杂交瘤单克隆抗体研制中细胞的冻存与复苏

细胞的冻存与复苏是杂交瘤单克隆抗体(MCAb)研制中的一个重要环节.如果这个问题不解决,不但融合得不到成功,而且得到有价值的杂交瘤也会丧失掉.一、细胞的冻存在液氮中冷冻是保存杂交瘤细胞(或骨髓瘤细胞)最好的方法.在MCAb的研制中,一旦测得较有价值的阳性孔,就要一面进行克隆化,一面扩大培养,并冻存起来,以防体     

新型抗体的制备方法及应用潜力

杂交瘤抗体的出现,使McAb在治疗中的应用已成为可能,但仍有许多的问题需要解决。虽然已有许多啮齿类McAb已用于临床,但过敏反应及抗抗体应答却是人们普遍关心的一个问题。特别当需多次注射抗体时,这个问题便显得更加严重。     

杂交瘤细胞的大量培养

杂交瘤细胞的大量培养是一项迅速发展的技术。本文评述了杂交瘤细胞培养条件和代谢调控方面的研究进展,包括反应器培养中的过程参数优化、细胞损伤和保护、营养物质利用和有害副产物的形成、细胞生长和单抗分泌的动力学以及长期培养的稳定性等问题。同时,本文也讨论了在生物反应器中培养杂交瘤细胞的操作模式和控制策略的研究工作,特别是近年来备受重视的灌注培养和补料培养。     

杂交瘤细胞的大量培养

杂交瘤细胞的大量培养是一项迅速发展的技术。本文评述了杂交瘤细胞培养条件和代谢调控方面的研究进展,包括反应器培养中的过程参数优化、细胞损伤和保护、营养物质利用和有害副产物的形成、细胞生长和单抗分泌的动力学以及长期培养的稳定性等问题。同时,本文也讨论了在生物反应器中培养杂交瘤细胞和操作模式和控制策略的研究工作,特别是近年来备受重视的灌注培养和补料培养。     

杂交瘤在临床和科研实验室中的作用

<正>迄今,临床和科研实验室的血清抗体依靠人源或动物源性。因此,长期以来存在着不少悬而未决的问题。杂交瘤的发现,已有可能排除这些问题中的一部分。一种杂交株是含有混合的核物质的细胞,它是小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞的融合体。当它单性增殖时,能继续不断产生单克隆抗体。单克隆抗体所显示的优点,已众所周知。它在科研和临床工作中的应用,已引起人们广泛的兴趣。     

动物细胞培养及单克隆抗体

920533以柠檬酸铁替代转铁蛋白的无蛋白培养基培养鼠-鼠杂交瘤〔英〕/Eto,N一了Agric.Biol.Chem一1901,55(3)一563一865〔译自DBA,1991,10(12),91一07039〕 于37“C、通入湿润5%CO:/95%空气条件下,将鼠杂交瘤IA一4细胞保存在补加10产g/ml胰岛素(I)、35拜g/ml人转铁蛋白(T)、10拼M乙醇胺(E)和2.snM硒(S)(ITES)的DF培养基中。试验了各种低分子量含铁化合物对培养于ES一DF培养基中的IA一4细胞的生长刺激作用。柠檬酸铁的作用最大,与转铁蛋白相当。柠檬酸铁钱的作用也很大;硫酸亚铁和硫酸高铁的作用较小。硫酸铁钱几乎无作用,氯化…     

空肠弯曲菌的保存方法研究

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)目前已被确认是重要的肠道致病菌之一。由于本菌生活力弱,易于死亡,不好保存,在一般常用的培养基上存活时间极短约3—5天,给实际工作造成不少困难,如何保存菌种是一个急待解决的问题。为了提供一种较好的保存空肠弯曲菌的方法,作者选用了五种培养基,比较观察了18株空肠弯曲菌保存在不同条件下的存话期及变异情况,其结果表明：用1、2号培养基的培养物保存若放置4一10℃冰箱,前者经130天,后者经80天其存活率均为100％;在保存210天时,两种培养基的     

人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示：蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×10^5,腹水的抗体效价为1×10^7;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。     

环磷酸鸟苷(cGMP)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性的鉴定

<正> 自从1975年单克隆抗体技术建立以来,已被应用在各个生物学领域中,国内外都尚未建立抗cGMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。我们为了获得更纯,特异性更高的抗cGMP抗体,对此项工作进行了探索,已筛选出能分泌抗cGMP抗体的杂交瘤细胞株,并进行了初步鉴定;现将工作简报如下: 用琥珀酰环磷酸鸟苷(ScGMP)与牛血清白蛋白相连后的化合物(ScGMP-BSA)为抗原免疫BALB/c小鼠,每月一次,共四次,最后一次为尾静脉连续注射三天,第四天将免疫     

建立敏感的抗—HBs免疫分析法

<正>固相放免分析如AUSAB试剂(Abbott实验室)已普遍地用于检测抗-HBs,同时也广泛用于临床作为证实已患过乙型肝炎的检测方法。然而,新研究领域的发展例如:抗-HBs杂交瘤细胞分泌克隆的筛选以及对乙肝疫苗免疫小动物后所得抗血清的分析需要建立一种可靠的免疫分析方法。以便在用大量材料作分析时减少AUSAB的高昂费川。另外,在测定杂交瘤克隆细胞融合后的早期分泌物时需要比AUSAB试剂更敏感的试剂。     

杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展

单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利用小鼠腹水制备单克隆抗体,但是近几十年杂交瘤细胞体外大规模培养制备单克隆抗体技术也在不断发展。特别是单克隆抗体在疾病诊断和治疗方面的需求,更进一步促进了杂交瘤细胞体外培养生产技术的发展,体外培养杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面。由于杂交瘤细胞的半贴壁性质,无论是悬浮培养还是贴壁培养,均可进行杂交瘤细胞的体外大规模培养。针对应用于体外诊断试剂的杂交瘤细胞体外培养制备单克隆抗体进行综述,主要包括中空纤维细胞培养和生物反应器细胞培养方法,以及不同培养方法优化的进展。     

杂交瘤合成抗体

<正> 引言 一般的抗血清是含有千百种分泌不同抗体的克隆(Clone)产物,可能其中许多克隆产物并非对抗所用的抗原,例如免疫原的杂质,或其它有关的分子。这就限制了用一般血清学方法可能达到的目的。 1975年Kahler和Milstein证明了正常分泌抗体的细胞经与骨髓瘤细胞融合形成的各个克隆可无限生长,杂交瘤方法的发展使血清学进入一个精确的新时代。一下子解决了特异性和重复性二个主要问题,实际上即使不纯的抗原也可产生非常均一的、极其特异的抗体。 5年来,杂交瘤技术几乎已深入生物学的各个领域,甚至渗入于过去认为用血清学万法达不到的范畴,单克隆抗体已用于探讨蛋白的精细结构、激素和药物的放射免疫分析、组织相容性检查、肿瘤定位和分类、免     

农业其它

922石05利用生物技术保存热带种质仁英〕/V nlalobs,V.M.…了Bioteehnol.Ady一1901,9(2)一19了~215〔译自DBA,1991,10(23),91-13556〕 就以下方面综述了生物技术在热带种质保存中的应用:天然资源受到威胁的植物种质;遗传资源保存中的问题;遗传资源保存的必要性;种质保存系统(常规系统、离体系统、短期、中期和长期冷冻保存);离体收集物的遗传稳定性。种子库被认为是传统种子贮存最好的系统。对不能承受脱水的许多热带品种而言组织培养和冷冻保存是最好的选择方法。在这些系统中必须监测体细胞克隆变异及突变。冷冻保存已被认作是许多植…     

人内细皮胞培养物上清液(HECS):一种杂交瘤的生长因子

<正>人内皮细胞培养物上清液(HECS)对杂交瘤细胞有强烈的促进生长活性:融合后杂交瘤的产量,比在饲养细胞(如小鼠巨噬细胞和脾细胞)存在的条件下至少增加两倍以上。而且,当杂交瘤在单细胞水平培养时,HECS能代替饲养细胞,并大大提高杂交瘤的增殖能力。此外,人内皮细胞的存在延长了产生人免疫球蛋白的人-鼠杂交瘤的稳定性。因为杂交细胞在体外培养时是难以     

分泌抗北京鸭免疫球蛋白单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-2(简报)

淋巴细胞杂交瘤技术作为一种新的生物工程技术,已在生物学和医学领域内得到广泛的应用。我们继建立产生抗北京鸭红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系CBH-1后,又建立了一株产生抗北京鸭免疫球蛋白(I_g)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为CBH-2。这种杂交瘤细胞经体外培养,能稳定地分泌抗北京鸭I_g的单克隆抗体。此单克隆抗体在以北京鸭抗体进行放射免疫和酶标等测定时,可用作第二抗体。现将主要结果简报于下。北京鸭I_g抗原的制备及免疫:从北京鸭颈动脉采血,分离血清,用50%和33%硫酸铵沉淀法提取二次。每只Balb/cJ小鼠腹腔免疫剂量为0.3毫克,共免疫三     

杂交瘤形成方法

本书主要论述了近年来杂交瘤和单克隆抗体的产生和临床实验技术及其将来的应用。为生物学、医学、临床医学、农业、动物学、微生物学、兽医学等学科的科研工作者所必需的参考书。 内容:1.杂交瘤形成的现代方法学;2.逆转录病毒和杂交瘤形成;3.杂交瘤产生中的细胞融合及筛选机理;4.化学介导的细胞融合;5.电细胞融合;6.促进杂交瘤形成;     

用单个细胞转移技术进行杂交瘤的克隆化

<正>本文所报导的克隆杂交瘤的方法,是用一根毛细管连接一套抽吸装置,进行单个细胞的转移。这一方法可以有效地从培养的亲本杂交瘤中重新获得数量比例不同的抗体产生克隆。4个细胞株用这一方法再克隆获的了100％阳性。     

用单克隆抗体证明糖蛋白和糖脂的碳水化合物结构是癌发育抗原

<正>用杂交瘤技术可产生具有所期望特异性的单克隆抗体,为在细胞分化和成熟过程中对抗原变化(分化抗原)的检测提供了一种快速工具。用小鼠脾细胞免疫大鼠后,偶然产生了这种类型的杂交瘤抗体,这种途径的可行性是明显的。血清学研究证明:能识别在早期鼠胚胎表达阶段特异性抗原的抗体,     

P2X7受体短肽单克隆抗体的制备及鉴定

旨在制备与鉴定鼠抗P2X7受体的蛋白单克隆抗体.以人P2X7受体的胞外段制备短肽作为抗原,皮下注射免疫Balb/c小鼠.分离小鼠脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合并培养,挑选阳性杂交瘤细胞,扩大培养,制备和鉴定P2X7其生物学效应.结果显示,获得1株稳定分泌抗人P2X7受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型重链为IgG1,轻链为κ;该株杂交瘤细胞腹水效价为1∶6.4×104;传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;Western blotting检测证明该单抗与人细胞表面的P2X7受体蛋白特异地结合.所制备的抗人P2X7受体的单克隆抗体具有高度的特异性及稳定性,为针对P2X7受体为靶点的抗体药物的开发应用、疾病的辅助诊断奠定了基础.     

DMSO抑制杂交瘤增殖促进抗体的分泌

利用DMSO促进杂交瘤细胞分泌单克隆抗体,并对其作用机制进行了研究。结果表明在杂交瘤细胞对数生长后期添加0.6%浓度的DMSO与对照相比可提高抗体的产量2倍;流式细胞仪检测细胞周期表明此时837%的细胞处于G1期;免疫印记结果显示在有DMSO作用下杂交瘤细胞P27 蛋白表达显著升高。因此,DMSO 可通过促进P27蛋白的表达,抑制杂交瘤细胞的增殖,从而提高杂交瘤细胞分泌抗体的能力。对DMSO进一步在高密度大规模培养杂交瘤细胞中的应用具有重要意义。