传染性支气管炎病毒N蛋白CTL表位与BF2*15鸡MHC I基序的相互作用

【目的】近年来鸡传染性支气管炎病毒在国内鸡群呈现流行趋势,尤其是变异毒株的出现,加剧了对鸡群的危害。鸡主要组织相容复合体蛋白(MHC I)通过特定的基序结合抗原表位多肽,进而识别感染病毒的细胞并引起免疫反应,达到清除病毒的效果。鉴定BF2*15鸡主要组织相容复合体(MHC I)的结合基序。【方法】采用同源建模、分子动力学和分子对接等计算方法,构建了传染性支气管炎病毒(IBV)N蛋白表位多肽和鸡MHC I BF2*15之间的复合物结构,来探索BF2*15识别抗原表位多肽的潜在结合基序。【结果】通过对该复合物的相互作用关系分析,鉴定出BF2*15鸡主要组织相容复合体(MHC I)的一条潜在结合基序"x-Arg-xx-x-Arg"。【结论】解释了传染性支气管炎病毒N蛋白CTL表位与BF2*15鸡MHC I基序的相互作用原理,该研究结果对了解传染性支气管炎病毒免疫机制以及基于特定基序筛选和设计通用疫苗具有借鉴意义。     

小鼠胚胎癌细胞来源的分化细胞合成IGF-Ⅱ

胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)是一种促有丝分裂多肽,对哺乳类胚胎生长和发育起着重要作用。然而,在早期胚胎发育阶段,有关这种生长因子的产生、功能及其对胚胎细胞生长、分化的调节作用所知甚少。本文用纯化大鼠8.5 KDa增殖刺激活性因子(multiplicationstimulating activity,MSA)作免疫原,制备了多克隆抗体。以同位素在体外代谢标记PC 13小鼠多能胚胎癌(EC)细胞及其经维生素A酸(RA)诱导分化的内胚层样END细胞,在分化的PC 13 END细胞培液中检测到与IGF-Ⅱ抗体起免疫沉淀的物质,而未分化的PC 13 EC细胞并不分泌这种物质,证明了从EC细胞来源的分化细胞能合成和分泌IGF-Ⅱ蛋白。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,这种免疫沉淀物质为分子量35 KDa和14-15 KDa的三种形式蛋白。35 KDa分子可能是一种IGF_Ⅱ前体蛋白或具IGF-Ⅱ专一性的载体蛋白。用免疫酶染色方法,在另一株多能B 7-2 EC克隆细胞中,同样证明经环六亚甲基双乙酰胺(HMBA)诱导分化的内胚层样细胞的胞质中染有与IGF-Ⅱ抗体起反应的物质;而且在HMBA诱导处理24小时即已出现这种染色反应。随着药物处理时间延长,除了细胞形态进一步呈梭形和细胞质突起更显著外,免疫反应强度未见有明显变化,表明IGF-Ⅱ的合成在EC细胞诱导分化的较早阶段就开始。根据这些结果,推测早期胚胎发育中内胚层细胞可能产生和分泌IGF-Ⅱ蛋白。     

轮状病毒VP4*高聚体的制备及其免疫保护性评价

在前期工作中发现,截短的轮状病毒VP4~*蛋白(aa26–476)在大肠杆菌中能够以可溶形式表达,且在小鼠模型中具有较高的免疫原性和免疫保护性。本研究通过颗粒化进一步提高VP4~*蛋白的免疫保护性。通过37℃水浴加热处理24h使VP4~*蛋白多聚化,通过高效液相色谱、透射电镜、分析超离等分析VP4~*蛋白颗粒化程度,通过酶联免疫吸附试验分析颗粒化对VP4~*蛋白与中和抗体反应性的影响;通过差示量热法分析VP4~*高聚体的热稳定性;最后,通过小鼠母传抗体模型研究颗粒化对VP4~*免疫原性和免疫保护性的影响。结果表明,VP4~*蛋白高聚体结构均一,并且相比三聚体,具有更高热稳定性和中和抗体结合活性;在内毒素20 EU/mg的条件下,与铝佐剂混合,刺激小鼠产生更高滴度的中和抗体;对轮状病毒导致的腹泻具有更高的免疫保护性。综上所述,VP4~*高聚体的研究为轮状病毒基因工程亚单位疫苗的研制提供了更广阔的思路。     

猪产肠毒素大肠杆菌987P蛋白受体的鉴定

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)定植于仔猪肠道的第一步是通过987P菌毛与小肠上皮细胞表面刷状缘大分子(BBV)结合。对分离的BBV进行SDS-PAGE和Ligand blot分析表明, 在32~35KDa区域内有一条带能被987P菌毛探针所识别和结合, 所结合的条带经胰蛋白酶消化后, 通过微内径反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离出多条主要峰带蛋白峰带, 采用衬质辅助激光解吸与电离质谱法(MALDI-MS)对主要峰带进行分析, 结合多肽氨基酸测序和Blast同源性比较, 得到3个氨基酸基序(AETAP、ALAAAGYDVEK和LGLK), 其序列与人和鼠源的组蛋白H1高度同源; 来源于仔猪小肠上皮细胞BBV的H1蛋白与BBV一样都能特异性结合纯化的987P菌毛蛋白。上述结果表明, 仔猪小肠上皮细胞BBV的组蛋白H1是987P菌毛蛋白的受体。     

猪产肠毒素大肠杆菌987P蛋白受体的鉴定

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)定植于仔猪肠道的第一步是通过987P菌毛与小肠上皮细胞表面刷状缘大分子(BBV)结合。对分离的BBV进行SDS-PAGE和Ligand blot分析表明, 在32~35KDa区域内有一条带能被987P菌毛探针所识别和结合, 所结合的条带经胰蛋白酶消化后, 通过微内径反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离出多条主要峰带蛋白峰带, 采用衬质辅助激光解吸与电离质谱法(MALDI-MS)对主要峰带进行分析, 结合多肽氨基酸测序和Blast同源性比较, 得到3个氨基酸基序(AETAP、ALAAAGYDVEK和LGLK), 其序列与人和鼠源的组蛋白H1高度同源; 来源于仔猪小肠上皮细胞BBV的H1蛋白与BBV一样都能特异性结合纯化的987P菌毛蛋白。上述结果表明, 仔猪小肠上皮细胞BBV的组蛋白H1是987P菌毛蛋白的受体。     

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)外壳蛋白免疫多肽的研究

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRVsh)的外壳蛋白中含有4个甲硫氨酸残基,本文采用溴化氰裂解,并结合葡聚糖凝胶G-100柱层析、高压纸电泳及纸层析等方法,分离纯化了5个多肽片段,经~(125)I标记抗体对免疫多肽的鉴定,表明其中二段多肽与~(125)-IgG的结合能力接近完整病毒的水平,说明这二段多肽具有HRVsh的抗原专一性,决定HRVsh抗原性的抗原决定簇主要分布于这二个肽段中。 外壳蛋白的胰蛋白酶酶解肽谱及多肽氨基酸序列分析的结果,表明HRVsh和HRV标准株系间在氨基酸序列上有很大相似性,这就决定了两者密切的血清学亲缘关系。     

CS3抗原基因的表达及纤毛装配元件的研究

在肠毒素大肠杆菌(ETEC)的已知定居因子中,CS3是临床分离株中最常见的抗原之一。为了研究CS3纤毛装配的基本元件,绘制了CS3亚基结构基因和辅助蛋白编码区的限制酶谱。通过亚克隆的亚基基因和不同辅助蛋白基因之间的互补性表达结果,确定了CS3纤毛装配所需要的辅助蛋白的DNA功能片段。微细胞分析结果显示,CS3基因的有效表达和纤毛装配至少需要6条蛋白多肽,分子量分别为(×10~3)15、17、24、27、48和90。除了15×10~3/17×10~3的蛋白多肽为CS3亚基外,其余的蛋白多肽参与CS3亚基的转运及纤毛的装配。根据以上结果初步确定了上述相关基因的相对位置。     

还原性青刺果果实蛋白生物化学特性的研究

分离还原性青刺果果实蛋白,研究其生物化学特性。使用改良的铁氰化钾还原法评价青刺果果实蛋白的还原能力,酸溶醇沉法提取青刺果果实蛋白。基于青刺果果实蛋白PSP4最强的还原能力,通过SDS-PAGE、氨基酸自动分析、红外光谱分析、圆二色光谱分析、差示扫描量热分析,测定PSP4的氨基酸构成、纯度及分子大小、二级结构和变性温度等生物化学特性。结果显示75%乙醇沉淀青刺果果实蛋白PSP4还原力半数有效浓度为24.7 mg/m L,SDS-PAGE电泳呈现清晰的3条谱带,相对分子质量分别为11 KDa、14 KDa和34 KDa,热变性温度为69.83℃,还原性青刺果果实蛋白PSP4具有典型的酰胺Ⅰ(1690~1650 cm-1)、酰胺Ⅱ(1610~1370cm-1)、酰胺Ⅲ(1100~1030 cm-1)、酰胺A(3400~3230 cm-1)和酰胺B(3000~2800 cm-1)的吸收谱带,二级结构包含有α-螺旋(5.2%)、β-折叠(43.1%)和无规卷曲(27.6%)。研究表明,以PSP4为代表的还原性青刺果果实蛋白由多条肽链构成、β-折叠占优势、较高的热变性温度是其重要生物化学特性,具有作为生物功能物质的优良特征。     

LTB抗原表位PT8A与重组轮状病毒VP8~*亚单位疫苗融合后的免疫效应研究

为评价LTB(大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位)抗原表位PT8A与人轮状病毒(rotavirus,RV)VP8~*基因融合后对VP8~*亚单位疫苗(VP8)免疫效果的影响,将PT8A分别融合到VP8~*基因的C-端和N-端,然后构建重组表达质粒p ET32a-PT8A-VP8和p ET32a-VP8-PT8A。表达的重组蛋白PT8A-VP8和VP8-T8A纯化后分别经鼻腔免疫BALB/c免疫小鼠,收集血清,间接ELISA法检测血清抗体水平。经测序鉴定,重组质粒p ET32a-PT8A-VP8和p ET32a-VP8-PT8A构建成功。6×His-VP8-PT8A、6×His-PT8A-VP8融合蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为34 k D。重组VP8-PT8A和PT8A-VP8表达成功,融合蛋白主要以包涵体形式表达。间接ELISA测量血清Ig G和肺s Ig A的滴度,与VP8组相比较,VP8+LTB组和VP8-PT8A组OD值有显著性差异(p0.05),PT8A-VP8组OD值没有显著性差异(p0.05)。即PT8A融合在VP8基因的C端后对重组轮状病毒VP8~*亚单位疫苗有显著性免疫佐剂活性。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中C-myc和ras癌蛋白的表达及NK亚群的状况

作者检测了系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中 C-myc.Ki-ras 和Ha-ras 三种癌蛋白的表达和自然杀伤细胞(NK)亚群状况。结果显示,SLE 患者血液淋巴细胞和单核细胞中上述三种癌蛋白的阳性率均显著高亍健康对照组(P<0.001);而 SLE 组 NK 总数和CD16~+.CD16~+.57~+亚群细胞数则显著低于对照组(P<0.001)。作者结合文献讨论了 SLE 患者PBMC 中癌基因激活的可能机制和重要意义,以及与 NK 细胞和其亚群改变之间的相互关系。     

多肽的α螺旋结构对多肽与钙调蛋白亲合力的影响

本文设计并采用固相法合成了4种钙调蛋白可结合多肽,这些多肽分成两组,每一组中两个多肽的碱性和疏水性相近,但形成α螺旋结构的倾向(预测)不同。研究了这些多肽与钙调蛋白的相互作用,在Ca~(2+)存在下,这些多肽与丹磺酰钙调蛋白结合,使丹磺酰钙调蛋白的荧光光谱发生显著变化,测定了多肽与钙调蛋白所形成的复合物的解离常数。结果表明,预测形成α螺旋结构倾向较大的多肽与钙调蛋白的亲合力也较大。     

人N-ras癌基因细胞型特异DNA结合蛋白

本文利用Southwestern印迹技术发现人肿瘤HT1080细胞染色质蛋白中一组与N-ras基因结合的蛋白,分子量约为150,105,95,90KDa,而与Ha-ras基因结合的一组蛋白,分子量约为160,115,100,55KDa,其中150KDa蛋白是N-ras基因特异的DNA结合蛋白,具有细胞型特异性,在HT1080细胞中含量最多,T24细胞次之,而在人HeLa细胞,淋巴细胞、肠细胞以及未转化的NTH3T3细胞中未被发现。此种蛋白可能与N-ras基因在HT1080细胞内的激活有密切关系。     

吗啡及第二信使对鼠脑细胞膜蛋白质磷酸化的调节

 本文研究了几种蛋白激酶活化剂及吗啡对脑细胞膜蛋白质磷酸化的调节。cAMP刺激了一种68KDa蛋白质和几种60KDa相关的蛋白质的磷酸化作用,Ca~(++)刺激68KDa和50KDa蛋白质的磷酸化。μ吗啡受体的特异性兴奋剂D-脑啡肽(DAGO)增加68KDa蛋白质的磷酸化,而吗啡K受体的特异性兴奋剂,Bremazocyne抑制这一蛋白质的磷酸化。蛋白激酶c的特异性活化剂——磷脂酰丝氨酸(PS)和甘油二油酸酯(DO)不促进这一磷酸化。相反,却抑制cAMP、Ca~(++)、和DAGO所刺激的68KDa蛋白质的磷酸化。结果表明,在鼠脑细胞膜存在一种68KDa专一的蛋白激酶,其活性受吗啡及几种细胞内信使分子,如cAMP、Ca~(++)和DO的调节。     

裸子植物的生化系统学(二)——松科植物的种子蛋白多肽

本文用SDS线性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了松科Pinaceae 10属凡50种植物的种子蛋白多肽。松科植物种子都有含量较高的、分子量为45000道尔顿(简写为45K)的多肽。分子量大于45K的多肽种类很多,但含量都较低。为了定量地比较各分类群主要种子蛋白多肽,规定“多肽距离”为两分类群不同的多肽数除两分类群多肽总数的商。各属种间平均多肽距离和前文报道的酶谱距离有同样的趋势,证明松科分子进化速率的稳定性。除了油杉属和冷杉属比较接近外,各属间多肽差别很大,说明属间的间断性。种间多肽谱虽有不同程度的变异,但变异是连续的。不同属、不同亚属形态进化和分子进化的比较,表明两种进化在速率和机理上都是不同的。     

靶向肽位置影响融合蛋白与细胞结合活性

目的:探讨靶向多肽与标签蛋白(绿色荧光蛋白)的位置关系是否会影响融合蛋白与细胞之间的结合能力。方法:将获得的GE11和LyP1两种靶向多肽分别与增强型绿色荧光蛋白在不同位置融合表达,通过原核系统表达纯化,将纯化的蛋白加入血清饥饿的SMMC-7721肝癌细胞株培养液中,处理3h,通过荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的情况检查融合多肽与细胞的结合情况。结果:绿色荧光蛋白的羧基端和GE11、LyP1多肽分别融合表达,处理细胞后,融合蛋白显示与细胞有很强的结合能力;当GE11、LyP1在绿色荧光蛋白氨基端融合时,融合蛋白几乎不能与细胞结合。在此基础上,检测了多种靶向肽对多种细胞的靶向效应。结论:不合适的融合策略会降低,甚至消除靶向多肽的结合能力;融合大分子量蛋白也会改变靶向肽的靶向效应。因此,当使用靶向多肽携带基因进行研究时,其在融合蛋白中的位置应该非常谨慎。     

前列腺增生伴Ⅱ型糖尿病患者的尿流动力学分析

目的:探讨前列腺增生伴Ⅱ型糖尿病患者的尿流动力学改变,并对该类患者提出合理的治疗和处理。方法:选取从2010年9月~2013年9月在本院泌尿外科一病房行经尿道前列腺电切,术后病理诊断为前列腺增生术前行尿流动力学检查的患者349例,分为单纯前列腺增生组158例(对照组)及前列腺增生合并Ⅱ型糖尿病组191例(研究组),前列腺增生合并Ⅱ型糖尿病组又分为两个亚组,即空腹血糖≤6.1 mmol/L组(亚1组)96例及空腹血糖6.1 mmol/L组95例(亚2组)。比较各组患者尿流动力学各项检查结果。结果:1)、比较亚2组和对照组患者残余尿量、最大尿流率、最大尿流率时逼尿肌压、最大逼尿肌压及顺应性,P值均0.05。2)、亚1组和对照组患者残余尿量、最大尿流率、最大尿流率时逼尿肌压、最大逼尿肌压及顺应性,除亚1组病程5年的残余尿量、顺应性P值0.05外,其他均0.05。3)、亚1组和亚2组患者残余尿量、最大尿流率、最大尿流率时逼尿肌压、最大逼尿肌压及顺应性,P值均0.05。4)、亚1组和亚2组不稳定膀胱率明显高于对照组。结论:Ⅱ型糖尿病能加重前列腺增生患者膀胱功能障碍,及早控制血糖能减轻、延缓膀胱功能障碍。     

胆管癌组织中层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达及其临床意义

目的 探讨层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达与胆管癌临床病理学行为的关系。方法 应用S-P免疫组化法对52例人胆管癌组织中层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达水平进行研究。结果 层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的高表达与胆管癌淋巴结转移呈明显相关,层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体阳性肿瘤淋巴结转移率（83％,55％）明显高于层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体阴性肿瘤（15％,20％,P〈0．05）,且层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达与胆管癌组织学类型、分化程度亦存在明显相关（P〈0．05）。结论 层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达在胆管癌淋巴结转移中起协同作用。     

油桐尺蠖核型多角体病毒结构多肽的分析

本文采用不连续系统的垂直板SDS—PAGE对油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzura suppressaria Guenee Nuclear Polyhedrosis Virus简称BsNPV)的多角体蛋白、病毒粒子的结构多肽进行了分析。结果表明,经EDTA和热处理的多角体蛋白仅有一条主带,其分子量为31×10~3±1000d;病毒粒子至少有23种结构多肽,其分子量的范围在13—107×10~3d之间。用PAS染色测定多角体蛋白、病毒粒子中的糖蛋白,结果呈阴性反应。     

双酶法酶解豌豆蛋白制备高抗氧化多肽的研究

以水解度及DPPH自由基清除能力为指标优选出1398中性蛋白酶和胰蛋白酶分步酶解豌豆分离蛋白,所得豌豆蛋白水解产物(pea protein hydrolysate,PPH)中相对分子量小于2 KDa的多肽占77.07％,对DPPH的半清除浓度(IC50)为3.01 mg/mL;PPH经Sephadex G-25凝胶层析和两次RESOURCETM 3RPC反相层析纯化获得高抗氧化活性峰,经反相层析鉴定为层析纯,当浓度在0.2 mg/mL时,对DPPH的清除率达到62.03％,与同浓度下的谷胱甘肽对DPPH的清除率相近(66.82％).     

坦普大学准备转让血小板技术

越来越多的生物技术公司走上开发抗血凝剂的道路.其中,坦普大学(费城,宾夕法尼亚)正在加紧几种抗血凝剂蛋白的转让工作.在几项准备转让的专利中,有一系列新的蛋白,即血小板粘连多肽调节物(PMPA),这类蛋白可与血小板表面的糖蛋白Ib(GPIb)结合.通过与GPIb结合,上述多肽即可抑制血小板与内皮细胞表面结合的第一个步骤的发生.内皮细胞损伤后,发生凝集作用就是从这里开始的.