机化原则分成对照组（A组）、哮喘组（B组）、地塞米松（C组）和罗格列酮治疗组（D组）,每组10只豚鼠,卵蛋白致敏法复制哮喘模型。原位杂交检测PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-hmRNA表达,免疫组化和Western blot检测四种蛋白表达。结果：PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h的mRNA哮喘组表达最低,四组表达差异有统计学意义（P均〈0.01）;免疫组化和Western blot显示PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h的蛋白哮喘组表达几乎都呈阴性而且以核内表达为主,四组差异均有统计学意义（P均〈0.01）。PPAR-γ表达与PGC-1α表达呈正相关,γ-GCS-h mRNA表达与PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2核内表达均呈正相关,Nrf2表达与PPAR-γ和PGC-1α表达均呈正相关。结论：PPAR-γ、PGC-1α、Nrf2和γ-GCS-h在卵蛋白致敏急性支气管哮喘模型中表达下降;PPAR-γ/PGC-1α可通过上调Nrf2/γ-GCS-h表达提高组织的抗氧化能力,因而PPAR-γ/PGC-1α在哮喘的发病和防治可能起重要的作用。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠转录因子KLF2对Nrf2调控γ-GCS表达的影响

目的:研究肺Krüppel样转录因子(KLF2/LKLF)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中的表达,探讨KLF2与红系衍生因子2(Nrf2)之间的关系以及对抗氧化酶γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)表达的影响。方法:复制大鼠COPD模型,应用免疫组化、Western blot、原位杂交和RT-PCR方法检测KLF2、Nrf2、γ-GCS蛋白及mRNA的表达,并行相关分析。同时利用免疫共沉淀技术(CO-IP)研究KLF2与Nrf2蛋白之间的相互关系。结果:免疫组化及Western blot结果显示COPD组KLF2、Nrf2、γ-GCS蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05);原位杂交及RT-PCR显示KLF2、γ-GCS mRNA水平在COPD组显著高于对照组(P<0.01),而Nrf2 mRNA在两组表达无明显差异(P>0.05);CO-IP结果显示在Nrf2抗体捕获的免疫沉淀中,KLF2抗体可杂交出明显的蛋白条带(P<0.01);直线相关分析发现KLF2蛋白与Nrf2蛋白呈正相关(P<0.05),KLF2、Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白及mRNA均呈正相关(均P<0.05)。结论:KLF2在COPD肺组织中表达上调,可能通过活化Nrf2,促进Nrf2核积聚上调γ-GCS的基因表达,在氧化失衡中发挥作用。     

支气管哮喘豚鼠肺组织中Nrf2对γ-GCS的作用

目的:研究支气管哮喘豚鼠肺内Nrf2对γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的作用。方法:成年雄性豚鼠20只,随机分成2组(n=10):①对照组(C组);②哮喘组(A组),以腹腔内注射联合雾化吸入卵蛋白复制哮喘模型。测肺组织中活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)和总谷胱甘肽的含量;测细支气管炎症细胞浸润及支气管重塑指标;原位杂交测肺组织中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶重链(γ-GCS-h)mRNA表达;免疫组化测γ-GCS和Nrf2蛋白质在肺组织中的表达;RT-PCR测Nrf2mRNA在肺组织中的表达;双酶法测γ-GCS的活性。结果:①A组细支气管嗜酸性粒细胞(E)数和淋巴细胞(L)数,较C组明显增多(P<0.01),并出现细支气管重塑。②A组肺组织中ROS、GSSG和总谷胱甘肽较C组明显增高(P<0.01),与C组比较,GSH/GSSG明显下降(P<0.01),而GSH差异无统计学意义。③免疫组化显示Nrf2和γ-GCSA组较C组明显增高(P<0.01);原位杂交显示γ-GCS-hmRNA表达A组较C组亦明显增高(P<0.01)。④RT-PCR显示在肺组织中Nrf2mRNA转录C组和A组无明显差异。⑤γ-GCS活性A组为(28±8)U,与C组(9±2)U比较,差异有统计学意义(P<0.01)。⑥直线相关性分析显示:在肺组织中Nrf2与ROS、GSSG、γ-GCS-hmRNA、γ-GCS蛋白质及γ-GCS活性呈高度正相关;GSH/GSSG与Nrf2蛋白质、γ-GCS-hmRNA、γ-GCS蛋白质及γ-GCS活性呈高度负相关。结论:在支气管哮喘豚鼠肺中存在氧化应激,氧化应激可能通过上调Nrf2而上调γ-GCS表达。     

静脉注射核因子NF-E2相关因子表达质粒减轻糖尿病小鼠肾小球氧化应激损伤的实验研究

该实验旨在研究经小鼠尾静脉快速注射核因子NF-E2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)表达质粒对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病小鼠肾小球氧化应激损伤的保护作用。采用腹腔注射STZ诱发糖尿病小鼠模型,自成模后第3天开始,尾静脉快速注射pcDNA3/mNrf2质粒。4周后收取标本,检测动物肾小球丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,纤维连接蛋白(fibronectin,FN)以及Nrf2、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthethase,γ-GCS)在肾小球的表达。实验结果表明,尾静脉注射可以将Nrf2表达质粒转染入小鼠肾小球。此方法可以降低糖尿病小鼠肾小球MDA浓度,减轻FN在肾小球的表达,增加Nrf2在肾小球细胞核的积聚以及γ-GCS的转录和表达。该研究证明,应用尾静脉注射Nrf2表达质粒的方法可以减轻糖尿病小鼠肾小球氧化应激损伤,减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积,其机制部分是通过激活Nrf2-ARE信号通路而实现的。     

支气管哮喘豚鼠肺泡灌洗液中炎症细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达

目的探讨支气管哮喘豚鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。方法38只健康雄性豚鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)和地塞米松治疗组(C组),卵蛋白致敏法复制哮喘模型,收集BALF,行细胞计数和分类。离心,上清液行谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)浓度测定,细胞涂片行免疫细胞化学和原位杂交,检测γ-GCS蛋白和mRNA。结果B组嗜酸性粒细胞数(EOS)比例高于A组和C组,差异有统计学意义(P=0.000);γ-GCS免疫细胞化学B组A值最低,三组差异有统计学意义(P=0.047);γ-GCS原位杂交B组A值最低,三组差异有统计学意义(P=0.022);B组BALF中EOS比例与γ-GCS mRNA表达(A值)(r=-0.727,P=0.017)呈负相关;BALF中GSH和MDA浓度在三组间差别无统计学意义。结论哮喘组豚鼠抗氧化能力下降,抗氧化能力下降可能与炎症反应有关,糖皮质激素治疗有效。     

哮喘豚鼠肺、肝组织中还原型谷胱甘肽、γ谷氨酰半胱氨酸合成酶及其重链mRNA的表达

目的研究支气管哮喘（简称哮喘）豚鼠肺、肝组织中还原型谷胱甘肽（GSH）、γ谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）活性及其重链（γ-GCSh）mRNA表达的差异和变化。方法取健康雄性豚鼠30只,随机分为哮喘组（A组）、地塞米松治疗组（B组）及对照组（C组）,每组10只。采用腹腔内注射联合雾化吸入卵清蛋白复制哮喘豚鼠模型,用生物化学反应比色法检测各组豚鼠肺、肝组织中还原型谷胱甘肽（GSH）、总谷胱甘肽（TGSH）和γ-GCS的活性,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组豚鼠肺、肝组织中γ-GCSh mRNA的表达。结果A组豚鼠与B组、C组比较肺内γ-GCS活性及γ-GCSh mRNA的表达明显升高,相应的总谷胱甘肽水平增加（P均〈0.01）,但GSH水平较对照组、治疗组下降（P〈0.05）;肝脏组织内γ-GCS活性、γ-GCSh mRNA的表达、TGSH及GSH浓度A、B、C三组比较差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论哮喘豚鼠肺内γ-GCS、TGSH及γ-GCSh mRNA表达增高,并可能在抗氧化损伤中发挥重要作用,而TGSH、GSH、γ-GCS及γ-GCSh mRNA在哮喘豚鼠肝脏局部表达无变化。     

PPARγ/PGC-1α在支气管哮喘豚鼠肺组织中表达及作用

目的:观察PPARγ和PGC-1α在豚鼠支气管哮喘肺组织中表达而探索PPARγ/PGC-1α对哮喘作用机制.方法:加只健康雄性豚鼠随机化原则分成对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(C组)和罗格列酮治疗组(D组)每组10只豚鼠.卵蛋白致敏法复制哮喘模型,第16天始每日诱喘前30min C组和D组分别给予约3至5ml溶有药物的生理盐水灌胃:C组地塞米松2mg/kg,D组罗格列酮4mg/kg连续14天.测细支气管炎症细胞浸润及支气管重塑指标,肺组织病理;原位杂交和RT-PCR检测PPARγ和PGC-1α的mRNA表达免疫组化和Western blot检测肺组织两者蛋白表达.结果:(1)哮喘组出现了明显气道重塑和炎症细胞浸润,地塞米松和罗格列酮对其起抑制作用.(2)原位杂交和RT-PCR显示PPARγ和PGC-1αmRNA哮喘组表达最低四组差异均有统计学差异(P均<0.01);免疫组化和Western blot显示PPARγ和PGC-1α蛋白哮喘组表达几乎都呈阴性而且以核内表达为主,四组差异均有统计学意义(P均<0.01);地塞米松和罗格列酮可上调PPARα和PGC-1γ蛋白以及mRNA的表达.(3)支气管哮喘豚鼠肺组织PPARγ与PGC-1α表达呈正相关,PPARγ和PGC-1α蛋白以及mRNA与浸润的嗜酸粒细胞、Wal%、SMC-A%呈负相关.结论:PPARγ/PGC-1α在卵蛋白致敏急性支气管哮喘模型中表达下降,罗格列酮和地塞米松一样可上调PPARγ/PGC-1α,PPARγ/PGC-1α对哮喘发病起重要作用而可能为哮喘防治开辟新途径.     

慢性阻塞性肺疾病大鼠NRF2和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的改变

目的:通过观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺内红系衍生的核因子2相关因子2(NRF2)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达,探索NRF2调控γ-GCS在COPD发病中可能的参与机制.方法:雄性Wistar大鼠16只,随机分COPD模型组和对照组.检测γ-GCS活性,γ-GCS的基因表达和NRF2的蛋白质表达.结果:γ-GCS 活性在COPD组中明显高于对照组.γ-GCS mRNA广泛高表达于COPD组支气管平滑肌细胞,而对照组相应部位呈弱表达.对照组肺匀浆中有一定量γ-GCS mRNA表达,但相对于COPD组仍较低.NRF2、γ-GCS在COPD组支气管上皮细胞胞浆中高表达,而对照组相应部位中呈弱表达.COPD组γ-GCS和NRF2蛋白表达皆有明显上调.NRF2蛋白表达与γ-GCS蛋白、mRNA表达呈正相关关系.结论:氧化应激可能通过使NRF2转录活性增加的方式上调NRF2,进而上调γ-GCS的表达,在COPD的发病中起重要作用.     

丹参酮治疗冠心病对Nrf2/ARE信号通路和氧化应激的影响

摘要 目的：分析丹参酮通过核因子E2相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应元件（ARE）信号通路发挥抑制冠心病患者的氧化应激和心肌损伤的作用。方法：前瞻性纳入2022年6月至2023年6月我院诊断不稳定心绞痛患者84例为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组各42例,对照组采用常规药物和介入干预,观察组加用丹参酮ⅡA磺酸钠注射液（剂量40 mg/d）,连续治疗2周。比较两组治疗前后外周血Nrf2、ARE、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和Caspase-1蛋白表达量,氧化应激指标活性氧簇（ROS）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）,炎症介质肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β,心肌损伤指标肌钙蛋白I（cTnI）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）。结果：两组治疗前上述指标均无明显差异（P＞0.05）,治疗后与治疗前比较改善明显（P＜0.05）,且观察组Nrf2和ARE蛋白表达量显著高于对照组,而HIF-1α和Caspase-1蛋白表达量显著低于对照组,ROS水平下降,MDA和SOD水平升高,TNF-α和IL-1β降低,cTnI和CK-MB水平下降（P＜0.05）。结论：丹参酮可能通过激活Nrf2/ ARE信号通路发挥抑制冠心病患者的氧化应激、炎症反应、细胞凋亡以及心肌损伤的作用。     

Nrf2/ARE通路相关因子在脂肪变性HepG2细胞中的表达及其意义

目的:探讨建立一种新型的脂肪变性人肝癌细胞(Hep G2)模型,观察核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路相关因子在脂肪变性Hep G2细胞中的表达及其意义。方法:Hep G2细胞给予含25%的胎牛血清、0.1%医用脂肪乳和0.1 mmol/L游离脂肪酸(FFA)的DMEM培养基分阶段诱导后,建立脂肪变性Hep G2细胞模型,并设置对照组。模型成功后,以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况,并用全自动生化仪检测细胞内甘油三酯(TG)含量;采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)的含量,采用生物试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量及活性的变化;运用Western blot法检测各组细胞Nrf2、血红素氧化酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组油红O染色可见细胞内橘红色脂滴大量形成,TG、ROS、NO、MDA含量水平明显增高(P0.05,P0.01),SOD、GSHPx活性明显下降(P0.01),Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达均显著增高(P0.05,P0.01)。结论:本模型可以成功诱导Hep G2细胞发生脂肪变性和氧化应激损伤状态;Nrf2/ARE通路下游相关因子发生激活可能与脂肪变性Hep G2细胞氧化应激的过度反应有关。     

氧化和化学应激的防御性转导通路——Nrf2/ARE

Nrf2/ARE是近年新发现的机体抵抗内外界氧化和化学等刺激的防御性转导通路．生理条件下,NF-E2相关因子2(Nrf2,NF-E2-related factor 2)在细胞质中与Keap1结合处于非活性、易降解的状态.在内外界自由基和化学物质刺激时,Keap1的构象改变或者Nrf2直接被磷酸化,导致Nrf2与Keap1解离而活化．活化的Nrf2进入细胞核,与抗氧化反应元件(ARE)结合,启动ARE下游的Ⅱ相解毒酶、抗氧化蛋白、蛋白酶体/分子伴侣等基因转录和表达以抵抗内外界的有害刺激．MAPK、PI3K/AKT、PKC等信号通路分子广泛参与了Nrf2的活化和核转位过程,但是具体何种通路被激动、何种通路发挥主导作用,取决于刺激物种类、刺激方式和细胞类型．本文就Nrf2分子结构、Nrf2活化机制、Nrf2/ARE调控的下游基因、与Nrf2相关的信号通路分子以及其在肿瘤、炎症、衰老等应用领域的最新进展进行综述．     

黄芪甲苷IV调节MRP3的表达及功能研究

目的:研究黄芪甲苷IV(AS-IV)对人肝癌细胞HepG2中多药耐药相关蛋白-3(MRP3)的调节作用,为AS-IV可能引发的药物相互作用阐明机制。方法:培养HepG2细胞,用不同浓度AS-IV进行干预,Western blotting方法检测细胞中MRP3的蛋白水平,流式细胞术检测胞内5-羧基荧光素(5-CF)的荧光强度,反映MRP的功能;给予MRP3 si RNA干扰,观察AS-IV诱导的MRP3蛋白表达是否增加其外排转运功能;提取胞核、总蛋白,检测胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)、总Nrf2蛋白水平;给予Nrf2 si RNA干扰,观察AS-IV诱导的MRP3蛋白表达是否依赖于Nrf2。结果:200μmol/L AS-IV作用48 h后,细胞MRP3的蛋白水平显著增加(P0.05),胞内5-CF的平均荧光强度(MFI)明显低于对照组(P0.05),与单独给予AS-IV组相比,给予MRP3 si RNA干扰显著增加了胞内5-CF的MFI(P0.05)。AS-IV增加了胞核内Nrf2的蛋白水平(P0.01),亦增加了总Nrf2的蛋白表达(P0.01)。给予Nrf2 si RNA干扰后,AS-IV诱导上调的MRP3被显著抑制(P0.05)。结论:AS-IV可通过上调MRP3的蛋白表达,增加其外排转运功能,Nrf2的激活在AS-IV诱导MRP3蛋白表达中起着重要的作用。本研究提示,AS-IV与MRP3底物合用时,可能会产生药物-药物相互作用。     

PI3K/Akt-aPKC_（ι/ζ）-Nrf2调控大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达

目的：观察香烟烟雾提取物（CSE）是否通过磷酯酰肌醇-3-激酶（PI3K）/Akt-不典型蛋白激酶Cι/ζ（aP-KCι/ζ）-核因子相关因子2（Nrf2）信号通路调控大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（-γGCS）表达。方法：用Western blot法检测-γGCS、Nrf2、p-Akt和p-aPKCι/ζ蛋白质,细胞免疫化学法观察-γGCS蛋白质表达,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测-γGCSmRNA,免疫荧光法检测Nrf2蛋白质,流式分析法检测p-Akt阳性细胞率,双酶法测定-γGCS活性,酶循环分析法测定总还原型谷胱甘肽（GSH）含量。结果：暴露CSE 3 h,GSH含量显著升高,Nrf2胞核蛋白质、p-aPKCι/ζ蛋白质、p-Akt蛋白质及其阳性细胞率、-γGCS蛋白质及其mRNA和活性均显著增强。aPKCι/ζ抑制剂RO813220明显减弱p-aPKCι/ζ蛋白质、-γGCS蛋白质及其mRNA和活性表达,但增强Nrf2胞浆蛋白质表达,对p-Akt无影响。p-Akt抑制剂LY294002及RO813220＋LY294002均降低p-aPKCι/ζ蛋白质、p-Akt蛋白质及阳性细胞率、-γGCS蛋白质及其mRNA和活性表达,增强Nrf2胞浆蛋白质表达。直线相关性分析显示Nrf2与-γGCS、p-Akt及p-aPKCι/ζ呈正相关,p-Akt与Nrf2、p-aPKCι/ζ及-γGCS呈正相关,p-aPKCι/ζ与Nrf2、p-Akt及-γGCS呈正相关（P〈0.05）。结论：CSE可能通过PI3K/Akt-aPKCι/-ζNrf2调节-γGCS表达。     

哮喘豚鼠肺组织中的CARM1和NF-K B表达及地塞米松的干预作用

目的:探讨豚鼠支气管哮喘模型中共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyltransferase 1,CARM1)和核因子- B(NF- B)在气道和肺组织的表达变化及地塞米松的干预作用.方法:36只白色雄性豚鼠随机分为正常对照组、哮喘组和地塞米松治疗组.卵清蛋白致敏并激发后采用间接免疫荧光法检测气道和肺组织中CARM1和NF-B (P65)的表达,探讨其在哮喘中可能的作用机制.结果:CARM1和NF-κ B(P65)在对照组、哮喘组及地塞米松治疗组均有阳性表达,主要在支气管-终末细支气管上皮细胞和肺组织细胞胞核表达.CARM1和NF-κ B(P65)在哮喘组表达水平为[(123.75±41.55)和(126.92±46.74)],在地塞米松治疗组表达水平为[(84.33±27.70)和(85.00±29.22)],均高于对照组的[(51.67±8.29)和(52.75:1:9.07)个/400倍视野],地塞米松治疗组表达较哮喘组低.结论:CARM1和NF-B(P65)在哮喘豚鼠气道上皮及肺组织细胞胞核高表达,提示CARM1可能通过增强募集NF-B到相关位点激活NF-B信号转导通路并启动了多种前炎性基因和免疫调节基因的转录激活、诱发哮喘炎症反应.地塞米松可下调CARM1和NF-κ B的表达而抑制哮喘炎症反应.     

Nrf2在阿尔茨海默病中的研究现状

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的神经系统变性疾病,主要病理特征为细胞外老年斑(senile plaques,SP)和细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)形成.但其发病机制不清,涉及多种病理学变化如炎症反应、氧化应激、线粒体功能障碍、细胞凋亡以及突触功能障碍等.核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)是经典的调控机体抗氧化应激反应的核转录因子.Nrf2激活后诱导抗氧化蛋白的表达,提高机体的抗氧化应激能力.随着Nrf2抗氧化应激作用研究的深入,发现Nrf2不仅能够通过抗氧化应激延缓AD的发生发展,且在AD的病理性沉积物的清除、抗炎、抗凋亡、神经营养等方面扮演着重要的角色.近年来,由于多种针对单一靶点的抗AD药物临床试验的失败,有学者提出Nrf2可能是实现AD多靶点疗法的重要因子.因此,本文对Nrf2在AD中的研究现状做一综述,为寻找治疗AD潜在的生物学靶点提供理论依据.     

氧化应激对肝星状细胞转录因子Nrf2核转位的影响

目的:研究细胞转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)在大鼠肝星状细胞系HSC-T6中的表达及氧化应激对其核转位的影响.方法:将大鼠肝星状细胞(HSC-T6)分成空白对照组和氧化应激组,氧化应激组加入100mU/ml葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GO)干预2h制备细胞氧化应激模型,空白对照组予以DMEM正常培养未进行GO干预.Western blot方法检测Nrf2总蛋白及核蛋白的变化,细胞免疫化学法观察HSC-T6细胞Nrf2核转位情况,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化,分光光度法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平.结果:1氧化应激组ROS及MDA水平较空白对照组显著升高(P<0.01).2 WB显示Nrf2总蛋白在两组的表达无显著差异,而Nrf2核蛋白在空白对照组中无明显表达,在氧化应激组表达明显增加;ICC显示空白对照组中Nrf2蛋白仅在胞浆中表达;而氧化应激组胞核和胞浆中均可见Nrf2蛋白表达.3氧化应激组GSH水平较空白对照组显著升高(P<0.01).结论:在氧化应激过程中Nrf2发生核转位从而发挥其生物学功能.     

葡萄籽原花青素通过Nrf2/ARE信号通路抗高糖诱导的HUVEC-12细胞氧化损伤

研究葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC-12氧化应激损伤的保护作用及其相关机制。建立高糖诱导的HUVEC-12细胞模型,测定细胞活力,检测细胞内活性氧(ROS)水平、乳酸脱氢酶(LDH)与超氧化物歧化酶(SOD)活性及Nrf2/ARE信号通路中相关基因mRNA水平和蛋白含量。结果显示GSPE作用后显著提高HUVEC-12细胞活力,抑制高糖诱导的细胞内ROS水平升高,增强SOD活性(P0.05),并呈现剂量依赖效应。GSPE作用能同时提高抗氧化转录因子Nrf2和下游区GSH-Px、HO-1、γ-GCS、NQO1基因的表达量以及HO-1、NQO1蛋白的含量(P0.05)。结果表明GSPE能通过激活Nrf2/ARE通路对抗高糖诱导的HUVEC-12细胞氧化应激损伤。     

Nrf2及天然产物导向的Nrf2激活剂研究进展

氧化应激能够破坏细胞内氧化还原平衡,造成系统和组织损伤,最终引起一系列疾病的产生.转录因子E2相关因子2(Nrf2),受Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)蛋白的调控,是细胞氧化应激反应中的关键因子,在氧化应激条件下,Nrf2从Keap1中分离,然后进入细胞核与抗氧化反应元件(ARE)结合,增加了Ⅱ相解毒酶的...