苦豆碱对小鼠的急性毒性研究

本文拟探讨苦豆碱对小鼠的急性毒性,并明确其半数致死量(LD_(50))以及毒性靶器官。采用腹腔注射给药方式,给予600.00、480.00、384.00、307.20、245.76 mg/kg的苦豆碱,实验后观察7 d,记录体重变化及自主活动情况,检测苦豆碱对小鼠的急性毒性作用,用加权回归几率法(Bliss)计算LD_(50),并对死亡小鼠进行主要脏器的病理学检查。结果显示,苦豆碱的小鼠LD_(50)为395.62 mg/kg,95%可信限为305.23~535.04 mg/kg,LD_5为143.00 mg/kg,LD95为1094.47 mg/kg。7 d内小鼠体重有增长趋势。病理结果显示,苦豆碱对小鼠的主要毒性靶器官为肝脏。     

四种不同方法注射眼镜蛇蛇毒对小鼠LD_(50)的影响分析

目的比较小鼠经不同途径注射眼镜蛇蛇毒的半数致死量(LD_(50)),并观察中毒症状。方法将小鼠分别经四种途径注射眼镜蛇毒冻干粉溶液,并根据各组小鼠死亡情况,运用Bliss软件测定LD_(50)估计值、置信区间等。观察各组小鼠生物学行为及死亡情况,并对死亡小鼠和存活小鼠进行解剖分析。结果小鼠经静脉、腹腔、肌肉和皮下注射眼镜蛇蛇毒的LD_(50)分别为0.691 mg/kg、0.741 mg/kg、0.803 mg/kg和0.915 mg/kg,95%CI分别为0.634～0.742 mg/kg、0.676～0.792 mg/kg、0.754～0.856 mg/kg和0.851～1.05 mg/kg。各组小鼠中毒症状明显,表现为呼吸困难、精神萎靡、眼球昏暗、眼角有分泌物、身体出现扭体抽搐等反应,均在2～9 h内死亡。结论小鼠经静脉注射眼镜蛇毒溶液中毒的毒性剂量最小,皮下注射眼镜蛇毒溶液中毒的毒性剂量最大。小鼠经四种不同途径注射眼镜蛇蛇毒的LD_(50)的值按从大到小的排序为皮下注射,肌肉注射,腹腔注射,静脉注射。     

培养基及培养条件对冬虫夏草菌固体发酵产分生孢子的影响

为获得冬虫夏草菌固体发酵产分生孢子的最优工艺,以野生分离的冬虫夏草菌为材料,对其固体发酵产分生孢子的培养基及培养条件进行了研究。试验结果表明：泥炭土为最佳基础培养基,该培养基中冬虫夏草菌气生菌丝生长一般,但产分生孢子最多,可达4.2×10³个/g;泥炭土培养基中添加0.1‰ IAA（吲哚乙酸）、0.1‰ IBA（吲哚丁酸）和0.1‰ NAA（萘乙酸）能促进冬虫夏草菌气生菌丝的生长和分生孢子的产生,其分生孢子达8.1×10³个/g;该基础培养基中,冬虫夏草菌于18℃培养30d后,在10℃、相对湿度45%、蓝光照射进行诱导,分生孢子可达1.0×10⁴个/g。本研究建立了一种大量获取冬虫夏草菌分生孢子的方法,为冬虫夏草繁育奠定了基础。     

N-CWS灌胃对小鼠移植性肿瘤及免疫功能的影响

为了考察红色诺卡氏菌细胞壁骨架(Nocardia rubra cell wall skeleton,N-CWS)灌胃给药对小鼠的体内抑瘤效应及其免疫调节作用,采用小鼠肉瘤S_(180)的移植性肿瘤模型,检测N-CWS灌胃给药的抑瘤活性;同时观察N-CWS体内细胞毒作用和对正常小鼠的毒性、免疫器官重量、巨噬细胞(MΦ)吞噬功能及脾淋巴细胞转化的影响.结果显示,小鼠灌服N-CWS的LD_(50)＞1.2 g/kg;N-CWS 200、400、800 mg/kg剂量灌胃小鼠对S_(180)有明显的抑制作用,其抑瘤率分别为63.33%、71.11%、64.88%;与对照组比较,N-CWS可增加免疫器官重量和提升外周血白细胞数量、能明显提高小鼠MΦ的吞噬活性及显著提高淋巴细胞转化率(P＜0.05),同时N-CWS激活了的MΦ对肿瘤细胞的细胞毒效应亦明显增强(P＜0.05).因此N-CWS适用于口服给药,对小鼠移植性肿瘤有明显的抑制作用,其抗肿瘤作用可能与增强机体免疫功能有关.     

九里香蛋白多糖的抗生育及其它生物活性

九里香蛋白多糖有明显的抗生育作用,小鼠腹腔注射剂量2.08mg/kg,抗早孕率达72—83％。能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,吞噬指数和吞噬百分数分别为对照组的5.42和1.70倍。能增加致敏动物血清中溶血素含量,小鼠HC_(50)为对照组的5.1倍。对大鼠新鲜红细胞有明显的促进凝集作用,凝集率为31.1％。能对抗环磷酰胺引起的白细胞减少,对照组和九里香蛋白多糖组白细胞下降率分别为42.7％和26.7％。对二甲苯所致小鼠耳部炎症也有对抗作用,抑制率达52％。有抗凝血作用,家兔静脉注射18mg/kg,凝血时间延长1.76分钟。毒性较低,小鼠腹腔注射LD_(50)为462±56.7mg/kg。     

马氏钳蝎的哺乳动物神经毒素的分离和纯化

用CM-Sephadex C-50柱层析法将马氏钳蝎(Buthus martensi Karsch)粗毒分成13个蛋白组分。其中XI峰对哺乳动物(小鼠)、甲壳动物(潮虫科鼠妇属甲壳虫)和昆虫(丽蝇幼虫)都有较强毒性;XII峰对前两类动物有较强毒性;VIII峰对后两类动物有较强毒性。XI峰通过DEAE-Sephadex A-50柱层析被分成XI-1和XI-2两个组分。XI-1峰与XII峰再分别经过Sephadex G-50柱层析被纯化后,经聚丙烯酰胺碱性不连续圆盘电泳和等电聚焦圆盘电泳鉴定均为单一区带。它们都是神经毒素,分别被命名为马氏钳蝎神经毒素I和II。经小鼠腹腔注射,测定粗毒、神经毒素I和II的LD_(50)分别为2.4mg/kg、0.48mg/kg和0.63mg/kg。毒素I有较好的耐热性。工作中还测定了神经毒素I和II的氨基酸组成,它们分别由67和63个氨基酸残基组成,最小分子量分别为7567和7181。     

拟胆碱药物对金环蛇、银环蛇毒中毒小鼠的解毒活性研究

目的测定拟胆碱药物对金环蛇、银环蛇毒中毒小鼠是否具有解毒活性。方法于昆明小鼠腹腔注射800μg/kg金环蛇毒(1.8×LD_(50))或50μg/kg银环蛇毒(1.4×LD_(50)),2 h后于腹腔注射生理盐水或不同剂量拟胆碱药物,观察24 h内对照组及拟胆碱药物组的小鼠死亡时间及死亡率,统计分析拟胆碱药物组是否具有解毒活性。结果注射金环蛇毒后,生理盐水组小鼠的死亡时间为[(3.64±1.03)～(5.08±1.27)]h,死亡率为70.0%～100%。溴吡斯的明组(62.5、125、250μg/kg),甲硫酸-新斯的明组(62.5、125、250μg/kg),毒扁豆碱组(62.5、125、250μg/kg)及石杉碱甲组(62.5、125、250μg/kg)的小鼠死亡时间分别为[(4.45±0.94)～(6.48±3.27]h、[(2.79±0.74)～(4.17±1.44)]h、[(3.74±2.21)～(5.62±2.47)]h及[(4.43±2.55)～(4.62±1.49]h;醋甲胆碱组(5、20、80μg/kg),氯贝胆碱组(5、20、80μg/kg),他克林组(250、500、1000、2000μg/kg),加兰他敏组(125、250、500、1000、2000μg/kg)及多奈哌齐组(500、1000、2000μg/kg)的小鼠死亡时间分别为[(4.59±1.90)～(5.30±2.18)]h、[(3.25±0.75)～(4.53±1.72)]h、[(5.09±2.57)～(5.66±2.63)]h、[(3.48±0.80)～(5.30±2.51)]h及[(3.25±1.47)～(4.67±1.51)]h,各给药组的死亡时间及死亡率(80%～100%)与对照组比较无明显差异(P0.05)。与对照组相比,银环蛇毒各给药组小鼠的死亡时间及死亡率亦无明显差异性(P0.05)。结论拟胆碱药物不能显著延长金环蛇、银环蛇毒中毒小鼠的死亡时间或提高生存率,无显著解毒活性。     

马氏钳蝎的哺乳动物神经毒素的分离和纯化

用CM-Sephadex C-50柱层析法将马氏钳蝎(Buthus martensi Karsch)粗毒分成13个蛋白组分。其中Ⅺ峰对哺乳动物(小鼠)、甲壳动物(潮虫科鼠妇属甲壳虫)和昆虫(丽蝇幼虫)都有较强毒性;Ⅻ峰对前两类动物有较强毒性;Ⅷ峰对后两类动物有较强毒性。Ⅺ峰通过DEAE-Sephadex A-50柱层析被分成Ⅺ-1和Ⅺ-2两个组分。Ⅺ-1峰与Ⅻ峰再分别经过Sephadex G-50柱层析被纯化后,经聚丙烯酰胺碱性不连续圆盘电泳和等电聚焦圆盘电泳鉴定均为单一区带。它们都是神经毒素,分别被命名为马氏钳蝎神经毒素Ⅰ和Ⅱ。经小鼠腹腔注射,测定粗毒、神经毒素Ⅰ和Ⅱ的LD_(60)分别为2.4mg/kg、0.48 mg/kg和0.63mg/kg。毒素Ⅰ有较好的耐热性。工作中还测定了神经毒素Ⅰ和Ⅱ的氨基酸组成,它们分别由67和63个氨基酸残基组成,最小分子量分别为7567和7181。     

健康人皮肤菌群分离株的动物实验研究

我们对已驯化和鉴定的表皮葡萄球菌F_(65)株,疮疤丙酸杆菌A_(14-1)株,干酪乳干菌ad_3株,青春双歧杆菌Bf_1株和婴儿双歧杆菌Bf_2株,进行了动物实验研究,急性皮肤毒性试验和慢性皮肤刺激试验,结果表明:它们对受试动物的皮肤无毒性和无刺激性,使用SPF大鼠重复皮肤刺激试验,结果同样。我们还进行了兔角膜刺激试验和局部封闭涂抹试验,结果表明它们既无刺激性,也无致敏性,这些菌株的鼠尾静脉注射毒性试验结果如下:F_(65)株和A_(14-1)株LD_(50)为6亿,ad_3和Bf_1,Bf_2 LD_(50)都大于6亿。鼠腹腔注射毒性试验结果,F_(65)菌株LD_(50)为24亿,A_(14-1)株LD_(50)为3亿,ad_3,Bf_1,Bf_2株LD_(50)都大于30亿,急性经口毒性试验证明它们都属于口服无毒株,使用SPF小鼠重复急性经口毒性试验,结果相同。实验表明,它们是安全,无毒性,无刺激性,无致敏性菌株。     

一株白腐菌的食用安全性初步评价

本研究选取了一株白腐菌模式菌株进行了小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验以及小鼠精子畸形试验,以分析该白腐菌的食用安全性,为进一步应用白腐菌开发功能性食品提供数据支持。结果显示,小鼠经灌胃白腐菌,其LD50为6.76 g/kg(以白腐菌菌丝干重计)。微核试验和精子畸形试验结果均为阴性(P0.05)。试验结果表明,本次实验条件下,白腐菌对小鼠表现出一定的急性毒性,但未见遗传毒性,由此推断,在一定剂量范围内使用白腐菌作为食用材料是相对安全的,安全的剂量范围需要进一步扩大浓度梯度来确定。     

虫生真菌蝉拟青霉的研究

观察了蝉拟青霉的无性世代,在24℃下载片培养结果,分生孢子经8hr萌发,24hr普遍形成菌丝,36hr出现产孢结构和产生次代分生孢子。该菌生长合适温度24—26℃,分生孢子萌芽要求相对湿度在90%以上。pH4—12范围均见生长,但以5—6为佳。对10种碳源和9种无机氮源利用检测结果,用葡萄糖作碳源孢子产量高,用果糖作碳源菌丝体产量高。不利用菊糖、L-山梨糖、L-鼠李糖。对KNO_3利用佳,但不能利用NaNO_2,和硫脲。该菌能较强抗紫外辐射。     

黑胶粉虱虫生菌的研究

扁座壳孢(Aschersonia placenta Berk.et Br.)是黑胶粉虱病原真菌,在寄主初龄幼虫期使用孢子悬浮液喷雾,个体容易感病,而且致死力较强。该菌最适生长温度24—26℃,暴发性流行季节气候条件多阴雨,相对湿度在85％以上。病原能在一般培养基上生长繁殖。在自然界以感病致死虫尸为营养载体,粘附在叶面,不断形成分生孢子,产生再次侵染,对控制害虫虫口增长作用显著,是综合防治中不可忽视的生物因素。     

芹菜斑枯病菌生物学特性研究

以沈阳地区芹菜斑枯病菌的纯培养菌株为试材,通过对菌丝生长、孢子萌发的营养及环境条件的多因子试验,明确了芹菜斑枯病菌菌丝生长以在CDAMS—VI培养基上最好,其次是CSA、CCSA和PDA,菌丝生长及产孢对碳源、氮源种类有明显的选择性。菌丝生长的最适pH值为4～5,最适温度为21℃,致死温度为39℃（处理40min）,光照明显抑制菌丝生长。病菌分生孢子在水和芹菜汁中不能萌发,在水琼脂上萌发最好;孢子萌发的适宜pH值为4．6～6．6,适温为17—25℃,致死温度为42℃（处理20min）,RH100％最适宜孢子萌发。光照和变温处理可促进分生孢子器的形成,病菌在PDA上从孢子萌发到分生孢子器形成并释放出分生孢子需要16～18d。     

马铃薯干腐病菌硫色镰孢的生物学特性

从碳源、氮源、酸碱度及生长温度等方面对引起马铃薯干腐病的硫色镰孢Fusarium sulphureum的生物学特性进行了研究。结果表明,该病原菌在不同发育阶段对营养和环境条件的要求存在差异。在固体培养基上,菌落生长最佳碳源为葡萄糖、麦芽糖,最佳氮源为蛋白胨,pH8?为最佳;在液体培养基中,菌丝体生长以麦芽糖为最佳碳源,以硝酸钠为最佳氮源,pH6?为最佳;在分生孢子萌发阶段,在以羧甲基纤维素钠、蛋白胨和谷氨酸为碳、氮源的营养液中,分生孢子萌发率最高,最适pH 6–8。该病菌最适生长温度为25℃,分生孢子致死     

温度与光照对安徽虫瘟霉产孢格局的影响*

在不同温度（10～30℃）与光照（连续光照和连续黑暗）组合条件下进行了安徽虫瘟霉（zoophthoraanhuiensis）离体产孢格局的研究。结果表明,适于安徽虫瘟霉产孢的温度为10～20℃,但以15℃最适,不仅产孢快和产孢量大,而且不受光照的影响。在25℃下虽能产孢,但产孢量大幅减少,30℃下则不产孢,25℃可能是安徽虫瘟霉产孢的高温极限。全光照各温度处理的产孢量总是比全黑暗相应温度处理的产孢量高,说明光照对产孢具有刺激作用。在10℃和全光照的组合中,累计产孢量最高且持续产孢时间最长,而相同温度与全黑暗处理的产孢量却很低,显示光照在偏低温度下是影响安徽虫瘟霉产孢的关键因素。概而言之,光照主要影响安徽虫瘟霉的产孢量,而温度主要影响其产孢速率或进程。     

冬虫夏草菌无性阶段的分离和鉴定

分离工作在四川康定及北京进行。方法是将康定收集的14批新鲜冬虫夏草,经整体灭菌后,分别割取子座、柄和虫体三部,然后将各部再切割成绿豆大小样的接种体,置于含1％胨的PDA上,在20℃温箱中让其生长;也少量地进行了子囊孢子分离,结果获得90％以上是同一种分生孢子阶段真菌的培养物。而且对该培养物的鉴定表明,是被毛孢属(Hirsutella)一新种——中国被毛孢(Hirsutella sinensis sp.nov.)。并根据这些多批次且大数量接种体(1000个以上)、多途径且重复持续分离,连同子囊孢子分离以及1988年康定点上再次分离的相互验证,皆得到同一种真菌——中国被毛孢这一事实,我们初步结论:中国被毛孢是冬虫夏草菌[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]的无性阶段。     

虫生真菌双生座壳孢的研究

双生座壳孢(Aschersonia duplex Berk.)系日本卷毛蚧的病原真菌。此菌在人工培养基和自然基物上生长好,并能产生大量分生孢子。对 C 源中的蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖;N 源中的蛋白胨,天冬素、L-酪氨酸、KNO_3利用好。生长适温22—26℃。病原流行季节相对湿度在80％以上。田间接种,对寄主致病性强,有应用潜力。     

温、光、盐对硅藻STR01生长、总脂、脂肪酸的影响

为了优化新分离STR01的生态培养条件, 采用单因子试验和正交试验研究了不同温度、光照强度、盐度和温、光、盐三因素三水平对该藻的生长、总脂和脂肪酸组成影响。结果表明: 温、光、盐对STR01的生长、总脂和脂肪酸组成影响显著(P<0.05)。生长的适宜温度为15—35℃, 最适25—30℃(K值达0.679—0.682), 总脂含量积累的最适温度是25℃(总脂可达17.23%), 温度20℃时有利于该藻PUFA的积累, 可达34.23%。STR01生长的适宜光照强度为40—120 μmol/(m2·s), 最适光强为60 μmol/(m2·s), 光照强度40 μmol/(m2·s)有利于该藻的PUFA积累, 可达34.29%。STR01生长的适宜盐度为10—35, 最适盐度25, 盐度25时PUFA含量较高(43.42%)。正交试验结果表明温度对STR01的平均相对生长速率和总脂含量影响显著, 生长的最优组合: 温度30℃、光照强度60 μmol/(m2·s)、盐度25, 该组合下的生长速率达0.756; 总脂含量积累的最优组合: 温度30℃、光照强度60 μmol/(m2·s)、盐度20, 该组合下的总脂含量为20.00%。PUFA的最优组合: 温度25℃、光照强度60 μmol/(m2·s)、盐度20, 该组合下PUFA的含量为35.37%。综上所述: 该藻生长迅速, 总脂含量较高, PUFA丰富, 是一种可开发利用的耐高温浮游硅藻。     

辣椒炭疽病菌毒素

辣椒炭疽病菌(辣椒刺盘孢Colletotrichum capsici)在25—28℃的Czapek-Dox培养液中振荡培养时分泌出毒素,这种毒素能引起辣椒叶片形成坏死斑,类似于病原菌侵染形成的症状。辣椒叶煎汁培养液和Czapek-Dox培养液适于C.capsici的生长和产毒,生长适宜温度和范围分别为25℃和pH6—7,在25—28℃,pH6—7的条件下培养滤液毒性最强;光线和通气条件可促进C.capsici的生长和产毒;培养14天的培养滤液毒性最强。培养滤液经丙酮沉淀及离子交换树脂柱和Sephadex G-50柱层析将毒素纯化。实验结果表明该毒素为多聚糖类物质。生物检测结果表明:培养滤液和C.capsici毒素溶液能抑制辣椒、绿豆、豌豆、豇豆种子胚根生长;并能使辣椒幼苗发生萎蔫,这一作用与辣椒品种抗性有关。     

芸苔链格孢菌丝生长温度的研究

通过对芸苔链格孢[Alternaria brassicae(Berk.)Sacc.]17个单孢系菌丝在PDA培养基上生长温度的研究,结果表明各菌系在相同的温度下,菌丝生长的速度存在着明显的差异。经新复极差分析,其速度可分为三个等级。其间最高与最低可相差4.7倍。对该菌菌丝最适生长温度的研究表明,17个菌系的平均最适温度为25℃。但各菌株间有着明显的差异。作者根据其最适温度的高低及其对温度的敏感性,将这17个单孢系划分为6个温度型。即:不敏感低温型、敏感亚低温型、不敏感亚低温型、敏感中温型、不敏感中温型及不敏感亚高温型等。病菌温度型的划分可作为使用该类病菌进行抗病筛选时确定最适温度的参考。