一种简便适用的蛋白质水解方法

进行蛋白质的氨基酸的组成分析时,蛋白质水解液的制备是十分重要的一步.样品水解的好坏直接影响测定结果的准确性.经典水解条件是:6N HCI,110℃在封管条件下恒温水解24小时.在这条件下进行水解,蛋白质分子中的Ser,Thr,Trp,Cys,Tyr,Met仍可能因氧化、降解等反应影响回收率.为此,要求在封管时减压或充氮以提高回收率,但这又需要特殊装置,国内一般实验室不具备这样的条件.我们试用1.5ml聚丙烯带盖的离心管代     

小方法三则

一、简易的水解装置人们在进行蛋白质的氨基酸组成分析或含有碳水化合物样品的中性糖组份分析时,都要对样品进行水解处理。为了得到准确的数据,必须将样品密封在一无氧的环境下进行水解。目前采用的常规水解管不能重复使用。而且充氮、抽真空及封管等操作也不甚方便。在此,我们介绍一个简易的、可重复使用的水解装置供大家参考。该装置由玻璃真空密封阀及磨口玻璃管组成(图1)。     

Co~(60)-γ-辐射保藏鲜猪肉氨基酸变化研究

研究了猪肉氨基酸分析的蛋白质水解条件,酸水解法可使猪肉蛋白质的主要氨基酸完全释出,并且在通常酸水解条件下是稳定的。苏氨酸和丝氨酸在酸水解条件下容易释出,但在此条件下稍微不稳定;胱氨酸和蛋氨酸则相当不稳定;缬氨酸和异亮氨酸对酸水解条件是稳定的,但需要水解72小时以上才能完全释出。已推导出苏氨酸、丝氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的水解时间校正因子,使得能在同一个24小时的水解产物对主要氨基酸进行测定。测定了几个不同处理条件下的γ-辐辐射保藏鲜猪肉蛋白质水解液的氨基酸。研究了猪肉游离氨基酸的提取和测定。     

牦牛骨蛋白的酶解条件研究

以蛋白质水解度为评价指标,辅以固形物溶出率,比较了中性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶对牦牛骨蛋白的水解效果,研究了酶用量、料液比(底物浓度)、酶解时间对水解度的影响,采用正交试验对酶解条件进行了优化。结果显示,木瓜蛋白酶是牦牛骨蛋白水解的适宜催化剂。在一定条件下,样品水解度随酶用量和酶解时间的增加而增大,底物浓度过低或过高均不利于原料中蛋白质的酶解。木瓜蛋白酶水解牦牛骨蛋白最佳条件为:酶解温度60℃,酶解时间8 h,酶用量3500 U/g蛋白质,料液比1:25(g:m l)。     

木瓜蛋白酶在谷物色氨酸测定上的应用

目前测定谷物色氨酸的方法操作繁琐,费用昂贵,准确性也差,为了适应在普通实验室条件下进行大批样品的测定,我们采用木瓜蛋白酶水解玉米粉等谷物的蛋白质,然后用对二甲胺基苯甲醛(DAB)显色法进行比色测定,方法简单、快速,可达到上述测定目的。     

微波高压罐水解法在氨基酸分析中的应用简报

本文报导了采用微波高压罐水解技术快速水解食物蛋白质,并测定其１７种氨基酸含量的方法。研制的高压罐具有密闭性、微波穿透性好,耐热、耐压、耐腐蚀等特点。采用该高压罐研究了微波强度及作用时间等条件对氨基酸稳定性的影响,在微波输出功率１００Ｗ３５～４５分钟水解了３份食品样品,其氨基酸含量测定结果与传统的１１０℃２２左水解基本相符,１７种氨基酸５次平行测定结果ＣＶ值均＜１０％。     

应用两种不同的酸水解方法水解纯蛋白质、食物和饲料时氨基酸的测定

<正> 为比较快速酸水解(由Gehrke推荐)和经典的酸水解方法,对含有不同量的蛋白质与非蛋白质组分的十五种动物和植物来源样品,用6N HCl 110℃24小时和145℃4小时两种酸水解方法进行了氨基酸测定。因高温、短时水解(HTST)方法曾仅用于纯蛋白质,此项工作的目的是证实这一水解方法能够应用于任何物质,特别是食物和饲料,     

蛋白质的酶水解过程研究

进行了蛋白质酶水解过程的研究。结果表明木瓜蛋白酶对混合蛋白质的亲和力最强 ,而 1398蛋白酶的亲和力最弱。也表明作用位点和亲和力之间有一定的对应关系 ,Km值和作用位点氨基酸含量比例的相关系数为 0 .90 9。温度影响结果表明温度较低时温度升高加速水解反应过程处主要地位 ;当温度较高时 ,酶失活过程处主导地位。在一定水解时间内的讨论最适温度条件具有更明确的针对性 ,从本研究的采用胰酶 (胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶 )水解 4h的条件下 ,反应温度控制在45～ 5 0℃之间最适     

碱性蛋白酶提取变性脱脂豆粕中蛋白质

以高温变性脱脂大豆粕为原料,用正交实验法对变性豆粕在蛋白酶作用下的水解特性进行了深入研究。选用国产胰蛋白酶为水解酶对变性豆粕进行水解,研究了变性豆粕中蛋白质溶出率随温度,pH值,时间,低物浓度及用酶量的变化规律,找到了水解变性豆粕的最佳实验条件,结果表明,胰蛋白酶水解高温变性豆粕的最佳条件为,温度50℃,时间60h,底物浓度11%,用酶量10000u/g,pH值8.0,在此条件下,变性豆粕中蛋白质可有69.34%水解溶出。     

羧肽酶Y标记蛋白质羧基端方法的优化及应用（英文）

蛋白质水解是一种重要的翻译后修饰,它在许多生化过程(如细胞凋亡和肿瘤细胞转移等)中起着极其重要的作用。鉴定蛋白质水解位点可以进一步加深我们对这些生化过程的认识。尽管蛋白质氨基端标记方法和蛋白质组学在复杂生物体系中鉴定获得了许多蛋白质的水解位点,但这种方法存在固有的缺陷。羧基端标记方法是另一种可行的鉴定蛋白质水解位点的方法。本文优化了蛋白质羧基端生物酶标记方法,提高了亲和标记效率,从而可以更好地利用正向分离方法对蛋白质羧基端多肽进行分离并用质谱鉴定。我们用优化后的羧基端标记方法来标记大肠杆菌Escherichia coli复杂蛋白样品后鉴定到了120多个蛋白质羧基端多肽和内切多肽。在其所鉴定的蛋白质水解位点中,我们发现了许多已知和未知的位点,这些新的水解位点有可能在正常生化过程的调控中发挥着重要的作用。该研究提供了一个可以与蛋白质氨基端组学互为补充、可在复杂体系中鉴定蛋白质水解的方法。     

羧肽酶Y标记蛋白质羧基端方法的优化及应用

蛋白质水解是一种重要的翻译后修饰,它在许多生化过程 (如细胞凋亡和肿瘤细胞转移等) 中起着极其重要的作用。鉴定蛋白质水解位点可以进一步加深我们对这些生化过程的认识。尽管蛋白质氨基端标记方法和蛋白质组学在复杂生物体系中鉴定获得了许多蛋白质的水解位点,但这种方法存在固有的缺陷。羧基端标记方法是另一种可行的鉴定蛋白质水解位点的方法。本文优化了蛋白质羧基端生物酶标记方法,提高了亲和标记效率,从而可以更好地利用正向分离方法对蛋白质羧基端多肽进行分离并用质谱鉴定。我们用优化后的羧基端标记方法来标记大肠杆菌Escherichia coli复杂蛋白样品后鉴定到了120多个蛋白质羧基端多肽和内切多肽。在其所鉴定的蛋白质水解位点中,我们发现了许多已知和未知的位点,这些新的水解位点有可能在正常生化过程的调控发挥着重要的作用。该研究提供了一个可以与蛋白质氨基端组学互为补充、可在复杂体系中鉴定蛋白质水解的方法。     

氨基酸分析仪测定饲料添加剂——叶酸的方法

用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸于１１０℃条件下水解饲料添加剂——叶酸,使之游离出谷氨酸,用氢氧化钠中和调节ｐＨ到２,氨基酸分析仪测定谷氨酸含量,经与标准叶酸水解样品比较,计算出叶酸的纯度。该方法重现性好,变异系数ＣＶ＝０．０８％,平均回收率为９８．３４％,浓度与峰面积呈线性相关,相关系数ｒ＝０．９９８７,可随氨基酸分析同时进行,不需改变任何分析条件。     

微波水解制备鱼蛋白的研究

采用微波水解的方法制备鱼蛋白水解液,结果表明:微波可以明显增加蛋白质回收率,正交实验得到微波酸解的最适条件,即HCl浓度4 mol·L-1、微波功率450w、作用时间为30min,其水解液的蛋白质回收率可达到91.02％,相当于酶解的效果,且腥苦昧较小。     

介绍一种消化管

<正> 国内氨基酸分析样品前处理一般都采用封管水解法,选用适当容量的厚壁硬质玻璃试管作样品水介管。由于市售玻璃试管材质往往不规范,在高温酸水解过程中破损较多,使样品前处理不能顺利进行,而且封管操作步骤繁锁,玻璃试管只能使用一次,成本较高。经过反复摸索,试验改用市售φ12×150毫米带旋塞硬质玻璃试管,加内衬0.1毫米聚四氟乙烯膜作消化管,使用方便,并降低了成木,效果十分理想。具体用法如下: 1.用细油石将试管口端面磨平,保证     

蚕蛹蛋白质的酶—酸两步水解

将木瓜蛋白酶催化水解和酸水解联合起来应用于水解蚕蛹蛋白质制备氨基酸。与单纯酶解(水解时间48h)或酸水解(水解时间24h)相比,水解时间分别缩短了2/3和1/3,后处理简化,能耗降低。研究了蚕蛹蛋白质水解的影响因素,在适宜条件下,得到有香味的混合氨基酸,收率为98.5％(对蛋白质),其中含有17种游离氨基酸(色氨酸未测),含量为47.9％。     

蛋白质碱水解管的制作

测定蛋白质中的色氨酸时,常要用LiOH、NaOH、Ba(OH)_2等作水解(催化)剂.如用一般玻璃管封口来水解,会产生很多硅酸盐,其中有些是溶于水的,如Na_2SiO_3等,它将污染分离柱中的离子交换树脂,使分离率下降.水解管普遍推荐使用聚四氟乙烯材料制作,但要解决好以下两点:一是在高温下必须密封良好.二是水解前后的样品要便于转移.我们设计了一种水解管,能满足上述要求.该管由管体、锥形垫圈、盖三部分组成(图1).因聚四氟乙烯材料硬度较高,可购棒料用车床加工制成.     

猪毛水解条件对胱氨酸水解得率的影响——应用“正交法”的一个实验

<正> 我们是以酸水解法从猪毛中提取胱氨酸的。因此猪毛角蛋白质被水解成氨基酸的过程,受酸的浓度,水解的温度和时间这三个因素的影响。关于如何应用酸的浓度,控制水解的温度和时间,有各种各样的说法。为了取得第一手材料,摸清在常压下水解猪毛,酸的浓度、温度、时间三因素对胱氨酸得率的影响,我们在数学系同学的大力支援下,应用了\"正交设计法\"——这个能从多因素中找出最适条件的试验方法,进行了提高胱氨酸水解得率的试     

高温瞬时α化大米中可酶促水解α氨基氮含量的测定

经单因素和正交实验优化,高温瞬时α化大米的蛋白质酶促水解条件为:pH3.0,温度30℃,液固质量比为15,水解时间3 h,加酶量为2.0SAPU.g-1米粉。在该水解条件下测定不同处理条件下大米的酶促水解α氨基氮含量,揭示了其在高温瞬时α化过程中的变化规律,在一定程度上可用于指导生产。     

氨基酸的生产方法

<正> 此顶研究主要是阐明从含有蛋白质的原料中生产氨基酸的方法。某些氨基酸广泛用于制药工业的药物制剂中。在食品工业中,氨基酸可以用作为食品质量的改进剂。氨基酸在另一些方面也颇有用处。现在我们所发明的方法,主要是可以排除以往生产方法中的不利之处。按照我们的方法来生产氨基酸,是酸水解以一个大气压的蒸气压,水解终点的判断是应用蛋白质特异反应水解过程后期,一直进行这种特异的蛋白反应试验,直至检出样品中不含蛋白质为止。     

用碱水解的方法测定蛋白质的消光系数

在蛋白质结构与功能的研究中,有时蛋白质溶液的浓度是一个重要的参数.紫外吸收法是测定蛋白质溶液浓度最为常用的方法,而已知蛋白质的消光系数是用紫外吸收法准确测定蛋白质溶液浓度的前提条件.在0.1 mol/L NaOH溶液中,蛋白质发生碱性水解,因而蛋白质溶液可以看作是色氨酸和酪氨酸的二元体系.以此为依据,给出了用碱水解的方法测定蛋白质消光系数的方法.这一方法操作步骤简便易行,蛋白质消光系数的计算公式简单明了.用这一碱水解的方法分别测定了几种氨基酸组成不同的蛋白质的消光系数,与文献数据对照,得到了令人满意的结果,测定误差均小于±5％.