重楼属植物引种栽培的研究 Ⅱ.滇重楼的育苗试验

滇重楼〔Paris polyphylla var.yunnanensis(Fr.)Hand-Mazz.〕的种子发芽试验表明滇重楼种子有双重休眠期:种子需通过一段低温时期使胚完成后熟;种子萌发后,胚芽再需要一段低温时期使胚轴完成后熟才能出土成苗。本文对滇重楼种子的种源、采种期、播种期、播种材料及其育苗措施等进行了有关试验,现报道如下。     

重楼属两种植物小孢子和雄配子体的发育

重楼属两种植物(Paris axialis and Paris polyphylla var.yunnanensis)小孢子发生和雄配子体形成的过程及方式相同。小孢子母细胞减数分裂时胞质分裂为连续型;雄配子体为二胞型;药壁由五层细胞组成。绒毡层属腺质型。五指莲花粉群体中异常花粉发生的频率高于滇重楼,这或许与五指莲细胞内的超数染色体以及相应的减数分裂异常有一定相关性。     

须根自然腐解对滇重楼根际土壤理化性质的影响

目的：研究滇重楼须根在自然腐解条件下对其根际土壤养分、微生物数量和土壤酶活性的影响。方法：以四年生和五年生滇重楼幼苗为试验材料,在供试土壤中加入不同剂量的滇重楼须根,研究它们腐解对根际土壤理化性质、微生物数量和土壤酶活性的影响。结果：滇重楼须根自然腐解会抑制根系活力、丛枝菌根真菌侵染强度以及总提取球囊霉素和易提取球囊霉素含量,降低根际土壤pH值、速效氮（AN）、速效磷（AP）和有机质（OM）含量以及磷酸酶和脲酶活性,减少细菌、放线菌和总微生物数量,增加真菌数量和蔗糖酶活性,随着须根施用量的增加,上述指标的减少或增加幅度逐渐增加。相关分析发现,脲酶活性与土壤pH、AN、AP和OM含量之间均呈显著正相关,这说明其活性可作为表征滇重楼连作土壤理化性质变化的重要指标。结论：人工种植滇重楼过程中遗留须根自然腐解显著改变滇重楼根际土壤理化性质可能是造成连作障碍的重要因素之一,实际生产中避免须根遗留是保障滇重楼生长发育及品质形成的有效措施。     

滇重楼须根腐解对根际土壤酚酸物质的影响

目的：本研究主要探讨滇重楼须根腐解产物对其根际土壤酚酸物质种类和含量的影响，为滇重楼连作障碍形成机制提供科学依据。方法：采用室温盆栽法，以未栽培过滇重楼的沙壤土为栽培基质，研究滇重楼须根腐解对根际土壤酚酸类物质种类和含量的影响。结果：结果表明，滇重楼根际土壤中主要含有香草酸（VA）、丹参素（DSU）、对香豆酸（PCA）和对羟基苯甲酸（PHA）四种酚酸物质，其中DSU含量最高，PCA含量最低，随着根际土壤中滇重楼须根施用量的增加，同一年生滇重楼幼苗的根际土壤中上述四种酚酸物质含量逐渐升高，且对不同滇重楼年生的影响不同，呈现随着种苗生长年限的增加而根际土壤中四种酚酸物质分量增加的趋势。相关性分析发现，VA与PCA、DSU与PHA、VA与PCA以及PHA与VA和PCA间均呈显著正相关，这说明滇重楼根际土壤中四种酚酸物质的积累相互具有一定的促进作用。结论：滇重楼根际土壤中酚酸物质主要来源于残留须根的腐解，是人工栽培滇重楼连作障碍形成的主要原因之一，故在采摘人工栽培滇重楼时应尽量避免大量须根被遗留在土壤中而影响下一茬植物的生长发育，尤其是滇重楼的生长发育。     

生态因子对滇重楼花药开裂的影响

滇重楼为延龄草科重楼属植物,具有极高的药用价值,由于重楼传统药用部位生长缓慢、繁殖力低下,以及人们对野生重楼资源的过度采挖使其资源日趋枯竭。滇重楼的花药在整个花期中存在开裂－关闭的现象,花药的有效闭合应是保护花粉、延长花粉寿命、增强雄性适合度的一种适应机制。该研究以滇重楼为对象,通过设计正交实验和对比实验,观测其花药开裂过程中的光照强度、温度、湿度的变化,探究光照强度、温度、湿度等生态因子对滇重楼花药开裂的影响以及滇重楼花药开裂与生态因子变化的关系。结果表明：(1)在滇重楼花药开裂的过程中,光照强度增强、温度升高、相对湿度下降;(2)温度是影响滇重楼花药开裂时间的主导因子,升温促进花药开裂,降温促进花药关闭;(3)高湿度及黑暗推迟花药开裂,但并不能阻止花药开裂;(4)低温可使滇重楼花药持续关闭,而光照强度越高,花药持续关闭所需的温度越低。该研究有利于解释滇重楼花药白天开裂夜晚关闭的现象与环境因子的关系,对滇重楼的栽培育种提供理论指导。     

滇重楼茎叶总皂苷提取工艺优化及其体外抗氧化活性分析

以滇重楼茎叶为试验材料,采用响应面法优化超声波辅助提取滇重楼茎叶总皂苷的工艺,并分析总皂苷的体外抗氧化活性。在单因素试验的基础上,利用Box-Benhnken设计四因素五水平响应面试验,确定最佳提取工艺条件为料液比1∶12(g/m L)、提取温度54℃、超声功率210 W、提取时间2 h,滇重楼茎叶总皂苷实际平均得率为2.360%,预测得率为2.385%,相对误差为1.04%。滇重楼茎叶总皂苷对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子的最大清除率分别为98%、58%和64%,其IC50分别为2.223、6.782 mg/m L和4.638 mg/m L。     

滇重楼采收期研究

目的:获得滇重楼栽培的采收周期和采收的最佳时间。方法:采用高效液相色谱分析不同生长年龄(1~8年)的滇重楼种子苗地下根茎的皂苷含量,每月分析滇重楼地下根茎的皂苷含量;称取滇重楼地下根茎的重量,获得滇重楼种子苗地下根茎的年度生长特点,获得滇重楼地下根茎生长发育的月度变化规律。结果:滇重楼种子苗地下根茎的皂苷含量随栽培年限的增加,含量增高,第七年达到最高,第四年达到药材标准;地下根茎的发育从第四年进入快速生长期。一年之中,滇重楼地下根茎的皂苷含量,7月份最高,6月份最低。地下根茎的生长旺盛期从6月份开始,10月份达到顶峰。结论:滇重楼的采收周期以7年为宜,采收的最佳时间为10月份。     

滇重楼的栽培与合理利用

总结介绍滇重楼栽培技术,明确提出滇重楼种苗繁育以种子繁殖为主,带顶芽切块繁殖为辅;针对滇重楼原料稀缺状态,提出了合理利用滇重楼资源的几点建议,并阐述完善的滇重楼"三段栽培法" ,以解决滇重楼栽培周期长的问题.     

不同AM真菌处理滇重楼中9种核苷和碱基含量分析

目的：研究不同丛枝菌根（AM）真菌对滇重楼产量和品质的影响,为筛选滇重楼的优良AM真菌株提供科学依据。方法：以灭菌土壤为生长基质,于室温盆栽条件下对滇重楼新鲜根茎与28种AM真菌共同培养后采样,选取浸泡于FAA固定液中滇重楼根系30条,采用Philips J M等的方法染色、制片、镜检,根据Trouvelot等的方法统计菌根侵染率,以及用HPLC测定和比较分析各处理组滇重楼根茎中核苷（胞苷、尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、2′-脱氧腺苷）和碱基（尿嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤）的含量。结果：多数处理组滇重楼AM真菌侵染率均有所提高,其中Ga、Asc和Asp处理组的浸染率最显著（P <0.05）;不同AM真菌对滇重楼根茎中核苷和碱基含量的影响有所差异;滇重楼根茎中核苷和碱基的积累可能同时存在协同和竞争2种效应。结论：施加外源AM真菌对滇重楼根内AM真菌的侵染率具有调控（增减）作用,在人工栽培过程中接种Sde、Gd、Sca、Spe、Svi、Pb等6种优势AM真菌,能有效促进滇重楼的品质。     

AM真菌对滇重楼根际土壤酚酸类物质含量的影响

目的：探明丛枝菌根（Arbuscular mycorrhizal,AM）真菌对重庆、贵州、云南3地滇重楼栽培根际土壤酚酸含量的影响,为滇重楼连作障碍生物综合调控提供理论依据和技术指导。方法：以贵州安顺的滇重楼实生苗为研究材料,以未接种AM真菌的土壤为对照,研究在不同AM真菌组合和生境条件下,滇重楼根际土壤酚酸类物质含量的差异。结果：4种酚酸类物质（丹参素、对羟基苯甲酸、香草酸、对香豆酸）均在不同栽培地点的滇重楼根际土壤中检出,含量由高到低依次为丹参素、对香豆酸、对羟基苯甲酸、香草酸,但各物质含量存在一定差异;接种AM真菌能够有效的减少根际土壤中酚酸类物质的积累,具有较强的抑制作用,但贵州安顺的根际土壤中酚酸含量呈递增趋势。主成分分析结果表明,对羟基苯甲酸为滇重楼形态变异的主要因素。相关性分析结果表明,土壤中的酚酸并不是单一作用的,不同酚酸之间存在协同作用。结论：接种AM真菌改变了滇重楼根际土壤的酚酸物质含量和微生物群落结构,有利于创造健康的根际微生态环境,可为菌肥在滇重楼栽培区的有效利用提供科学依据。     

滇重楼可持续采收方法初探

滇重楼是云南传统的道地药材。由于种苗繁育困难和生长周期长,重楼的推广种植多年来未能取得突破。滇重楼的"多年栽培,分期采收"技术是将滇重楼根茎按用途分为药用部分与种苗部分,采收时,仅采收药用部分,种苗部分(带顶芽的根茎)继续生长发育,而不是将整个根茎全部采收作为商品药材。通过考察滇重楼须根比率的月度变化规律及3年的根茎生长量,进行采收时间和经济效益分析。结果表明:实施滇重楼"多年栽培,分期采收"技术间隔时间以3年为宜,每年每公顷收益为11.25万～33.0万元,采收时间以12月至翌年3月份为宜。     

低温对水稻小孢子的形成与发育影响的细胞学研究

水稻小孢子形成与发育对于环境条件影响较为敏感,特别是对高、低温尤为敏感,国内外曾有不少报道。本文对水稻在自然低温条件下小孢子形成和发育的过程,进行细胞形态和结构的观察,以探讨低温的敏感期的影响及其机理。     

海拔对滇重楼种子大小和数量的影响

种子大小和数量关系是植物繁殖对策研究的重要问题之一。为了解不同海拔下滇重楼(Pairs polyphylla var.yunnanensis)种子数量和大小的差异及其关系,以云南省普洱地区滇重楼为研究对象,对该地区景东(海拔1984 m)和镇沅(海拔1025 m)2个不同海拔点滇重楼种子数量与大小进行比较研究。结果表明:不同海拔下滇重楼果实内种子总数差异不显著(P0.05),但景东县滇重楼果实内饱满种子数量显著高于镇沅县(P0.05),败育种子数显著低于镇沅县(P0.01),种子百粒重以镇沅县高于景东县(P0.05);不同海拔下滇重楼种子败育与种子数量和大小的关系不一致,低海拔试验点种子败育率与种子数量呈极显著正相关关系(P0.01),而高海拔试验点种子败育率则与种子大小呈显著正相关关系(P0.05);不同海拔下滇重楼果实内种子数量与大小呈显著或极显著负相关,即滇重楼果实内种子数量与大小在不同海拔下均存在权衡关系,但海拔1025 m试验点的回归斜率显著低于海拔1984 m试验点(P0.05),表明滇重楼种子数量和大小之间的权衡关系对海拔的响应具有敏感性。     

不同海拔下滇重楼叶片与花萼光合特性

2013年7月对云南省昆明(海拔2100 m)和者竜(海拔985 m)2个不同海拔地区人工荫棚种植下滇重楼叶片和花萼的光合特性进行了比较研究。结果表明:不同海拔下滇重楼叶片与花萼净光合速率(Pn)日变化曲线均呈不明显的"双峰"曲线,光合午休出现在14:00左右,叶片与花萼Pn最高峰值分别出现在10:00和12:00,空气温度(Ta)偏高和相对湿度(RH)偏低分别是导致者竜和昆明地区滇重楼"午降"的主要因素;昆明地区滇重楼叶片和花萼日均Pn、Pnmax、LSP和初始量子效率较高,LCP、Rd较低,光合能力更高;昆明地区滇重楼花萼具有同叶片相似的光合特性,对光强的适应范围较大;但者竜地区滇重楼花萼Pnmax和LSP显著低于叶片,初始量子效率显著高于叶片(P0.05),对光强的适应范围较小,对弱光的利用能力更高;去除花萼后,滇重楼果实干重显著降低,且者竜地区果实干重减少量显著低于昆明地区(P0.05)。     

滇重楼植物的研究进展

滇重楼作为我国西南地区的道地药材,具有抗肿瘤、止血、免疫调节和镇静镇痛等药用价值。然而,对滇重楼的系统位置,分类学者各持不同意见,而且多年来人们对滇重楼过度地采挖,使各地野生资源遭到不同程度的破坏。本文综述了近年来滇重楼的研究现状,主要包括分类与系统、化学成分和药理活性、繁殖生物学以及遗传多样性等方面的工作;同时,提出了存在的问题和建议。将为今后更深入地开展滇重楼优质种质引种驯化,实现种质资源多样性的合理保护和可持续利用提供参考。     

滇重楼种子内源抑制物质的活性研究

以滇重楼种皮和胚乳为材料,用甲醇浸提得到种皮浸提液和胚乳浸提液,配制成浓度梯度为0.02、0.04、0.06、0.08g/mL的处理液,以蒸馏水为对照,研究不同浓度种皮和胚乳浸提液对受体植物白菜(油脂类)、小麦(淀粉类)、绿豆(蛋白类)种子发芽率、幼苗苗高和根长、抗氧化酶活性的影响,探讨滇重楼种子内源抑制物质的特性,以揭示滇重楼种子休眠的生理机制。结果表明:(1)滇重楼种皮和胚乳中均含有抑制种子萌发与幼苗生长的物质,且抑制作用大小表现为胚乳大于种皮。(2)3种受体植物幼苗对滇重楼种皮、胚乳甲醇浸提液的敏感性大小为白菜(油脂类)显著高于绿豆(蛋白类)和小麦(淀粉类)。(3)滇重楼种皮、胚乳甲醇浸提液对种子萌发及幼苗生长各项指标的抑制作用强度依次为:发芽率幼苗根长幼苗苗高鲜重。(4)滇重楼种皮、胚乳中的抑制物质均能够使3种受体植物幼苗产生生理响应,启动抗氧化酶体系,其中:随着滇重楼种皮甲醇浸提液浓度的升高,受体幼苗SOD与POD活性先升后降,CAT活性持续下降;胚乳甲醇浸提液处理后,受体幼苗SOD和POD活性较对照均显著增强,而CAT活性显著下降。研究认为,滇重楼种皮及胚乳甲醇浸提液均能够抑制受体植物种子萌发及幼苗生长,影响幼苗抗氧化酶活性,但滇重楼种皮与胚乳中所含抑制物在活性上存在差异。     

解有机磷细菌对滇重楼根茎、须根及根际土壤重金属元素的影响CSCD

探究接种不同解有机磷细菌后滇重楼根茎、须根及根际土壤中重金属残留量的变化规律,为滇重楼人工种植过程中重金属污染修复提供参考。通过室内盆栽接种试验,研究了在灭菌土壤接种不同解有机磷细菌对滇重楼根茎、须根及根际土壤中汞(Hg)、镉(Cd)、铅(Pb)、铬(Cr)、砷(As)5种重金属残留量的影响。与对照组(CK组)相比,接种不同解有机磷细菌对滇重楼根茎及须根中5种重金属残留量影响各不相同,对重金属Pb的修复效果最明显,其中三种菌(Bacillus mycoides、B.wiedmannii、B.proteolyticus)混合处理组(S7组)对滇重楼重金属的修复效果最佳。此外,单项污染指数和内梅罗污染指数表明,除B.mycoides处理组的土壤存在污染风险以外,其余处理组均达到清洁水平。同时,5种重金属元素在滇重楼根茎和须根中的富集能力各不相同,富集系数最大为Cd,最小为Cr, S7组滇重楼根茎中的富集能力相对较小。相关性分析表明,滇重楼根茎和须根中的Hg和Pb元素呈显著正相关(P<0.05),相关系数分别为0.761、0.811。综上,接种解有机磷细菌能够有效降低滇重楼根茎及须根中Hg、Pb和Cr元素的含量,其中S7组接种处理的效果最佳。     

滇重楼的psbA-trnH条形码分子鉴定研究北大核心CSCD

为探讨滇重楼药材鉴定新方法,本研究通过对重楼样品提取基因组DNA,PCR扩增叶绿体psb A-trn H序列并进行双向测序,所得序列经Codon Code Aligner拼接后,采用MEGA5.0软件进行序列比对,计算种内和种间遗传距离(K2P),构建邻接数(neighbor-joining tree)进行结果分析。研究表明,叶绿体psb A-trn H片段在滇重楼种内变异较小,平均K2P遗传距离为0.007,而滇重楼与其它重楼种间平均K2P遗传距离为0.025,滇重楼种间最大K2P遗传距离明显小于滇重楼与重楼属其它种内的最小K2P遗传距离。中药材DNA条形码鉴定系统比对和NJ树鉴定结果均表明psb A-trn H序列可区分滇重楼及其同属物种,且具有较好的稳定性和准确性,为保障临床安全用药提供了新的技术手段。     

重楼属植物的免疫血清学研究

以海南重楼(Paris dunniana),花叶重楼(P.marmorata),多叶重楼(P.polyphylla),凌云重楼(P.cronquistii),五指莲(P.axialis),滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)等六种重楼属植物的根茎为材料,提取分离其球蛋白组份作为抗原,免疫家兔得到相应的抗血清。通过免疫双扩散,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳、免疫吸收试验以及酶标免疫等方法,研究了重楼属上述六个种和变种的血清学行为以及他们之间的相互关系。在此基础上,用不加权算术平均对群法(UPGMA)经成聚运算,得到基于平均吸收相似系数(Sabs.mean.)和Jaccard's结合系数的两种表相图,这两种表相图的结果是一致的。花叶重楼与多叶重楼有较大的血清反应相似性,五指莲与滇重楼有最大的血清反应相似性。多型种P.polyphylla在形态上的较大变异与血清反应分析的结果是一致的,而且血清反应相似性分析支持了从形态分析得出的假设:Paris dunniana在重楼属的系统发生中是一比较原始的种。     

滇重楼的psbA-trnH条形码分子鉴定研究

为探讨滇重楼药材鉴定新方法,本研究通过对重楼样品提取基因组DNA,PCR扩增叶绿体psb A-trn H序列并进行双向测序,所得序列经Codon Code Aligner拼接后,采用MEGA5.0软件进行序列比对,计算种内和种间遗传距离(K2P),构建邻接数(neighbor-joining tree)进行结果分析。研究表明,叶绿体psb A-trn H片段在滇重楼种内变异较小,平均K2P遗传距离为0.007,而滇重楼与其它重楼种间平均K2P遗传距离为0.025,滇重楼种间最大K2P遗传距离明显小于滇重楼与重楼属其它种内的最小K2P遗传距离。中药材DNA条形码鉴定系统比对和NJ树鉴定结果均表明psb A-trn H序列可区分滇重楼及其同属物种,且具有较好的稳定性和准确性,为保障临床安全用药提供了新的技术手段。