茜草内生菌的分离鉴定及其抗菌活性物质研究

对中药植物茜草(Rubia cordifoliaL)的内生菌进行了分离和抗菌活性筛选,获得一株具有广谱抗菌活性的内生细菌。该细菌对常见的3种人类病原菌和4种植物病原菌具有拮抗作用。传统分类学和基于16S rRNA基因的分子分类学证据表明,该内生细菌为一株新的枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilisRC4。B.subtilisRC4在综合马铃薯培养基(pH值5.0)中于28℃振荡培养60h,产生的代谢物对白色念珠菌的抗菌活性最强。抗菌活性物质在100℃受热20min,活性维持80%以上,且在pH值2.0~11.0范围内稳定。经硅胶柱层析和高效液相色谱分离,得到主要抗菌活性化合物,质谱分析表明其分子量约为288Da。     

拮抗菌抗菌谱及发酵液拮抗能力测定的新方法

目的:确定测定拮抗细菌枯草芽孢杆菌A的抗菌谱及发酵液拮抗能力的方法。方法:平板对峙法测定抗菌谱,三明治法、管碟法、滤纸片法和双层打孔法测定发酵液的拮抗能力。结果:用点接拮抗细菌单菌落的平板对峙法测得菌株A对玉米小斑病菌等10种病原真菌均有拮抗作用;用双层打孔法测定菌株A发酵液拮抗能力,发现在培养条件为温度32℃,溶氧量为300mL三角瓶培养基装量为30mL,接种量5%,初始pH值7.5时发酵液拮抗能力最强。结论:点接拮抗细菌单菌落的平板对峙法适合用来测定菌株A的抗菌谱,双层打孔法适合用来测定菌株A发酵液的拮抗能力。     

青枯雷尔氏菌拮抗菌黑曲霉xj的ARTP诱变选育

[目的]为了提高黑曲霉(Aspergillus niger xj)对青枯雷尔氏菌的拮抗活性.[方法]首先采用常压室温等离子体诱变技术对黑曲霉xj菌株进行诱变处理,然后以青枯雷尔氏菌作为指示菌,通过琼脂柱法和滤纸片法筛选正突变株,并对正突变株遗传稳定性进行研究,最后通过二倍稀释法测定其最小抑菌浓度.[结果] ARTP诱变...     

离子注入选育高效植物病原真菌拮抗菌JA

Bacillus subtitles JA能够对多种植物病原菌如小麦赤霉菌、西瓜枯萎病菌、黄瓜黑星、油菜菌核、小麦白粉等有良好的抑制效果,本文利用离子注入诱变筛选高效植物病原真菌拮抗菌并且对JA菌株的发酵特性作了进一步的研究,获得了两株高效拮抗菌。其发酵水平的抑菌圈直径从16.62mm提高到21.23mm,经传代实验表明,其遗传性较为稳定。     

水稻稻瘟病拮抗菌L1鉴定及抑菌特性的初步研究

本研究对水稻稻瘟病菌的拮抗菌L1形态、生理生化特性等进行测定, 结果发现其为杆状细胞、革兰氏阳性、菌落不规则有褶皱、好氧生长、颜色较深等, 初步鉴定为枯草芽孢杆菌; 拮抗菌L1培养5 d的发酵液抑菌活性最高, 抑菌率为74.57%; 拮抗菌L1对水稻稻瘟病菌的拮抗活性物质对温度不敏感; 拮抗菌L1的发酵液用硫酸铵梯度沉淀法提取粗蛋白, 在50%~60%硫酸铵饱和度下沉淀的粗蛋白质对水稻稻瘟病菌抑菌效果最好, 平均抑菌半径达0.51 cm。     

枯草芽孢杆菌活菌体外拮抗6种肠道致病菌的研究

对枯草芽孢杆菌BS 3株在体外对 6种常见肠道致病菌 (肠产毒性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、福氏志贺菌和宋内志贺菌 )的拮抗作用进行了研究。结果表明 ,枯草芽孢杆菌BS 3株对宋内志贺菌、肠致病性大肠杆菌及肠产毒性大肠杆菌拮抗作用较为明显。     

番茄青枯病拮抗菌的定向筛选及其抗病促生机制研究

[目的] 从抑病型番茄根际土壤中筛选青枯病的高效拮抗促生菌,阐明其防病促生机制。[方法] 以番茄青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）为靶病原菌,采用平板抑菌圈法,筛选拮抗菌;通过BOX-PCR指纹图谱鉴定菌株多样性,以平板透明圈法评价其产酶活性,并针对抑菌能力强、产酶种类多的拮抗菌开展16S rRNA基因系统发育分析;通过温室试验评价拮抗菌的防病促生能力,并在此基础上通过实时荧光定量PCR研究生防细菌对番茄青枯病的防病促生机制。[结果] 从番茄根际土壤分离获得29株细菌,其中15株对青枯菌具有拮抗功能,进一步通过BOX-PCR指纹图谱、酶活分析获得4株具有潜在防治番茄青枯病、促进生长的功能菌（B2、B5、B20、B23）,通过16S rRNA系统发育分析鉴定B2拮抗菌为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,B5和B20拮抗菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,B23拮抗菌为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;温室试验表明,B2、B5、B20、B23拮抗菌的抑病效果分别为35.59%、8.47%、32.20%、96.61%,并且均能显著增加番茄生物量和生理性状,如地上部鲜重、总叶绿素含量、地下部根尖数等。B2、B5、B23拮抗菌显著促进番茄株高和根长,B2、B20、B23拮抗菌显著增加茎粗;而B23拮抗菌显著增加根系分叉数;实时荧光定量分析表明,B2、B20、B23拮抗菌株可促进抗病相关功能基因PR1α、POD1的表达量,B2、B5、B23拮抗菌促进吲哚乙酸（IAA）信号通路应答关键基因ctd1的表达量,B2、B5、B20、B23拮抗菌均降低乙烯（ETH）信号通路应答关键基因ERF2的表达量。[结论] 本研究分离筛选获得4株对番茄青枯病具有显著防治效果以及促进番茄生长的PGPR菌株,可为定向筛选植物促生防病菌提供理论依据。     

枯草芽孢杆菌B-903菌株抗菌物质的研究

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-903菌株系从郑州苹果园中分离得到,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌有强抑制作用。试验结果表明,将B-903菌株摇床培养24小时,细菌数量以对数增长达最大值;培养41小时,抗菌物质开始检出,此时培养液pH值由6．5变为7．5,以后随细菌数量减少和pH值的回降,抗菌物质逐渐积累,于培养112小时达最高值。作者认为该物质是细菌衰亡过程中产生的代谢产物。培养过程中的供氧条件影响细菌数量的增长和抗菌物质积累。B-903抗菌物质为水溶性物质,常温下,酸、碱条件不破坏该物质活性,酸性环境中,该物质具热稳定性。     

拮抗枯草芽孢杆菌KC-5的分离鉴定及其发酵优化

为了筛选出对植物病原菌具有拮抗作用的生物防治细菌,采用平板对峙法从蔬菜根际土壤中分离获得一株对多种病原真菌具有抑制作用的枯草芽孢杆菌,并对抑制后的病原菌菌丝进行了观察,结果表明该菌株对尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、层出镰刀菌以及腐皮镰刀菌均具有抑菌活性。通过形态特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其发酵培养基进行了优化。     

魔芋内生拮抗细菌的分离及其抗菌物质特性研究

从魔芋的内生菌中筛选到能抑制魔芋软腐病病原菌生长、产芽胞的杆状细菌,16SrDNA序列分析表明该菌是一株枯草芽胞杆菌,命名为BSn5。BSn5的胞外蛋白提取液有抗菌活性,并具有对热不稳定,对蛋白酶K敏感,对胰蛋白酶不敏感的特性,SDS-PAGE检测显示该蛋白提取液仅由分子量为31.6kDa的蛋白质组成。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化该蛋白,纯化的蛋白能够抑制软腐病病原菌的生长,进一步表明该31.6kDa蛋白即为该菌的抗菌活性物质。该蛋白与目前所知的枯草芽胞杆菌产生的抗菌物质均不同,可能是一种新的抗菌蛋白。     

The Characterization of Antagonistic Bacterium A014 and Its Antibacterial Proteins

A strain of Bacillus spp. has been screened from thousands of bacteria isolated from rice paddy field. The strain can secrete large amount of antibacterial proteins and has a strong in hibiting activity against the pathogen of rice leaf blight disease. Eight species in 4 genera of plant bacterial pathogens were tested for the antibacterial spectrum with the antibacterial proteins and results indicate strong inhibiting the growth of 4 species bacteria of xanthomonads and pseudomonads. Large amount of antibacterial proteins have been extracted by (NH4)2SO4 precipitation from overnight culture of king’s B medium. Further experiments are underway to purify the antibacterial protein with chromatography and to clone the gene encoding the protein.     

富贵竹黑腐病拮抗菌H5的抑菌机制及相关特性研究

从湛江红树植物-红海榄筛选出1株对引起富贵竹病害黑曲霉病菌(Aspergillus niger)有良好抑制作用的菌株编号为H5, 初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。该菌株采用平板对峙、生长速率法及管碟法对黑曲霉均表现良好的抑制作用, 发酵原液对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别为91.9%和100%, 抑菌带内菌丝扭曲畸形、表面产生大量囊状突起。其无菌滤液对酸碱、热稳定性较好, 经55%硫酸铵沉淀后经121℃处理25 min仍能保持大部分活性, 初步推测该物质为一种耐热的蛋白。     

富贵竹黑腐病拮抗菌H5的抑菌机制及相关特性研究

从湛江红树植物-红海榄筛选出1株对引起富贵竹病害黑曲霉病菌(Aspergillus niger)有良好抑制作用的菌株编号为H5,初步鉴定为地衣芽孢杆(Bacillus licheniformis).该菌株采用平板对峙、生长速率法及菅碟法对黑曲霉均表现良好的抑制作用,发酵原液对茵丝生长和孢子萌发的抑制率分别为91.9%和100%,抑菌带内菌丝扭曲畸形、表面产生大量囊状突起.其无菌滤液对酸碱、热稳定性较好,经55%硫酸铵沉淀后经121℃处理25 min仍能保持大部分活性,初步推测该物质为一种耐热的蛋白.     

水稻稻瘟病拮抗菌L1鉴定及抑菌特性的初步研究

本研究对水稻稻瘟病菌的拮抗菌L1形态、生理生化特性等进行测定,结果发现其为杆状细胞、革兰氏阳性、菌落不规则有褶皱、好氧生长、颜色较深等,初步鉴定为枯草芽孢杆菌;拮抗菌L1培养5 d的发酵液抑菌活性最高,抑菌率为74.57%;拮抗菌L1对水稻稻瘟病菌的拮抗活性物质对温度不敏感;拮抗菌L1的发酵液用硫酸铵梯度沉淀法提取粗蛋白.在50%～60%硫酸铵饱和度下沉淀的粗蛋白质对水稻稻瘟病菌抑菌效果最好,平均抑菌半径达0.51 cm.     

甘草内生细菌的分离及拮抗菌株鉴定

从乌拉尔甘草健康植株的根茎叶中共分离到内生细菌98株,经初步鉴定芽孢杆菌属(Bacillus sp.)为优势种群,约占30%;从不同生长年份甘草的根、茎、叶组织中分离内生细菌种群密度从5.0×104cfu/g~2.9×107cfu/g鲜重不等。采用平板对峙方法筛选出6株对植物病原菌有明显体外拮抗活性的菌株,通过菌落、菌体形态观察、生理生化反应及16S rDNA序列分析,同时结合Biolog细菌自动鉴定系统验证,鉴定这6株拮抗菌分属萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Paenibacillus ehimensis。     

枯草芽孢杆菌B115优化培养及其对气单胞菌的抗菌效果的研究

采用正交实验设计确定了枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）B115的基础培养基成份为：胰蛋白胨1％,酵母膏0．25％,氯化钠0．5％;添加成份最优组合为（NH4）2SO4 0.1％,（K2HPO4＋KH2PO4）（1．4＋0．6）％和柠檬酸三钠0．1％;添加成分最优组合与基础培养基培养产量比较,表明添加K^＋、NH4^＋和柠檬酸三钠能极显著地促进B115的生长。研究了B115对致病性气单胞菌的抗菌效果,结果表明：B115对BSK-10和CL990920有明显抑、杀菌效果,对TL970424无抑菌效果。     

红树内生海洋细菌CIII-1发酵条件初步研究

摇瓶法测定结果表明,用7号培养基,初始pH 7.5,装液量1/10摇瓶体积,转速150 r/min,温度25℃下培养96 h,菌株分泌产生抗番茄青枯病细菌的物质最多,抑菌圈直径最大,为红树植物内生海洋细菌CIII-1菌株产抗植物青枯病菌物质的最佳培养条件。并发现该菌株产生的抗菌物质对西瓜枯萎病菌、香蕉枯萎病菌等植物病原真菌也有较强的拮抗作用。