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扩增大段靶DNA的PCR方法 总被引:3,自引:0,他引:3
扩增大段靶DNA的PCR方法陈尚武,王章(中山大学生命科学学院,广州)PCR和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Taq(Thermusaquaticus)DNA聚合酶的应用以及PCR技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使DNA片段的PCR扩增成... 相似文献
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PCR(polymerasechainreaction)技术自创始至今还不到15年的时间 ,但它已以惊人的速度渗透到了工业、农业、医学、药学等各个领域〔1 ,2〕。PCR技术的发明无疑给生物工程带来了历史性的转折 ,促进了生物工程 ,特别是基因工程研究的飞速发展〔3〕。近期 ,随着人类基因组计划等的实施 ,并伴随着生物芯片技术的推广 ,快速、高效的PCR已成为PCR技术发展的必然趋势。TaKaRa推出的Z TaqDNA聚合酶(Z是指A、B……排列的最后一个字母 ,指最快的意思 ,为商品名)是为快速PCR而研制成功… 相似文献
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用于扩增较大片段DNA的PCR方法方向东,陈淳(中科院上海生物化学研究所国家分子生物学实验室,上海200031)诸江(上海第二医科大学上海血液学研究所,上海200025)关键词DNA扩增,PCR自从Taq(Thermusaquaticus)DNA聚合... 相似文献
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PCR产物克隆方法的新进展 总被引:2,自引:0,他引:2
PCR产物克隆方法的新进展陈尚武,马涧泉(中山医科大学生化教研室.广州)随着PCR技术的发展和普及,克隆PCR产物已广泛应用于分子生物学的各个领域。通常PCR产物不具有粘端,只能进行平端连接的克隆,由于TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性... 相似文献
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利用Tag DNA聚合酶反转录cDNA第一链的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用TaqDNA聚合酶直接对RNA进行反转录成cDNA第一链,然后用特异引物进行PCR扩增,结果表明,反转录达到AMV逆转录酶的效果,且可能得到比AMV逆转录酶更完整的cDNA第一链。 相似文献
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根据法呢基焦磷酸合酶(FPS)保守域设计简并引物,应用Nest PCR和PCR-96孔板筛库技术分离到亚洲棉法呢基焦磷酸合成酶的cDNA。序列分析表明,该cDNA全长1280bp,开放阅读框共编码342个氨基酸残基,推断蛋白质分子量约为39kD,推测的氨基酸顺序与拟南芥和青蒿的FPP合酶序列同源性为78.9%和80.7%。应用RT-PCR定量分析fps1基因在“苏棉6号”(G.hirsutum L 相似文献
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分子生物学技术在植物和动物常规育种中的应用主要包括两个方面,即分子标记和基因工程。分子标记,或称DNA标记,是基因型在DNA水平上的表现形式。目前,已产生了多种分子标记技术,在方法上可以分为三类[17]:(1)非PCR类,如RFLP(Restrictionfragmentlengthpolymorphism)和VNTRs(Variablenumberoftandemrepeats)。(2)以... 相似文献
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刁丰秋 《中国生物工程杂志》1998,18(2):12-16
过去20年,人们已经分离到了相当数量的与发育相关的基因。这主要借助于蛋白质产物的分离纯化,然后根据其氨基酸结构推算其相应的核苷酸序列,并据此合成寡核苷酸探针,最终从cDNA文库或基因组文库中筛选出目的基因。而未知其编码产物的发育基因的分离克隆则是非常困难的工作,以前广泛应用的主要方法有DNA标签法(DNAtagging)[1,2,3],作图克隆法(map-basedcloning)[4],差别筛选法(diferentialscreening)[5]和扣除杂交法(subtractivehybridization)[6,7,8]。这些方法虽然都取得了一定的成功,但由于各自的缺陷性,而限制了它们更加广泛的应用。近年来在PCR技术的基础上,人们已经建立了若干种分离克隆植物发育基因的新方法。1992年,LiangP和PardeeA[9]首次提出并运用了mRNA差别显示技术(mRNAdif-ferentialdisplayreversetranscription-PCR,DDRT-PCR)来进行基因的分离。实践表明,mRNA差别显示技术在分离、鉴定差别表达的新基因方面与以前的各种技术相比有其独特的优越性,但同时它也存在着重复性较差等缺点。因此,最近研究工作者又在其基础上,发展了诸如代表性差式分析(representationaldiferenceanalysis,RDA)[10,11]和抑制性扣除(或减去)杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)[12]等一些更新的方法。下面就此作一简要概述。 相似文献