光钳操纵生物活体的动态监测技术的研究

采用摄像、录像和视屏监控系统及显色偏振装置与光钳系统耦合,从空间分辨、色分辨和时间分辨多方面改善系统品质,实现了光钳捕获与操纵生物活体的动态监测、实时记录、资料保存和屏幕再现的功能,并能测量光钳操纵细胞的位移量和由此计算操纵速度,提高了光钳的自我调整和光钳操纵细胞的精细度。本研究为激光光钳技术在细胞工程等方面的应用研究提供了行之有效的技术手段。     

离心法分离毕赤酵母活细胞和死细胞

本文以毕赤酵母为研究对象,探索出一种分离活酵母细胞的新方法。研究发现,通过改变淋巴细胞分离液和50%聚蔗糖溶液的比例,获得不同密度的酵母细胞分离液,进而通过离心分层的方法可使毕赤酵母活细胞主要存留于离心液的上层。当酵母细胞分离液的密度为1.1467 g/mL (27.5%淋巴细胞分离液+72.5%聚蔗糖溶液),分离液上下层中酵母活细胞的分配比例差别达到最大,分别为94.67%(分离液上层)和5.33%(分离液下层)。毕赤酵母细胞浓度为4.35×108~1.13×109/mL时,活细胞在分离液上下两层的分配比例约为95%和5%。低毕赤酵母细胞存活率有利于离心分离。本方法可用于有效分离培养液中的毕赤酵母活细胞。     

微流控芯片细胞捕获分离方法概述

细胞捕获分离是免疫学、诊断检测、病理研究等学科经常用到的生物学实验方法.近年来,微流控芯片平台的细胞捕获分离方式花样繁多,层出不穷,它具有可快速检测、所需样本量少、节约试剂、成本低廉等优势.本文主要对近年来多种微流控细胞捕获分离的方法,以免疫捕获分离和无标签细胞分离两类对其进行介绍.免疫捕获分离是较为传统的细胞捕获分离方式,它的特异性好、捕获分离后的细胞纯度较高.无标签细胞分离是近几年热门发展的技术手段,它采用物理学与生物学相结合的方式,能较好地保持细胞的完整性和生物活性.细胞捕获分离在微流控平台的应用虽然发展迅速,但其在工业化生产和微型化整合等方面还存在一些问题,只有解决生产问题,细胞捕获分离在微流控平台的应用才真正具有实际价值,可以真正作为一种技术手段用于日常的实验操作和医学检测中.就目前而言,细胞捕获分离在微流控芯片中仍具有很大的发展前景.     

含高RNA酵母的分离,鉴定和应用

从蔗糖糖蜜及工业废水中分离到的一株高蛋白质,高ＲＮＡ酵母,菌体ＲＮＡ含量平均达１８．３,蛋白质含量达５０％以上,经鉴定为热带假丝酵母,用ＧＭ５０生产酵母抽提物,自溶后抽提物平均得率达７０％以上,抽提物蛋白含量达６０％以上,游离氨基酸占部氨基酸５０％,菌体蛋白利用率高达７８％。     

活细胞染色体切割（光刀）和光捕捉（光钳）的研究

本文报道了光捕捉活细胞染色体的最新实验结果。对ＰＴＫ＿２有丝分裂细胞的染色体先围激光刀切割,再用光钳捕捉使该切割的染色体片断的行为发生改变。光捕捉中期切割的染色体片断有可能使它们整合到同一个子细胞中或丢失在分裂沟中。光捕捉后期切割的染色体可使该切割片断或掺入相反的细胞中或丢失在分裂沟中或回到原有的相应子细胞中。光捕捉操纵染色体去水螈肺上支子细胞中不仅同样有效,还可以在纺缍体的边缘,即纺缍体和间丝笼之间的细胞质清澈区域内用光钳操纵染色体片断移动,旋转。根据细胞和染色体形态和行为,对７００－８４０ｎｍ波长范围内的各种波长的光捕捉进行了比较,结果表明,７００ｎｍ或８００－８２０ｎｍ波长操纵的细胞,出现最少的异常细胞百分率,７６０ｎｍ则诱发百分之百的异常细胞率。根据各方面的综合比较,７００ｎｍ为最佳波长,共次为１０６０和８００ｎｍ。７６０ｎｍ损伤细胞最严重,应避免使用。文中并讨论了光捕捉染色体的应用前景。     

低温和氧化应激产生活酵母细胞衍生物的研究

对低温和H2O2应激条件下产生活性酵母细胞衍生物（Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD）进行了研究。结果表明：低温预处理能够增加细胞内谷胱甘肽（GSH）含量,提高超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性,降低MDA含量。低温预处理可以诱导对致死浓度H2O2的抗性。通过0—15℃低温和0．2mmol／L H2O2处理酵母细胞后,提取LYCD并添加到酵母细胞培养液中,发现细胞在致死浓度H2O2作用下的存活率明显提高,说明0—15℃低温和H2O2刺激酵母细胞形成的LYCD对细胞具有抗氧化作用。     

用酵母双杂交系统分离一个新的人类细胞凋亡诱发基因

asy基因是最近发现的一个新的凋亡诱发基因, 但其诱发凋亡的机制仍不清楚. 采用酵母双杂交系统, 从人肺细胞系(WI-38)cDNA文库中克隆了一个asy相互作用蛋白基因asyip (asy interacting protein). asyip在人的各种组织内均能组成型转录合成1.8和2.7 kb两种mRNA转录本, 但转录水平有明显差异, 在脑组织中转录水平最高. 而且, 脑组织中2.7 kbmRNA转录水平大大高于1.8 kb的转录本. 序列分析表明两种转录本起始于一个共同的5′端,但3′端加poly(A)位点不同. 两者共享一个大的可读框, 编码26 ku的蛋白ASYIP. 推论的氨基酸一级结构表明, ASYIP含有两个大的强疏水区、两个蛋白激酶C磷酸化位点和两个酪蛋白激酶磷酸化位点. C端具有一个内质网捕获信号(Lys-Lys-Lys-Ala-Glu). 免疫沉淀试验进一步验证ASYIP和ASY在哺乳动物细胞中可以相互结合. 与asy基因一样, asyip基因的大量表达能抑制肿瘤细胞Saos-2的生长, 诱发细胞凋亡, 但效率比asy低.     

高温湿热酸法破壁提取法夫酵母胞内虾青素

法夫酵母是一种能积累虾青素的红酵母, 对其进行破壁是当前虾青素工业化提取生产的瓶颈工艺。研究在高温湿热条件下,低浓度盐酸对法夫酵母破壁而提取其胞内虾青素的工艺。探讨了不同破壁温度、盐酸浓度、液料比与破壁处理时间等因素对法夫酵母破壁后虾青素及类胡萝卜素提取率的影响, 确定了高温湿热酸法破壁提取虾青素的最佳条件为: 饱和蒸汽压力 0.1 MPa (121°C), 盐酸浓度0.5 mol/L, 液料比 (V/W)30 mL/g, 破壁时间2 min。在最佳条件下进行中试放大实验, 可得到虾青素与类胡萝卜素的提取率分别为: (84.8±3.2)%, (93.3±2)%。经优化后的新破壁工艺安全高效, 不会有毒性残留, 具有良好的工业应用前景。     

酵母细胞外蛋白质和多肽的产生及分泌

白地霉(Geotrichum candidum)AS 2．198的突变株NX47和橙黄红酵母(Rhodotoru-ta aurantiacam)AS 2．280蛋白质的合成与分泌和多肽的合成均在培养前期与细胞生长同步进行。合成的蛋白质全部或大部分贮存在胞周间,并随即通过细胞壁从胞周间分泌到细胞外,培养基的组成和培养时间对蛋白质的组份无显著的影响。合成的多肽全部贮存在细胞内。突变株NX47缓慢地分泌蛋白质,快速分泌多肽。其分泌能力取决于分为三层的细胞壁结构。多肽在培养前期不分泌,直到进入对数生长后期,才通过原生质膜和细胞壁由细胞内迅速地分泌到细胞外。分泌时间比其合成滞后一天以上。菌株AS 2．280的细胞壁没有三层结构,却能快速分泌蛋白质,但不分泌多肽。     

一种从酵母细胞中提取组蛋白的方法

为了制备体外酵母DNA序列组装核小体所需的组蛋白,利用酸抽提方法从未经饥饿处理和经过不同时间饥饿处理的酿酒酵母细胞中分离组蛋白,经SDS-PAGE电泳分析和Bradford法测定蛋白浓度,发现抽提物中含有组蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4,电泳条带位置正确、纯度较高,正常细胞的抽提物中蛋白总量达到158 μg/mL.试验结果表明该方法可以提取出较高质量的酿酒酵母组蛋白.     

He—Ne激光微束显微照射杂交水稻活体单细胞研究

利用激光微束显微照射水稻活体单细胞,经两年培养已获得一植株,收获种子350粒。     

细胞膜脂质流动性的不均一性与细胞分裂动力学的关系

细胞腊脂流动性在不同类属细胞存在着差异,其差异的程度取决于细胞的生理和生化特性。正常淋巴细胞、肺腺癌、肺鳞癌细胞以及结核细胞膜脂流动发生 分别为２．５１７±０．２６７、２２．５５７±３．７７１,３２．８７５±９．７０９和４．０２６±０．７２２。细胞分裂动力学与膜脂质流动性有关系。细胞分裂及其程度是膜脂质流动性差异的物质基础,同时并受细胞膜脂质的组成,脂蛋白生化以及外界因素的ｐＨ、Ｃａ＾２＋等影响,     

活菌制剂活菌数急剧衰降的原因与减缓衰降的方法

市售活菌制剂口服液活菌数急剧衰降的原因是营养缺乏,特别是缺乏部分氨基酸及某些维生素。增加动物性蛋白胨及强化酵母膏,添加适量维生素可使活菌数一年后保持在１０^６／ｍｌ以上。     

中国林蛙幼体适宜生存环境的探讨

本文通过人为设置六种不同的环境条件,研究了中国林蛙幼体对不同环境的适应性。结果表明：适宜的生存环境是水深低于蛙全长并设有栖息陆地,或者保持泥水湿润。水深高于蛙体长或环境干匀对蛙不利。在适宜的环境条件下,幼蛙平均能存活达５３６．６ｈ,最长可达２５ｄ。     

II. USE OF THE METHOD TO MONITOR THE IN VIVO KINETICS OF CELL POPULATIONS PERTURBED BY HYDROXYUREA

In a previous report, we described a new method called FP_i analysis to analyze time sequences of DNA histograms taken from a perturbed population of cells. In this paper we utilize the method to analyze the in vivo kinetic response of bone marrow and of lung metastases of the B16 tumor to various chemotherapeutic agents. We show that the technique allows useful kinetic data to be obtained with minimal processing of the raw histograms, thus allowing fast analysis of the data. We also show that, in order to monitor the kinetic response of living tissues, it is essential to collect multiparameter distributions; to monitor only the one dimensional fluorescence histogram can give rise to misleading results. Using these multiparameter histograms, we are also able to monitor the growth fraction of the lung metastases during treatment, allowing discrimination between cell synchrony and cell recruitment from the resting compartment.     

基于自适应光学的视网膜单细胞光学相干层析成像技术

介绍了一种基于CCD相机的并行光学相干层析成像技术,将所建立的层析成像系统和自适应光学视网膜相机结合。利用一维光学相干层析系统对人眼视网膜进行追踪并控制相干门在视网膜内的位置,利用基于CCD相机的二维光学相干层析成像系统记录视网膜的干涉图像。用眼模型和牛眼视网膜组织对系统进行了测试,通过将4幅干涉图像的获取时间控制在7 ms以内来减少视网膜运动对成像的影响;系统的轴向点扩展函数和灵敏度分别达到10 μm和76 dB。实验结果表明,所建立的基于自适应光学的视网膜光学相干层析成像系统的空间分辨率和灵敏度远远高于其它基于自适应光学的视网膜成像技术。     

由ADP诱导的人血小板聚集的动力学模型

用比浊法测量富血小板血浆（ＰＲＰ）在ＡＤＰ诱导后的光密度变化作为血小板聚集程度量度的方法已经用了二十余年了,但至今讨论血小板聚集动力学的数学描述的文献还很少。本文基于Ｔ．Ａｂｃ提出的血小板聚集是一级反应的假定和我们的实验结果,我们发现由ＡＤＰ诱导的血小板聚集曲线可以分解为三项：１．可逆性聚集Ｔ１;２．可逆性聚集的解聚项Ｔ２;３．不可逆聚集Ｔ３,而总的聚集曲线可由Ｔ＝Ｔ１－Ｔ２＋Ｔ３表示。     

基于图像分析技术的红细胞膜力学特性多参数动态测定的研究

探索以图像分析技术,在无扰、在位、实时的情况下,对单个活态红细胞的多个力学参量：弯曲模量KC、剪切模量μ及切向与弯曲模量之比ε等进行非侵入性连续动态测定的新方法。以该技术对红细胞在不同外部条件（温度、氧分压、渗透压）下的力学参量进行动态监测,不但揭示出有关变量条件对细胞各个力学参量的影响。还证明了本技术适于对细胞的各种生理和病理过程进行连续监测。