植物胚胎学研究中石蜡切片的几种整体染色法

石蜡切片法应用于生物学的研究历史已久,至今仍为细胞学、组织学、胚胎学及组织化学等方面广泛应用的研究方法之一。我们在观察小麦和玉米的受精及胚胎发育过程中摸索出制作石蜡切片的三种整体染色方法,使常规石蜡切片法得到了简化并且效果良好。     

果蝇胚胎石蜡切片制作方法的改良

探索一种不用在卵壳上手工打孔、适用于果蝇胚胎石蜡切片制作的方法。实验前期对果蝇胚胎进行渗透化处理,后期用琼脂糖、明胶、石蜡3种包埋辅佐剂对胚胎进行聚集、包埋、切片,最后进行HE及PASM染色。渗透化处理后的胚胎用琼脂糖或石蜡聚集并包埋后所制切片HE染色均显示胚胎形态结构正常,背景干净,而琼脂糖聚集法所制切片PASM染色背景呈灰色,明胶聚集法所制切片HE染色和PASM染色背景均显杂色且胚胎出现形变。3种包埋辅佐剂中,琼脂糖和石蜡均适于果蝇胚胎结构的保存,石蜡聚集法所制切片2种染色背景均无杂色,因此最适合做包埋辅佐剂。渗透化处理和石蜡聚集法结合后的改良方法适合于大样本且高脂含量的果蝇胚胎石蜡切片的制备。     

成熟玉米秆组织结构切片方法的比较研究

于玉米成熟期选择健壮茎秆的基部第三节间为材料,采用徒手切片法、冰冻切片法、石蜡切片法、薄切片法等4种方法,比较不同方法的玉米茎秆组织结构切片质量,为研究玉米茎秆结构与其倒伏的关系奠定技术基础。结果表明:徒手切片法是获得成熟玉米秆组织结构切片较为方便、快速的方法,切片面积较大,适合大范围观察统计;冰冻切片法是获得成熟玉米秆组织结构较快的方法,切片面积较小,适合小范围观察;薄切片是获得高质量成熟玉米秆组织结构切片的最好方法,但切片面积太小,适合高倍数显微观察和小范围电镜扫描观察组织结构;石蜡切片不适合作为成熟玉米秆的组织切片方法。研究认为,徒手切片法是最适合成熟玉米秆组织结构观察研究的制片方法。     

一种新颖的抗原信号增强方法─BT法在免疫组织化学中的应用

本文报道了一种新颖的抗原信号增强方法在免疫组织化学中的应用。该方法的特点是利用生物素标记的酪氨（ＢＴ）结合到ＨＲＰ的催化位点上来达到增强信号的目的。本研究以冰冻切片及石蜡切片中ＡＢＣ法为对照,结合微波和蛋白酶消化预处理,采用ＢＴ法检测了人扁桃体石蜡切片标本中淋巴细胞ＩｇＤ的表达。结果表明该方法检测敏感性高,当一抗稀释至１：５０００时仍能测得ＩｇＤ的表达,与对照的ＡＢＣ法相比,检测敏感性成百倍地提高。该方法能将原先只能用于冰冻切片的单抗ＩｇＤ应用于石蜡切片中。本文还对该方法的可能机制进行了探讨。本研究提示ＢＴ法在病理检验和医学研究中有良好的应用前景。     

一种用于DAPI染色的方法--Steedman's wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedman's wax 包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法.Steedman's wax 作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5 μm的连续切片.Steedman's wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色.与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedman's wax 包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能.     

树脂包埋半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中的应用

目的探讨半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中的应用,寻找一种视神经形态学研究和疾病诊断的有效方法。方法健康Sprague-Dawley大鼠视神经分别行树脂包埋制成半薄切片与石蜡包埋制成石蜡切片,分别采用HE、甲苯胺蓝染色及髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组织化学方法染色,光学显微镜下观察并比较半薄切片与石蜡切片染色结果的差异。结果石蜡切片HE和甲苯胺蓝染色均显示视神经髓鞘不着色,MBP免疫组织化学染色示MBP阳性着色较重,着色较紊乱,髓鞘着色不清晰。半薄切片HE及甲苯胺蓝染色均显示髓鞘呈环形,着色清晰,颜色对比鲜明;MBP免疫组化染色结果可见髓鞘呈环形,非特异性染色不明显,阳性对比显著,可清晰显示髓鞘结构。结论半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中优于石蜡切片,可用于视神经疾病的诊断和研究。     

一种用于DAPI染色的方法Steedman＇s wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedrnan‘s wax包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法。Steedrnan‘s wax作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5μm的连续切片。Steedrnan‘s wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色。与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedrnan‘s wax包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能。     

树轮生态学研究中微树芯石蜡切片制作的方法探讨北大核心CSCD

树轮气候学及树轮生态学研究在国内外取得了长足进展,但对树轮与气候的响应机制缺乏深入的了解,迫切需要进行以微树芯石蜡切片为基础的树轮生态学研究。形成层活动监测从生理生态学角度出发,广泛用于树轮对气候变化响应的机制探讨研究中,然而目前还没有对微树芯石蜡切片制作的方法作详细的论述和探讨。该文通过对祁连圆柏(Sabina przewalskii)等5个不同树种微树芯石蜡切片的制作实践,对已有的植物石蜡切片技术进行改进,增加组织软化的步骤,并对其他步骤作了相应的调整,详细介绍了微树芯石蜡切片制作的方法,为树轮生态学、解剖学,以及木材解剖学关于木质化材料石蜡切片的制作方法提供参考。     

Improved method of obtaining micro-core paraffin sections in dendroecological research

树轮气候学及树轮生态学研究在国内外取得了长足进展, 但对树轮与气候的响应机制缺乏深入的了解, 迫切需要进行以微树芯石蜡切片为基础的树轮生态学研究。形成层活动监测从生理生态学角度出发, 广泛用于树轮对气候变化响应的机制探讨研究中, 然而目前还没有对微树芯石蜡切片制作的方法作详细的论述和探讨。该文通过对祁连圆柏(Sabina przewalskii)等5个不同树种微树芯石蜡切片的制作实践, 对已有的植物石蜡切片技术进行改进, 增加组织软化的步骤, 并对其他步骤作了相应的调整, 详细介绍了微树芯石蜡切片制作的方法, 为树轮生态学、解剖学, 以及木材解剖学关于木质化材料石蜡切片的制作方法提供参考。     

振荡法在组织石蜡制片中的应用

本文成功地把振荡法应用于组织石蜡制片中,采取鸡的各种组织,用常规、加温、振荡三种方法进行固定、脱水、透明和浸蜡,然后常规切片染色试验比较。结果表明,用振荡法从固定到浸蜡仪用2小时20分钟,提高功效10倍以上。具有传统方法所不及的简便、快速、切片薄及质量好等优点,尤其适用于临床病理检验的快速诊断。完全可以代替一般的快速石蜡切片和冰冻切片。     

观察比较贝母类生物碱分布的3种切片方法

目的:建立一种能更清楚有效地观察贝母鳞茎中生物碱沉淀分布及含量的切片方法。方法:以新疆贝母为供试材料,利用石蜡切片法、徒手切片法及改良切片法制备植物鳞茎组织切片;切片经改良碘化铋钾处理,并通过Mikroskop Primo Star X2005显微镜观察和比较3种不同切片中生物碱沉淀分布。结果:改良切片法处理的切片中生物碱沉淀分布观察清晰,可用于定性及定量分析,并且实验过程中试剂对生物碱的影响较小,操作方法简便、快速、有效。结论:贝母鳞茎生物碱的观测适合采用改良切片法制片。     

FISH检测宫颈脱落细胞与宫颈组织中hTERC基因制片方法的研究

目的:探讨FISH实验中用直接涂片法、盐水制片法、TCT制片法、低渗滴片法制片法和宫颈切片组织取材方法对于FISH成功率的影响.方法:收集2008年3月至2009年3月青岛大学医学院附属医院妇科162例宫颈脱落细胞标本及2008年5月至2009年3月手术切除或活检的宫颈组织63例,用荧光原位杂交(FISH)方法检测hTERC基因.结果:直接涂片法、盐水制片法、生理盐水法、TCT制片法和石蜡包埋组织切片法hTERC基因杂交成功率分别为58.3%,65%,55%,87.1%,85.7%,TCT制片高于其它四组;低渗滴片法背景干净度、细胞形态、裸核数量满意度最高;TCT制片法细胞数量满意率最高;石蜡包埋组织切片法荧光信号满意率最高.结论:在检测hTERC基因的宫颈癌筛查中,TCT制片法明显优于其他方法,而在指导宫颈病变及宫颈癌的治疗中,石蜡包埋组织切片法的染色体破坏最小,实际意义更大.     

改良的石蜡切片技术在基础生物学实验教学中的应用

石蜡切片技术是一项在生物组织学及病理学研究中常用的实验技术。设计“斑马鱼性腺组织石蜡切片”实验,并将改良的技术转化为适合本科基础生物学实验教学的内容。该实验分为组织样本的处理和切片的制备两部分,每部分2~3个学时。通过该实验,学生可以掌握石蜡切片技术的实验原理、实验方法及光学显微镜的使用,并为后续免疫组织化学以及原位杂交等一系列实验的开展奠定了基础。     

碱性磷酸酶钙-钴法染色的不同包埋方法比较

目的探讨石蜡切片、冰冻切片及碳蜡(聚乙二醇)包埋切片在碱性磷酸酶染色中的应用,综合分析几种组织处理方法的优缺点,以便在病理诊断及科研工作中能找到更适合的碱性磷酸酶染色方法。方法取新鲜乳腺组织及肝组织,每份标本各取3块组织,根据包埋方法的不同,分为3组:石蜡切片碱性磷酸酶染色、冰冻切片碱性磷酸酶染色、碳蜡包埋切片碱性磷酸酶染色。结果 3组切片均可见黑色碱性磷酸酶的存在,其中肝组织内显示碱性磷酸酶呈黑色,沿胆小管分布;乳腺组织内显示碱性磷酸酶呈黑色沉淀弥漫分布于乳腺间质中。结论碳蜡包埋切片在碱性磷酸酶染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,并弥补了常规冰冻切片和石蜡切片染色的缺点和局限性,在病理诊断及科研工作中具有一定的应用价值。     

两种脱钙法植被鼠尾病理切片的比较

目的探讨制作大鼠尾巴标本石蜡切片的方法。方法采用盐酸脱钙液运用两种脱钙方法制作大鼠尾巴标本石蜡切片。结果两种方法制作的石蜡切片完整、无破碎,HE染色观察组织结构细胞形态完整,核浆分明,红蓝适度。结论两种方法都能制作理想大鼠尾巴标本石蜡切片,可保证病理诊断质量。     

三种不同脂肪染色方法的比较

目的探讨碳蜡(聚乙二醇)包埋技术、冰冻切片及饿酸染色在脂肪染色中的应用,综合比较几种方法的优缺点,以便在病理工作及科研工作中能找到更适合的脂肪染色方法。方法取新鲜脂肪组织及肝组织,每份标本各取3块组织,分为A、B、C三组:A组和B组标本分别进行碳蜡包埋切片和常规冰冻切片,油红O法染色;C组以饿酸浸染组织块后进行石蜡包埋切片及眦复染。结果 A组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;B组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;C组切片脂肪滴呈黑色。结论饿酸染色和碳蜡包埋技术在脂肪染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,弥补了常规冰冻切片脂肪染色的缺点和局限性,在病理检验及科研中具有一定应用价值。     

基于改良石蜡切片技术的飞蝗胚胎浆膜表皮发育模式及形态变化观察

【目的】通过优化飞蝗Locusta migratoria胚胎石蜡切片制备技术,研究飞蝗胚胎发育时期浆膜表皮变化规律。【方法】通过优化飞蝗胚胎固定前处理、洗涤、脱水和透明等步骤,改良胚胎期石蜡切片制备技术;制备飞蝗胚胎发育第3-10天的石蜡切片,通过HE染色观察浆膜表皮发育规律;通过制备飞蝗发育第6-8天从卵孔端至卵尾端的纵切切片,观察飞蝗胚胎转旋时期的形态变化。【结果】飞蝗胚胎期石蜡切片技术优化后的操作步骤为:固定前Na Cl O预处理和打孔、洗涤30min、脱水30 min和透明30 min。通过此方法可获得表皮结构完整且清晰的胚胎期组织切片。在30℃条件下,飞蝗胚胎浆膜表皮及几丁质沉积形成于胚胎发育的第5天,在第8天时开始降解。飞蝗胚胎的转旋发生在第6-7天,伴随着浆膜和浆膜表皮的形态变化。【结论】本研究优化了飞蝗胚胎石蜡切片制备步骤,揭示了飞蝗胚胎浆膜表皮及胚胎转旋的发育模式,为昆虫胚胎发育的研究提供了基础资料。     

腹水离心石蜡切片联合免疫组化检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌的诊断价值

目的:探讨腹水离心石蜡切片及免疫组织化学在卵巢癌诊断中的价值.方法:对30例腹水标本离心收集细胞沉渣,经自动脱水机脱水后石蜡包埋,切片进行免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67表达.结果:腹水离心石蜡切片细胞形态清晰,着色鲜艳,免疫组织化学阳性定位准确.结论:腹水离心石蜡切片联合免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌具有临床诊断价值.     

长期十二指肠炎症对帕金森病致病蛋白pSer129-α-syn沉积的影响

目的 探究慢性十二指肠炎症对帕金森病致病蛋白pSer129-α-syn(磷酸化的α突触核蛋白)积累的影响,为帕金森病的机制研究提供新的思路。方法 利用给予野生型雄性Wistar大鼠口饲半胱氨酸盐酸盐的方法建立慢性十二指肠溃疡模型,利用十二指肠石蜡切片HE染色法评估十二指肠绒毛状态及炎性细胞浸润情况;利用十二指肠石蜡切片免疫组化法评价十二指肠局部致病蛋白pSer129-α-syn的聚集情况;采用脑部矢状切石蜡切片免疫组化法探讨脑部海马区致病蛋白pSer129-α-syn的聚集情况。结果 长期慢性十二指肠溃疡能导致致病蛋白pSer129-α-syn在十二指肠局部少量聚集,也可以引起脑部致病蛋白pSer129-α-syn的积累。结论 长期慢性十二指肠溃疡可以增加帕金森病的致病蛋白pSer129-α-syn在肠道及大脑中的积累。     

致倦库蚊主要组织结构的石蜡切片观察

【目的】蚊虫是传播人类多种疾病的重要媒介害虫, 对其组织形态学的认识是开展众多领域研究的基础。本文通过研究致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus成虫组织结构及形态, 为媒介蚊虫的抗药性研究及有效防治提供基础材料。【方法】采用改进的石蜡切片法和HE染色, 结合活体内脏器官解剖及光学显微镜观察, 从形态学和组织学水平对致倦库蚊组织结构做详尽展示。【结果】获得结构完整、 染色清晰、 定位准确的消化排泄系统、 生殖系统、 神经系统、 呼吸系统等HE染色石蜡切片。【结论】探讨了改进制片和染色过程中一些步骤及注意事项。研究结果为利用原位杂交、 免疫组化等方法研究蚊虫体内抗药性基因的准确定位及基因功能分析提供了可靠的基础。