生物学中的电镜放射自显影术

放射自显影是利用放射性同位素发射的带电粒子(α或β粒子),作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影,再经显影把“像”显示出来,以研究该放射性物质在生物机体(整体的、组织的或细胞的和亚细胞水平的)内的径迹或颗粒定位的一种技术。由于采用各种     

HW4型乳胶在电镜放射自显影术中的应用

在毛主席无产阶级革命路线的指引下,我国的科学技术事业迅速发展,生物学、医学研究中近代技术方法的应用日益广泛,电子显微镜放射自显影术即是其中之一。遵照毛主席关于独立自主、自力更生的教导,我们应用国产HW4型细颗粒电子敏感乳胶(以下简     

用电镜放射自显影术研究TMV-RNA在烟叶细胞中的复制

在放线菌素D(AMD)抑制细胞RNA合成时,用3H-尿嘧啶核苷标记TMV侵染的和健康的烟草叶片,经固定,包埋,切片,RNA酶处理及放射自显影后,在电镜下观察。结果表明,3H-尿嘧啶核苷向病毒基因组或其复制中间体的掺入主要发生在细胞核内,叶绿体内有少量掺入,线粒体内未发现有掺入。因此认为TMV—RNA的合成主要是在缅胞核内进行的。切片如先经蛋白酶和RNA酶处理,再进行放射自显影,则自显影上的银粒几乎全部消失。从超薄切片后的剩余样品取小样,用酚一SDS法和Serva纤维素柱层析,从TMV侵染的烟叶中分离到了抗RNA酶的’H—ds—RNA。从而推测复制中间体在体内很可能主要是单链的,其复制过程很可能不经过双链复制型(RF)。提取到的’H一‘is—RNA：,可能是提取过程中的人为产物。     

薄切片的放射自显影术

薄切片是指厚度为0．5～1μm的树脂类切片。文献中称它为厚切片（thicksection）或半薄切片（semithinsectio）,籍以与电镜观察用的薄切片（thinsection）区别。我国已习惯称电镜用的切片为超薄切片,因此,把这类切片称薄切片就能说明其比超薄切片厚,比普通石蜡切片薄的特性。用薄切片作放射自显影具有下列优点：（1）改善分辨力：放射自显影象的分辨力与样品的厚度成反比,薄切片的厚度低于普通石蜡切片,所以其分辨力高于用石蜡切片制作的放射自显影象的。（2）减少人工假象：用薄切片作放射自显影,不需去除包埋剂,因此,提供了平正…     

大鼠精子细胞的糖蛋白合成——电镜放射自显影研究

本实验用电镜放射自显影技术,在注射~3H-岩藻糖后30分钟和1、4、8、24小时示踪大鼠精子细胞合成糖蛋白的情况以及新合成糖蛋白的去路。实验结果表明: 1.在注射~3H-岩藻糖后30分钟到1小时,放射自显影标记最初出现在高尔基体上。岩藻糖分子首先在高尔基体的外周(皮质)部位掺入糖蛋白,随后,新合成的糖蛋白并不直接转运到别处,而在高尔基体中央(髓质)部位作短暂贮存。说明中央部位在功能上是高尔基体的一个重要组成部分。2.~3H-岩藻糖不仅掺入高尔基期和顶帽期精子细胞的高尔基体,而且掺入顶体期精子细胞的高尔基体,说明顶体期的高尔基体仍有合成糖蛋白的功能。3.新合成糖蛋白的去路,在精子细胞发育的不同阶段是不一样的。在高尔基期和顶帽期精子细胞中,新合成的糖蛋白     

植物的放射自显影法

一、前言自从贝克勒耳(H.Becguerel)于1886年发现天然放射性以后,俄国学者于1904年就首次的应用自显影方法研究了天然放射性物质在动物机体内不同组织的分布,但是这     

放射自显影在医学研究中的应用

放射自显影是利用感光乳胶记录被研究材料中放射性物质分布和定位的方法。它的原理和普通照象一样,由于被研究材料中的放射性同位素放出的射线作用于感光乳胶,使感光乳胶中的卤化银感光形成潜影,经显影剂作用后感光的卤化银还原成为黑色的银元素     

电子显微镜放射自显影操作方法的比较

电子显微镜放射自显影方法,能够把结构和功能联系起来,对研究某一标记物在细胞内的部位及动力学问题等提供了良好的方法。但此方法有很多细节掌握不好就会影响结果。下面分六个问题谈谈:     

放射对流免疫电泳自显影术测定血清甲种胎儿蛋白

本文介绍放射对流免疫电泳自显影术测定甲种胎儿蛋白(简称AFP)。此方法具有快速、敏感、简易等特点,是一种比较适合农村的放射免疫测定方法。它的检测范围在25毫微克-25微克/毫升之间, ~(131)I-AFP的有效使用期限较长。用此方法进行普查得到了较为满意的结果。对偶尔发生的非特异性反应,可用放射免疫双向扩散自显影术鉴别。近年来,放射免疫测定血清甲种胎儿蛋白已在临床上广泛应用。饱和分析和放射对流免疫电泳定量法,虽可精确定量10毫微克/毫升左右,但操作过程较长,需要计数仪。为了更好地落实毛主席“把医疗卫生工作的重点放到农村去”的伟大号召,简化放射免疫测定是必要的。标记抗原参人火箭电泳自显影法(简称放射火箭自显影)的建立和应用,为普及放射免疫测定AFP开创了新的途径,但建立多种敏感度高、特异性强、并适合于普查用的放射免疫测定法,仍是临床和研究的需要。本文介绍的放射对流免疫电泳自显影术(简称放射对流自显影),可能成为简单、易行,便于普及的放射免疫测定方法之一。     

放射自显影技术应用的现状及未来趋势

放射自显影通常指结合了放射标记探针的分子或组织通过感光材料（如X光胶片）曝光、显影、定影获得金属银颗粒图像的实验技术，它是定性、定量分析与探针结合的靶分子含量及其在组织中分布的传统手段，在生物学基础研究以及临床前新药研究等方面有着广泛的应用。近年来磷屏成像技术的普及显著缩短了放射自显影技术的实验周期，并拓展了在短半衰期正电子放射核素中的应用。本文重点介绍放射自显影技术应用中尚不能全面被非放射性替代技术取代的一些实验工作进展，主要包括某些酶活性的测定、磷酸化位点分析、低丰度核酸检测以及与放射性探针特异结合的靶点（如受体等）在组织中的分布等实验技术工作。适应当前应用趋势的变化对放射示踪共用技术平台的建设，对帮助技术支撑人员提供更好的、具有针对性的技术性服务具有一定的指导意义。     

冷冻取代和干膜显微放射自显影

显微放射自显影技术已经在生物学研究中得到广泛的应用。但由于常规制片一系列操作中出现有各种溶液的取代更替,从而难以对一些水溶性放射性化合物在组织和细胞内的定位予以确切鉴定,同时放射性化合物     

植物组织中光合产物的放射自显影定位

植物光合产物,都为水溶性,不能用常规石腊制片技术进行放射自显影研究。为了定位研究这类水溶性化合物在植物组织中的分布,参考Appleton、Stumpf等的方法,利用我国现有条件,试验了冰冻制片、冻装核4乳胶干板技术,取得了自显影定位照片。其方法如下。     

用放射自显影法测定局部胃粘膜血流量最好

测定胃粘膜血流量的方法很多,但都各有缺点,如氨基比林清除法仅限于测定全胃或小胃粘膜血流量。在局部胃粘膜血流量测定方法中,放射微球法在统计误差和分辨能力方面有一定的缺陷,而多普勒测速计的测定需要插入胃腔;氢气清除法虽然有较高的定位能力,但也仅限于一定数量预先选定的部位,并且要求组织和电极之间有物理性接触。最近W.J.Angerson等采用放射自显影方法测定局部胃粘膜血流量,可     

放射自显影技术(Autoradiography)在昆虫学中的应用

一、基本原理 利用放射性物质放射出来的粒子,打到照象底片或带有乳胶层的玻璃底板上,使乳胶中银盐还原而出现黑点。放射性强的银盐还原多,故洗出象片黑点密集,放射性弱的则黑点少而稀。首次用生物材料作放射自显影是远在1895年法国物理学家H.Bee-querel观察到铀矿石能使照相底片感光后,就有人在蛙皮上涂以镭的化合物,然后放在照象底片上,洗出后就明显地看到蛙体上镭涂过的部位。放射性同位素放出的粒子为α-、β-粒子(或软β-和硬β-粒子),放射出的射线为γ-射线。α-粒子是电离很密的粒子,能量大、射程很短,可以得到很明显的影象,在组织化学上应用较多的为放射β-粒子及γ-射线的元素。β-粒子小、轻、射程大,能量高,但造成影象的清晰度则随能量加大和射程增远而降低,如P~(32)放射的β-粒子要比S~(35)的高16倍以上,放射的能量愈大,射程愈远,β-粒子     

无花粉蛋白在体内定位的放射自显影研究

天花粉蛋白是从中草药发掘出来的一个植物蛋白性的中期引产和抗增生性滋养层细胞疾病的药物。在临床应用中已累积了大量经验。关于作用机理的研究也进行了各方面的工作(上海实验生物研究所第二研究室,1976)。在小白鼠以间接荧光标记抗体法,追踪了给药后不同时间,“纯制天花粉”抗原分布的动态。结果证明,天花粉蛋白的原     

小麦花药培养中小孢子DNA合成的放射自显影研究

用放射自显影术研究小麦花药培养中小孢子的雄核发育,发现培养24小时后3H－胸腺嘧啶核苷掺入单核晚期小孢子,2．5天后营养细胞核中有3H－胸腺嘧啶核苷掺入,由A和B途径形成多细胞花粉的过程中,超始几次孢子体分裂,细胞的DNA合成是同步进行的。在多细胞花粉形成时逐渐变为不同步,生殖核的DNA合成不活跃,偶而能被标记上,个别合成DNA的生殖细胞形成类胚柄结构,当培养基中蔗糖浓度低（3％）时,培养早期小孢子内核的DNA合成正常进行,3H－胸腺嘧啶核苷比高糖浓度（9％）更易惨入小孢子,但经1－2次分裂后,核不再分裂,细胞壁不形成,所以3％的糖浓度中,多细胞花粉不能形成,主要不是DNA不能复制,而是细胞分裂和细胞壁的形成受阻所致。     

小麦花药培养中小孢子DNA合成的放射自显影研究

用放射自显影术研究小麦花药培养中小孢子的雄核发育,发现培养24小时后3H－胸腺嘧啶核苷掺入单核晚期小孢子,2．5天后营养细胞核中有3H－胸腺嘧啶核苷掺入,由A和B途径形成多细胞花粉的过程中,超始几次孢子体分裂,细胞的DNA合成是同步进行的。在多细胞花粉形成时逐渐变为不同步,生殖核的DNA合成不活跃,偶而能被标记上,个别合成DNA的生殖细胞形成类胚柄结构,当培养基中蔗糖浓度低（3％）时,培养早期小孢子内核的DNA合成正常进行,3H－胸腺嘧啶核苷比高糖浓度（9％）更易惨入小孢子,但经1－2次分裂后,核不再分裂,细胞壁不形成,所以3％的糖浓度中,多细胞花粉不能形成,主要不是DNA不能复制,而是细胞分裂和细胞壁的形成受阻所致。     

放射自显影法探讨钷-147的体内定位

本研究借放射自显影观察了钷-147进入机体后在整体、脏器和细胞水平的行径变化。发现该裂变产物摄入体内后呈选择性蓄积的紧要器官是肝脏和骨胳。钷-147在肝脏中的动态蓄积过程在开始是呈均匀弥散性的,随着发生水解而形成氢氧化物胶体后,在枯否氏细胞部位可出现浓集的放射灶。至于钷-147在骨胳部位的蓄积主要是在骨胳表面的有机质部位如骨外膜、骨内膜、骨小梁表面以及骨骺软骨的生长区,可呈现出高度浓集的放射自显影象。而在骨胳肌和脑组织中钷-147只有微量存在。     

鸡胚肝凝集素受体的放射自显影和扫描电镜观察

近些年来用标记过的外源凝集素作探针以研究细胞膜的结构和功能已取得很大进展。本文首次用~(125)I标记鸡胚肝凝集素,再以~(125)I-凝集素亲和标记鸡胚肝细胞。标记的鸡胚肝细胞经放射自显影(ARG),可用扫描电镜(SEM)对细胞表面受体的位点进行直接观察,以研究鸡胚肝凝集素受体的分布特征。     

压碎法制片技术在植物细胞放射自显影中的应用

放射自显影技术是放射性同位素示踪研究中最常用的方法之一,由于灵敏度高,既能准确定位又能精确定量,对研究生物体内物质的动态具有独特的优点。在植物细胞放射自显影研究中,常用的石蜡切片法虽能制出很薄的连续切片,但实验周期长,材料经脱水与浸蜡之后,易发生收缩,一些醇溶性或脂溶性物质并易产生移位或流失,而影响实验结果。为此,我们进行了研究。