三和化学研究所探讨重组胃动素的事业化

三和化学研究所宣布,他们用基因操作技术确立了工业化制造消化道肽——胃动素(motilin)的技术,并且在探讨实业化。胃动素是有22个氨基酸的脑消化道肽。由十二指肠和空肠、垂体分泌的。在空腹时有促进肠道收缩的作用。因此,期待着它对老年人和体弱的患者有增进食欲等作用。三和化学研究所与京都大学病态营养部助教授清野裕共同克隆化人胃动素的基因,并确认氨基酸序列与已决定构造的猪胃动素相同。最近欧洲专利厅宣布给三和化学研究所研制的人胃     

日本中野醋店和东京大学确立了醋化醋杆菌基因自体克隆技术

日本中野醋店已确立了食醋商业化生产所用的醋化醋杆菌(醋酸菌)(Acetobacter acefi)的有用基因自体克隆的基础技术。利用这项成果,就可使由限制性酶切断的DNA片断连接到载体上使其克隆化,使从得到的许多克隆通过散弹枪法(shot gun)克隆找出目标基因的技术能在醋酸菌中进行,从而可加快醋酸菌有用基因的克隆化。该公司正利用基因重组技术从事这种菌的育种工作:能降低醋酸发酵的冷却成本的高温发酵醋酸菌,有利于业务用食醋的高酸度发酵醋酸菌,提高醋酸发酵生产速度的醋酸菌等。     

红螯螯虾酚氧化酶原及其特性研究

采用同源克隆策略和RACE技术, 从红螯螯虾Cherax quadricarinatus血细胞中克隆得到酚氧化酶原基因的全长cDNA序列, 共2951 bp, 开放读码框为1995 bp, 编码665个氨基酸. 预测的分子量和等电点分别为75.7 kD和6.23. 酚氧化酶原含有两个推测的tyrosinase copper-binding motifs (带有六个组氨酸残基)和一个thiol-ester-like motif, 这些特征和其他甲壳动物的酚氧化酶原特征相同. 红螯螯虾酚氧化酶原氨基酸序列与通讯螯虾Pacifastacus leniusculus、欧洲龙虾Homarus gammarus、美洲龙虾Homarus americanus 和克氏原螯虾Procambarus clarkii 酚氧化酶原的相似率分别为68%、63%、63%和59%. 酚氧化酶原基因双酶切后连接入pET-28a原核表达载体, 转化到大肠杆菌BL21后重组表达酚氧化酶原蛋白. 在重组蛋白纯化后, 免疫新西兰大耳兔制备得到的酚氧化酶原多克隆抗体, 其效价大于1:12800. 红螯螯虾血淋巴、肝和鳃组织中的酚氧化酶原mRNA表达和酚氧化酶活性较高, 而神经、心、肠和肌肉中较低. 中华绒螯蟹螺原体和嗜水气单胞菌免疫红螯螯虾后, 血淋巴细胞、肝和鳃组织中的酚氧化酶原和酚氧化酶活性在免疫后的不同时间均出现了显著性的增加, 此结果表明酚氧化酶原和酚氧化酶在红螯螯虾对抗细菌感染的过程中起到重要的免疫作用. 此结果为进一步深入研究酚氧化酶原基因和酚氧化酶的功能及其调控机理奠定基础.       

绿僵菌侵染对椰心叶甲酚氧化酶活性的影响

对椰心叶甲Brontispa longissima(Gestro)成虫血淋巴中酚氧化酶的特性进行分析,并研究绿僵菌(Metarhizium anisopliae)侵染对血浆甲酚氧化酶活性的影响。结果显示,椰心叶甲成虫的血浆及血细胞裂解液中均检测到酚氧化酶活性,且昆布多糖及胰蛋白酶可显著提高其活性。绿僵菌MA-4侵染组在侵染后第1至第5d的血浆酚氧化酶活性高于未侵染组(P<0.05),但是椰心叶甲成虫体内注射10μg昆布多糖后,侵染组的酚氧化酶活性显著低于未侵染组(P<0.05),表明绿僵菌一方面对可激活椰心叶甲的酚氧化酶原激活系统,另一方面又可抑制昆布多糖对椰心叶甲酚氧化酶原激活系统的诱导作用。     

从“云芝”分离到的酚氧化酶

日本王子造纸公司和东京农工大学部的原口隆英教授共同合作开发了分解木材木质素的酶。从“云芝”酚离到“酚氧化酶”。该酶具有常温常压下强力分解木质素的性能。为此,他们正在申请有关该酶的专利。该公司的科学家下一步是应用基因重组技     

克隆化烟草花叶病毒感染特异蛋白的cDNA

日本农林水产省农业生物资源研究所细胞育种部细胞生理学研究室大桥佑子、分子育种部生育基因研究室松冈信等,对烟草感染烟草花叶病毒(TMV)而诱导产生的感染特异蛋白(PR)的cDNA克隆化成功,还查明了它的碱基序列。抗TMV的品种,PR的产量有较多的趋势。他们一方面加速对生理活性进行分析,现在还正在克隆化染色体组DNA。如能查明     

日本研究人员解读白蚁肠内共生菌的全基因组取得新突破

以日本理化学研究所中央研究所、环境分子生物学研究所的特聘研究员本乡裕一为首的团队,分离了在黄胸散白蚁肠内共生的分解纤维素的原生生物细胞,并成功地从该细胞采集了难以培养的共生菌Rs—D17。     

农药

860430用真氧产碱菌JMF134(PJF4)对2,4一O和3一氯苯甲酸醋降解途径的转座子诱变和克隆化分析〔英二/Don,R.H.…     

昆虫酚氧化酶原激活酶研究

昆虫酚氧化酶原激活酶(Prophenoloxidase activating proteinase,PAP)是酚氧化酶原激活过程中的一个关键酶,是昆虫先天性体液免疫体系的重要组成部分。外界的免疫刺激能够诱导级联反应上游的蛋白对酚氧化酶原激活酶的前体进行剪切激活,而激活后的酚氧化酶原激活酶能够将无活性的酚氧化酶原剪切激活为有活性的酚氧化酶并最终生成细胞毒素物质来消灭外源物。本文综述了昆虫酚氧化酶原激活酶的结构与特性及其在酚氧化酶原级联激活系统中的作用机制,并探讨了寄生蜂对寄主昆虫酚氧化酶原激活酶的调控。     

促使细胞自杀的“Fas”的cDNA克隆化成功

大阪生物研究所第一研究部长长田重一与东京都临床医学综合研究所细胞生物研究部门的米原伸等研究组成功地实现了蛋白“Fas”的cDNA的克隆化并发表在Cell杂志91年7月26号(P233—243)。 抗Fas抗体具有类似于TNF的作用,但TNF不与Fas抗原结合,最早米原提出了这样     

软体动物和甲壳动物酚氧化酶的研究进展

软体动物和甲壳动物的很多品种都是重要的经济养殖品种.随着养殖业集约化程度的提高,各种病害频繁发生,造成了巨大的经济损失.于是越来越多的人开始关注软体动物和甲壳动物的免疫防御系统,并对其进行研究.酚氧化酶(phenoloxidase,PO)是一种含铜的氧化酶,广泛存在于微生物、动物和植物体内.作为酚氧化酶原激活系统的重要一员,PO在无脊椎动物的先天免疫机制中起着重要的作用,有关其生物化学、免疫学和分子生物学特性的研究一直以来受到广泛关注,尤其在节肢动物中进展很快.作者对酚氧化酶在软体和甲壳动物中的功能、组织定位及表达、基因克隆和序列分析及其系统演化等几个方面的研究进展进行了综述.基因序列分析和系统进化树证据均表明,催化功能相同的软体动物酪氨酸酶与节肢动物PO的基因有较大差异.该结果对目前被广泛接受并使用的酪氨酸酶专门用于哺乳类,酚氧化酶专门用于无脊椎动物的分类法提出了挑战.因此作者建议,将酚氧化酶专门用于节肢动物,酪氨酸酶用于软体动物等非节肢动物和脊椎动物.     

蛋白质芯片技术应用于高通量单克隆抗体制备研究

针对在传统的单克隆抗体制备过程中进行特异性筛选时大量的人力消耗,建立了一种联合应用蛋白质芯片进行单克隆抗体制备的方法。用8种重组蛋白分别免疫BALB/c小鼠,在传统的细胞融合的基础上,将8种抗原免疫的杂交瘤阳性细胞混合后进行克隆化、蛋白质芯片筛选,阳性细胞有限稀释克隆化制备相关抗体。实验结果:混合克隆化共得到单克隆细胞175孔,经蛋白质芯片筛选出阳性孔119孔,选择针对单一抗原阳性的细胞连续2轮克隆化,8种重组蛋白各获得单克隆抗体细胞株1株。与经典的单克隆抗体制备相比,蛋白质芯片筛选与混合克隆化技术联合应用于单克隆抗体制备,1个筛选周期获得了8种重组蛋白的单克隆抗体细胞株,提高了单克隆抗体的制备效率,节省了在筛选中的抗原用量,提供了一种经济、快速、简便的方法。     

蛋白质芯片技术应用于高通量单克隆抗体制备研究

针对在传统的单克隆抗体制备过程中进行特异性筛选时大量的人力消耗,建立了一种联合应用蛋白质芯片进行单克隆抗体制备的方法。用8种重组蛋白分别免疫BALB/c小鼠,在传统的细胞融合的基础上,将8种抗原免疫的杂交瘤阳性细胞混合后进行克隆化、蛋白质芯片筛选,阳性细胞有限稀释克隆化制备相关抗体。实验结果：混合克隆化共得到单克隆细胞175孔,经蛋白质芯片筛选出阳性孔119孔,选择针对单一抗原阳性的细胞连续2轮克隆化,8种重组蛋白各获得单克隆抗体细胞株1株。与经典的单克隆抗体制备相比,蛋白质芯片筛选与混合克隆化技术联合应用于单克隆抗体制备,1个筛选周期获得了8种重组蛋白的单克隆抗体细胞株,提高了单克隆抗体的制备效率,节省了在筛选中的抗原用量,提供了一种经济、快速、简便的方法。     

根虫瘟霉不同菌株对小菜蛾幼虫血淋巴酚氧化酶原的激活作用

在对小菜蛾Plutella xylostella幼虫血淋巴酚氧化酶原的存在部位及免疫激活作用特点研究的基础上,比较了根虫瘟霉Zoophthora radicans不同菌株对酚氧化酶原激活系统的免疫激化及防御作用的差异。研究发现, 酚氧化酶原主要位于小菜蛾幼虫血细胞膜及血细胞裂解液中,极少存在于血浆中。在免疫激活剂昆布多糖存在下,分别测得小菜蛾幼虫血细胞碎片、血细胞裂解液和血浆的酚氧化酶活性为26.80 U,16.68 U和2.53 U。酚氧化酶原显著地受血浆和昆布多糖同时存在的激活,但两者单独存在时对酚氧化酶原的激活作用较弱。根虫瘟霉菌丝裂解液对酚氧化酶原有不同程度的激活作用,其激活作用在有血浆存在时显著增强,其酚氧化酶活性可提高2.9～3.4倍。各菌株间对酚氧化酶原的激活作用则以ARSEF1342菌株最强,ARSEF2699和F99101菌株次之,ARSEF1100菌株最弱。被激活的酚氧化酶可粘附于根虫瘟霉菌丝上并能产生黑化反应,各菌株间酚氧化酶粘附于ARSEF1342菌株的能力最强,粘附于ARSEF2699和F99101菌株的次之,粘附于ARSEF1100菌株的最弱。但酚氧化酶粘附于昆布多糖的能力显著强于各虫霉菌株,表明各菌株在一定程度上能逃避寄主的免疫识别;各菌株激活酚氧化酶原及酚氧化酶粘附于菌株强弱,与对小菜蛾毒力呈负相关性,表明高毒力菌株具有易逃避寄主免疫识别的趋向。     

大豆根瘤菌固氮酶的铁蛋白基因

大豆根瘤菌(Rhizobivmjaponicum)的固氮酶具有与肺炎克氏杆菌(Klebsiella Pneumoniae)和苜蓿根瘤菌(R.meliloti)二者固氮酶相同的铁蛋白基因(nif H)。铁蛋白基因的大小为12.1Kb,部分基因片段已经克隆化。将nifH的一部分克隆化,并使之在大肠杆菌(E.Coli)     

棉铃虫血淋巴酚氧化酶活性的微量测定

昆虫血淋巴黑化的形成由激活酚氧化酶原的级联系统所引发 ,酚氧化酶在昆虫体液免疫中起着重要作用。用抗凝剂从棉铃虫血淋巴中分离获得了血浆及完整的血细胞 ,以L DOPA为底物 ,牛胰蛋白酶为激活剂 ,测定了血浆及血细胞裂解液中酚氧化酶及酚氧化酶原的活性。结果表明 ,血浆及血细胞中两者都有一定量的分布。这一昆虫血淋巴酚氧化酶的微量测定方法 ,所需样品量少 ,耗时短 ,简便易行。     

法国用基因操作生产了住血吸虫病疫苗

法国巴斯德研究所与 Transgene 公司共同利用基因操作在全世界领先生产了住血吸虫病疫苗。它是巴斯德研究所分离了疫苗的目标抗原(P28)后,由 Transgene 公司合成和克隆化了它的基因并表达而成的(参阅 Nature 杂志3月12日号)。位于里尔的巴斯德研究所的研究中心的项目负责人,寄生虫学家 Andre Capron 说:“现在在非洲、亚洲、南美洲的74个国家约2～3亿人患住血吸虫病。这种病引起慢性肝     

凤眼莲与其根际细菌相互作用的研究

凤眼莲及其根际细菌的相互关系明显地受营养条件的影响,生长在含糖培养基中的凤眼莲根分泌物不改变其根际细菌的生长动态,但在含酚和无机营养条件下生长的凤眼莲根分泌物分别使其根际细菌出现２次和３次增长;而且在含酚环境中,根际细菌对凤眼莲表现出更为强烈的根际效应．细菌的代谢产物能提高凤眼莲体内的多酚氧化酶的活性,却抑制过氧化物酶的活性和减少其体内酚的富集量;然而接菌后的凤眼莲,其体内多酚氧化酶和过氧化物酶同时得到激活,且酚富集量增加．     

京都大学克隆化小檗碱的生物合成基因

日本京都大学农学部教授山田康之等克隆化植物次生代谢产物小檗硷的生物合成基因成功。准备于4月在东京召开的日本农艺化学会上详细发表。如果把小檗硷的生物合成基因的研究作为典型事例,今后就能克隆化类似植物的与有用次生代谢产物有关的生物合成基因,利用由此基因产生的酶的酶促转化等,从而扩大有效地生产有用物质的研究开发的范围。这项研究是与京都大学医学部教授中西重忠共同进行的。山田等以中的小檗硷高生产株为材料,精制了生物合成小檗硷的酶 te-     

末端氧化酶CyxA增强肺炎克雷伯菌对外界环境的抵抗力及致病性

【背景】细胞色素bd末端氧化酶存在于许多致病菌中,保护细菌免受各种不利环境应激的损害,促进多种致病菌的毒力,由于真核生物缺乏这种酶,被认为是开发新型抗菌药物的一个有前景的靶标,肺炎克雷伯菌(以下简称“肺克”)中末端氧化酶的作用至今尚不清楚。【目的】探究末端氧化酶CyxA在肺炎克雷伯菌中的生物学功能。【方法】构建cyxA基因无痕缺失株与回补株,通过体外实验比较野生株WT及敲除株ΔcyxA的生长能力、生物被膜和荚膜合成能力、对不同环境因素(酸性、高渗、氧化、还原)及抗生素的抵抗力,同时结合体内感染实验分析CyxA对肺克致病性的作用。【结果】缺失cyxA基因后肺克体外有氧生长能力明显降低,生物被膜和荚膜合成能力无差异,对pH 5.5、1.9%氯化钠、过氧化氢、β-巯基乙醇和部分β-内酰胺类及氨基糖苷类抗生素的抵抗力降低。通过小鼠滴鼻实验发现缺失cyxA基因后肺克的致病性降低。【结论】本研究首次证实末端氧化酶CyxA促进肺克有氧生长,增强该菌对酸性、高渗、氧化还原环境及部分抗生素的抵抗力,从而增强肺克的致病性。该研究为进一步阐明末端氧化酶对肺克致病性的分子机制奠定基础,为后续开发靶向肺克末端氧化酶的新型抗菌药物提供参考。