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1.
本文报道用PNPase和RNase N_1相结合的方法合成了CpUpCpG>p。选择适当的反应条件,包括1.CpUpC∶GDP=1∶5(克分子比),2.RNase N_1:PNPase=4∶1(活力单位比),3.反应pH为7.6,4.37°反应10小时,CpUpCp@>p产率可达64%。另有18%开环产物CpUpCpGp。后者又可用氯甲酸乙酯进行环化得到60%产率的CpUpCpG>p。 相似文献
2.
本文报道了脑啡肽基因下链二十六核苷酸中九核苷酸d-GATCCTAGA的合成。合成系采用改良的三酯法,即先合成d-_(Dmt)G_?~(ib)A_?~(Bs)T_(?OH)、d-_(Dmt)C_?~(An)C_?~(An)T_(?OH)和d-_(Dmt)A_?~(Bs)G_?~(ib)A_(OBs)~(Bz)三个片段,然后由d-_(Dmt)A_?(Bs)G_?~(ib)A_(OBz)~(Bz)脱去5′-Dmt基后依次同d-_(Dmt)C_?~(An)C_?~(An)T_(?OH)和d-_(Dmt)G_?~(ib)A_?~(Bz)T_(?OH)向5′端延伸缩合得到产物d-_(Dmt)G_?~(ib)A_?~BsT_?C_?~(An)C_?~(An)T_?A_?~(Bs)G_?~(ib)A_((OBs)_o)~(Bs) d-_(Dmt)G_?~(ib)A_?~(Bs)T_(?OH)和d-_(Dmt)C_?~(An)C_?~(An)T_(?OH)是通过d-_(Dmt)G_?~(ib)A_(?OH)~(Bs)和d-_(Dmt)C_?~(An)C_(?OH)~(An)分别同过量的d-T缩合,然后再用对氯苯磷酰双三唑对产物的3′-OH进行磷酰化得到。d-_(Dmt)A_?~(Bs)G_?~(ib)A_(OBz)~(Bs)则是由d-_(Dmt)A_?~(Bz)G_(?OH)~(ib)同d-A_(OBs)~(Bs)反应得到。在所有的缩合反应中,都采用2,4,6-三甲基苯磺酰硝基咪唑为缩合剂,缩合产物都以硅胶短往层析分离纯化。除保护的九核苷酸未进行硅胶柱层析纯化之外,各中间片段经硅胶柱层析纯化后的收率都在75%以上。合成的全保护九核苷酸用浓氨水和80%醋酸相继脱去全部保护基后,以DEAE-葡聚糖凝胶A-25柱层析(含7M尿素)分离纯化,经去盐后得到d-GATCCTAGA,收率31.7%。产物的5′-OH用~(32)P标记后,同系层析均一,蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后,作电泳-同系层析双向图谱,证明核苷酸排列顺序正确。 相似文献
3.
用化学合成或化学与酶促合成相结合的方法均能制备得到UpCpCpA(图1)。化学合成包括“2+2”和“1+3”两条路线。参考Mackey和Gilham方法,在PNPase催化下,引物UpCpC与2’(3’)-O-甲氧乙基ADP反应进行单一加成可产生30%的UpCpCpA。为了获得纯的产品,采用了二次柱层析法(图2)。文中讨论了PNPase连接的转核苷酸作用问题。 相似文献
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5.
本文报道了脑啡肽基因下链26核苷酸中八核苷酸片段d-GGAAACCA(1~17)的合成。合成系采用改良的三酯法,先合成(DMT)ibG?ibG?bzA(DMT)bzA?bzA和(DMT)anC?anC(?2代表),再用对氯苯基磷酸二氯在1,2,4-三氮唑存在下磷酰化得到(DMT)ibG?ibG?bzA?OH、(DMT)bzA?bzA?OH和(DMT)anC?anC?OH,然后由bzAobz开始,依次同(DMT)anC?anC?OH、(DMT)bzA?bzA?OH和(DMT)ibG?ibG?bzA?OH缩合得到(DMT)ibG?ibG?bzA?bzA?bzA?anC?anC?bzAobz。在所有的缩合反应中,缩合剂均采用2,4,6-三甲基本磺酰硝基咪唑。所得的全保护八核苷酸用浓氨水和80%醋酸脱去保护基后再经DEAE-葡聚糖凝胶A-25(7M尿素)柱层析分离纯化并去盐后,即得到d-GGAAACCA。产物经5′-~(32)P标记后,同系层析均一,蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后的电泳-同系层析双向图谱能够得到预期的核苷酸排列顺序。 相似文献
6.
合成基因组学:设计与合成的艺术 总被引:1,自引:0,他引:1
随着基因组相关技术(测序、编辑、合成等)和知识(功能基因组学)的日益成熟,合成基因组学在本世纪迎得了发展的契机。病毒、原核生物的全基因组相继被化学合成并支持生命的存活,第1个真核生物合成基因组计划已经完成过半,人类基因组编写计划提上日程。在基因组合成的实践过程中,研究者们不断探索对基因组进行重编和设计所应遵循的规则,提高从头合成、组装和替换基因组的技术手段。合成基因组在工业、环境、健康和基础研究领域有着广阔的应用前景,同时也带来了相应的伦理问题。结合在Sc2.0计划中的基因组合成研究和近期合成基因组学所取得的重大进展,本文综述了基因组设计和合成相关的科学、技术和伦理内容,并探讨了未来发展所面对的挑战。作为合成生物学最重要的领域之一,合成基因组学方兴未艾。 相似文献
7.
本文报道了脑啡肽基因下链26核苷酸中八核苷酸片段d-GGAAACCA(10~17)的合成。合成系采用改良的三酯法,先合成和,再用对氯苯基磷酰二氯在1,2,4-三氮唑存在下磷酰化得到和,然后由bzAobz开始,依次同和缩合得到。在所有的缩合反应中,缩合剂均采用2,4,6-三甲基苯磺酰硝基咪唑。所得的全保护八核苷酸用浓氨水和80%醋酸脱去保护基后再经DEAE-葡聚糖凝胶A-25(7M尿素)柱层析分离纯化并去盐后,即得到d-GGAAACCA。产物经5'-~(32)P标记后,同系层析均一,蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后的电泳-同系层析双向图谱能够得到预期的核苷酸排列顺序。 相似文献
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《生物化学与生物物理进展》1978,(2)
本文报道用PNPase和RNase N_1相结合的方法合成了CpUpCpG>p。选择适当的反应条件,包括1.CpUpC:GDP=1:5(克分子比),2.RNase N_1:PNPase=4:1(活力单位比),3.反应pH为7.6,4.37°反应10小时,CpUpCpG>p产率可达64%。另有18%开环产物CpUpCpGp。后者又可用氯甲酸乙酯进行环化得到60%产率的CpUpCpG>p。 相似文献
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本文报道了脑啡肽基因下链二十六核苷酸中九核苷酸d-GATCCTAGA的合成。合成系采用改良的三酯法,即先合成和三个片段,然后由脱去5'-Dmt基后依次同和向5'端延伸缩合得到产物和是通过和分别同过量的d-T缩合,然后再用对氯苯磷酰双三唑对产物的3'-OH进行磷酰化得到。则是由同反应得到。在所有的缩合反应中,都采用2,4,6-三甲基苯磺酰硝基咪唑为缩合剂,缩合产物都以硅胶短柱层析分离纯化。除保护的九核苷酸未进行硅胶柱层析纯化之外,各中间片段经硅胶柱层析纯化后的收率都在75%以上。合成的全保护九核苷酸用浓氨水和80%醋酸相继脱去全部保护基后,以DEAE-葡聚糖凝胶A-25柱层析(含7M尿素)分离纯化,经去盐后得到d-GATCCTAGA,收率31.7%。产物的5'-OH用~(32)P标记后,同系层析均一,蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后,作电泳-同系层析双向图谱,证明核苷酸排列顺序正确。 相似文献
10.
《生物化学与生物物理进展》1978,(2)
用化学合成或化学与酶促合成相结合的方法均能制备得到UpCpCpA(图1)。化学合成包括“2 2”和“1 3”两条路线。参考Mackey和Gilham方法,在PNPase催化下,引物UpCpC与2′(3′)-O-甲氧乙基ADP反应进行单一加成可产生30%的UpCpCpA。为了获得纯的产品,采用了二次柱层析法(图2)。文中讨论了PNPase连接的转核苷酸作用问题。 相似文献
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<正> 苯丙氨酸属必需氨基酸之列,近年来,作为合成甜味剂“天冬精”的原料,其要求量急剧增加。日本相模中央化学研究所最近研制成功一种苯丙氨酸合成的新方法,该法首先通过苄基氯的双羰基化,合成苯丙氨酸。据报导,新方法最终收率可达80—85%,而且不需要以往那种高压反应,成本亦低。新合成技术受到有关产业界的关注。 相似文献
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袁佩娜 《微生物学免疫学进展》1986,(3)
<正>疫苗预防疾病是免疫学最成功地实际应用之一。但在实践中还存在许多问题和困难。有的疫苗由灭活病原体制备,常常免疫效果不理想;有的疫苗用减毒的活病原体制备,不易生产和保存,有时会出现毒力返祖影响安全性。目前一些经常使用的疫苗所提供的保护作用,仅限于特异的一种细菌或一种病毒的感染,很少是多价制剂。此外,有 相似文献
16.
本文合成了辣椒素类物质-4-O-β-D-葡萄糖苷类化合物(3).首先,以BF3·OEt2为催化剂,用五乙酰葡萄糖酯与辣椒素类物质反应得到中间体辣椒素类物质4-O-β-D-四乙酰葡萄糖苷类化合物(2),以硅胶柱色谱纯化收率为22%,LC-MS分析表明含有降二氢辣椒素四乙酰葡萄糖苷(2a,M 623)、辣椒素四乙酰葡萄糖苷(2b,M635)、二氢辣椒素四乙酰葡萄糖苷(2c,M 637)、高二氢辣椒素四乙酰葡萄糖苷(2d,M 651);中间体2易水解为目标化合物3,收率63%.1H NMR分析表明化合物2及3均为β构型. 相似文献
17.
《氨基酸和生物资源》1986,(1)
<正> 苯丙氨酸属必需氨基酸之列,近年来,作为合成甜味剂“天冬精”的原料,其要求量急剧增加。日本相模中央化学研究所最近研制成功一种苯丙氨酸合成的新方法,该法首先通过苄基氯的双羰基化,合成苯丙氨酸。据报导,新方法最终收率可达80—85%,而且不需要以往那种高压反应,成本亦低。新合成技术受到有关产业界的关注。 相似文献
18.
脂酰-酰基载体蛋白(fatty acyl-acyl carrier protein, acyl-ACP)是多种生物合成途径中的酰基供体。因供给限制,体外研究常用类似物acyl-CoA替代,而CoA部分和ACP有较大差异,限制了相关酶对底物识别的认识。因此稳定获得大量acyl-ACP是体外研究相关酶的催化机制及其代谢途径的关键。研究以holo-ACP和C4~C18链长脂肪酸为底物,在哈氏弧菌acyl-ACP合成酶(Vibrio harveyi acyl-ACP synthetase, VhAasS)催化下合成不同碳链长度的acyl-ACP;通过高效液相色谱(HPLC)方法,确定不同碳链长度acyl-ACP的合成产率。结果表明:碳链为C4~C14的acyl-ACP产率均高于90.0%,16:0-ACP产率为85.9%,18:1-ACP产率仅为25.7%。通过加入Li +优化反应体系,16:0-ACP、18:1-ACP的产率达90.0%。进一步优化扩大反应体系可稳定获得20mg以上acyl-ACP;最后,把合成的acyl-ACP应用到甘油-3-磷酸酰基转移酶催化的反应体系中。不同链长acyl-ACP的规模化合成研究,为体外研究相关酶的催化机制提供重要基础。 相似文献
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左旋多巴的酶法合成 总被引:2,自引:0,他引:2
左旋多巴(3,4-dihydrox-ylphenylalanine、L-DOPA)不但是治疗常见老年病——帕金森病的主要药物,它还有其它许多医疗用途。随着我国人们医疗保健水平的提高和人口老龄化程度的加剧,左旋多巴的需求量也将增加。酶法合成特别是微生物酶法合成左旋多巴以其良好的经济性受到了广泛重视。主旋多巴属于手性药物,其对映作右旋多巴可引起毒性反应[1],故医学上需控制它的旋光度,这就会给化学合成法生产左旋多巴带来麻烦。1990年,西北工业大学的孙晓莉[2]用可避免DL拆旋操作的不对称合成法合成主旋多巴,但工艺非常复杂。左旋多巴也可… 相似文献