我国盾叶薯蓣居群遗传结构分析

利用随机扩增多态DNA(RAPD)标记,分析研究了中国11个盾叶薯蓣居群82个个体的遗传多样性与遗传结构,15个寡聚核苷酸引物扩增共得到108条带,其中96条为多态带,占88．89％。Shannon多样性指数(I)为0．3093,居群水平的变异从0．1564到0．3098,物种水平的Nei基因多样度(h)为0．2499,居群水平的变化范围为0．1607到0．2137。遗传变异分析表明,物种水平的基因分化系数Gst为0．3415,居群间的基因流Nm为0．9641,居群间遗传交换小。分子方差分析(AMOVA)表明,居群内变异为68．96％,地区间变异为19．45％,居群问变异为11．58％。聚类结果以长江为界,将盾叶薯蓣分为南北两个大类群。研究结果对盾叶薯蓣种质的迁地保护有重要意义。     

中华鲟性别相关的扩增片段长度多态性分子标记筛选

性别鉴定是生产养殖和物种保护中常用的技术。中华鲟Acipenser sinensis是我国特有的一种大型海河洄游性鱼类,已极度濒危。由于中华鲟性成熟时间长,缺乏第二性征,基于外部特征难以进行性别鉴定,因此,筛选中华鲟性别特异性分子标记具有重要意义。利用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记,用10条Eco R I-ANN引物和8条Mse I-CNN引物组成的80对引物,对9尾雄性和15尾雌性中华鲟个体进行PCR扩增和毛细管电泳荧光分型,检测其基因组DNA多态性,寻找与其性别相关的分子标记。在100~500 bp范围,共获得864个位点,其中具有多态性DNA位点411条,多态性位点比例为48.58%,并未发现雌雄特异性位点。但发现33个位点在雌雄个体中的比例存在较大差异,聚类分析显示大部分雄鱼聚为一支,雌鱼聚为一支,从而推断这些位点可能与中华鲟性别具有密切相关性。该研究首次尝试在中华鲟基因组中寻找性别特异性的AFLP分子标记,尽管未找到特异性标记,但这些数据为进一步研究中华鲟性别相关基因和性别决定机制奠定了基础。     

用AFLP分子标记探讨吴茱萸的遗传多样性

用AFLP标记分析研究吴茱萸与其变种石虎和疏毛吴茱萸之间的遗传多样性.采用AFLP技术,从18对引物中筛选出3对引物.对19株不同地域的3种吴茱萸AFLP指纹图谱进行了分析,计算不同品种间的遗传距离和构建吴茱萸的聚类分析树状图.3对引物共扩增出93条带,其中57条(61.3%)呈多态性,吴茱萸种质内遗传距离为0.059～0.765;在相似系数0.48的水平上.19份吴莱萸材料可以大致分为2个类群.吴茱萸不同品种问遗传距离差异较大,遗传分类在一定程度上与传统的分类方法是一致的,这暗示遗传变异与地域分布有相关性.     

荧光标记DNA扩增片段长度多态性方法的改进

采用常规PCR试剂和合成的接头和引物,其中MseⅠ引物为荧光标记物FAM标记,并对扩增片段长度多态性(AFLP)程序进行了改进,优化了PCR反应和电泳条件,建立了一个新的、有效的反应体系,降低了实验费用,经比较实验结果与AFLP荧光标记试剂盒的实验效果一致.     

广东地区嗜肺军团菌的扩增片段长度多态性分析

【目的】了解广东部分地区2002~2007年环境水中嗜肺军团菌的基因型及遗传学关系。【方法】参考欧洲军团菌感染工作组（the European Working Group for Legionella Infections, EWGLI）制定的分型草案（1.2版）,采用PstⅠ酶对我室保存的2株标准菌株及41株不同时间、不同地点的嗜肺军团菌环境分离株进行扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism, AFLP）分析,电泳图谱与EWGLI进行比对。【结果】AFLP分型结果稳定,重复性好;43株嗜肺军团菌,其不同来源菌株呈现多态性分布,经AFLP分析得到33个基因型,辨别力指数为99.79%,其中Kingmed AFLP 011为优势基因型。按Dice系数≥0.8,可分为18个群,Kingmed AFLP D群为优势群,占总菌株数的34.88%。由电泳图谱的相似性,初步推断存在EWGLI 001 Lugano型、002 Lugano、012 Rome、013 London、014 London型、015 Dresden型、021 Lyon等7个基因型,以及多个未报道的新基因型。【结论】广东地区嗜肺军团菌的基因型十分丰富,AFLP技术是其分子流行病学研究的有效手段。     

盾叶薯蓣的栽培技术研究

盾叶薯蓣是一种极具开发潜力的药物资源。从根茎繁殖 ,种子繁殖 ,田间管理 ,病虫害防治等几个方面详细总结了盾叶薯蓣的人工栽培技术。     

盾叶薯蓣营养器官薯蓣皂甙元含量的动态变化

利用高效液相色谱(HPLC)法对盾叶薯蓣营养器官特别造根状茎中薯蓣皂甙元含量的动态变化、品种之间的差异以及雌雄株之间的差异进行了研究。结果表明:实生苗根状茎中薯蓣皂甙元的含量,2年生高于1年生;根茎营养繁殖的2年生根状茎中皂甙元的含量高于1年生的含量;花叶品种的含量高于绿叶品种的含量;雄株的含量比雌株的含量高。在地上的缠绕茎和叶中没有检测到薯蓣皂甙元。由根茎繁殖的1年生根状茎前期皂甙元含量增加缓慢,后期增加较快;2年生根状茎盛花期含量最高,开花后期含量最低,随后含量逐渐增加。为此应在花叶品种中选择产量高、抗性强的品种作为栽培品种。合适的采挖期仍以地上缠绕茎枯萎期为宜。     

三例小麦细胞质雄性不育系线粒体DNA的扩增片段长度多态性分析

细胞质雄性不育是小麦杂种优势利用的重要途径,为了鉴定3例小麦雄性不育系的细胞质类型,对其线粒体DNA(mtDNA)进行扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析。文中利用差速离心法和不连续蔗糖密度梯度超速离心法提取纯化小麦线粒体。结果表明:通过该提取方法获得的mtDNA,其质量和纯度能够满足PCR反应和遗传学分析。在64对选扩引物中,筛选到了4对特异性引物,其中引物E1/M7在ms(Kots)-90-110不育系扩增出3条特异条带;引物E4/M2在ms(Ven)-90-110不育系扩增出2条特异条带;引物E7/M6在ms(S)-90-110不育系中扩增出2条特异条带;引物E6/M4在ms(Kots)-90-110不育系中扩增出2条特异条带。这些特异引物可以用来作为鉴定具有粘果山羊草Aegilops kotschyi、偏凸山羊草Ae.ventricosa、斯卑尔脱小麦Triticum spelta 3类不育细胞质型小麦雄性不育系的细胞质分子标记,为研究小麦细胞质雄性不育机理奠定了分子基础。     

小花盾叶薯蓣甙的酶降解

从小花盾叶薯蓣(Dioscorea parviflora C. T. Ting)的新鲜根状茎中分离到一个新的呋甾烷型配糖体,命名为小花盾叶薯蓣甙(parvifloside) (1),其结构通过波谱和化学方法鉴定为:(25R)-26-O-β-glucopyranosyl-furost-5-en-3β, 22ξ, 26-triol 3-O-β-D-glucopyranosyl (1→3)-β-D-glucopyranosyl (1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-β-D-glucopyranoside.化合物1在纤维素酶粗酶和β-葡萄糖苷酶中进行水解,得到降解产物2-7.对1的酶解现象进行了讨论.同时,对所分离的甾体皂甙的抗稻瘟霉菌活性进行了初步筛选.     

小花盾叶薯蓣甙的酶降解

从小花盾叶薯蓣 (DioscoreaparvifloraC .T .Ting)的新鲜根状茎中分离到一个新的呋甾烷型配糖体 ,命名为小花盾叶薯蓣甙 (parvifloside) (1) ,其结构通过波谱和化学方法鉴定为 :(2 5R)_2 6_O_β_glucopyranosyl_furost_5_en_3β ,2 2 ξ ,2 6_triol 3_O_β_D_glucopyranosyl (1→ 3)_β_D_glucopyranosyl (1→ 4 )_[α_L_rhamnopyranosyl (1→ 2 ) ]_β_D_glucopyra noside。化合物 1在纤维素酶粗酶和 β_葡萄糖苷酶中进行水解 ,得到降解产物 2 - 7。对 1的酶解现象进行了讨论。同时 ,对所分离的甾体皂甙的抗稻瘟霉菌活性进行了初步筛选。     

111份大薯种质资源遗传多样性的AFLP分析

采用AFLP分子标记方法对收集于6省不同地区的111份大薯种质资源进行遗传多样性分析。筛选到的8个AFLP引物组合扩增到1291个位点,其中1286个是多态性位点。利用多态性信息含量(PIC)、标记指数(MI)和解析强度(RP)分析不同引物组合的标记效率,获得引物的PIC平均值为0.22,MI平均值为35.67,RP平均值为50.50,表明引物扩增位点的高多态性和对大薯种质资源具有强辨别能力,其中引物E-AAC/CAG-M(PIC 0.24、MI 38.56、RP 56.35)具有较高的标记效率。111份大薯种质的遗传相似系数(GS)在0.30~0.82之间,平均为0.58,表明大薯种质资源的遗传相似性较低。采用UPGMA对大薯种质进行聚类分析,遗传相似系数在0.54时,111份材料被划分为4个类群和3个单独的分支,不同地区来源的大薯材料在聚类图中没有明显界限。     

基于SRAP标记的山药种质资源遗传多样性分析

目的:研究我国山药种质资源遗传多样性,为合理利用资源和开展选育种工作提供理论依据。方法:以国内94份山药种质资源为材料,采用SRAP标记并通过NTSYS2.10软件进行SHAN聚类分析、PROJECTION主成分分析;利用POPGENE软件估算遗传多样性参数。结果:从49对SRAP引物中筛选出30对能产生稳定清晰可辨的扩增产物的引物,共扩增出754条DNA带,其中多态性条带616条,占总条带的81.7%。聚类结果表明:当遗传相似系数(GS)为0.822时,可将94份资源分为5类:第Ⅰ类20份、第Ⅱ类43份、第Ⅲ类7份、第Ⅳ类3份、第Ⅴ类21份。第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ类分别为薯蓣、褐苞薯蓣、山薯和参薯。主成分分析结果显示:第一与第二主成分可解释88.34%(82.10%和6.24%)的遗传总变异。遗传多样性参数分析表明:比较5个遗传多样性参数值,5个群体的遗传多样性水平表现为Ⅰ>Ⅴ>Ⅲ>Ⅱ>Ⅳ,第Ⅰ类(薯蓣)遗传多样性水平高;山药遗传群体间遗传分化系数为51.88%,大部分差异存在于群体之间,群体间遗传分化高。结论:山药种质资源丰富且群体遗传分化高,有利于山药新品种的选育。SRAP标记可有效应用于山药种质资源的鉴别和遗传多样性分析。通过DNA指纹鉴定技术鉴别山药品种具有重要性与紧迫性。     

Molecular Polymorphism of the Wheat Leaf Rust Fungus in Morocco Using Amplified Fragment Length Polymorphism

The genetic variability and collection structure of the wheat leaf rust fungus Puccinia recondita collected from four agro‐ecological areas of Morocco, Abda‐doukala, Chaouia‐Tadla, Gharb and Tangérois were investigated by amplified fragment length polymorphism (AFLP) markers. A set of five AFLP primers combinations which generated 253 polymorphic loci were used. Hierarchical partitioning revealed that bread wheat collections of Puccinia recondita form a single collection. No significant variation was observed between durum wheat collections of Puccinia recondita; they maintained most of the genetic variability within rather among collections. The distribution pattern of genetic variation of Puccinia recondita collections seems to be the result of high gene flow and the mixed reproduction system.     

不同倍性盾叶薯蓣营养器官解剖结构比较

运用石蜡切片法对三个倍性盾叶薯蓣营养器官的解剖结构进行比较研究。结果表明,不同倍性盾叶薯蓣的结构差异主要表现在叶片厚度、栅栏组织厚度、栅栏组织厚度/海绵组织厚度(P/S)、栅栏组织厚度/叶片厚度(P/L)、茎维管束中导管所占比例(VR)以及根状茎周皮厚度,其中栅栏组织厚度、P/S、P/L和VR在三倍体植株中表现最高,叶片厚度和周皮厚度则是四倍体植株表现最高,多倍体植株的表现总体优于二倍体植株。     

Amplified Fragment Length Polymorphism Fingerprinting Differentiates Genetic Diversity of Xanthomonas oryzae pv. oryzae from Northern Thailand

Thirty isolates of Xanthomonas oryzae pv. oryzae were collected from different rice‐producing area in northern Thailand. For the assessment of genetic variation of bacterial blight pathogen, 19 primer combinations of amplified fragment length polymorphism primer system were screened to evaluate the genetic diversity and five combinations were selected according to their producibility, number of scorable bands and differences detected among representative isolates. Six lineages of X. oryzae pv. oryzae were identified in northern Thailand base on location. Lineage A composed of members from two provinces, Phitsanulok and Chainat. Lineage B was from various provinces as Sukhothai, Phetchaboon, Phicit, Phayao and Phrae. Lineage C was from Phitsanulok and Phrae. Lineage D comprised of members from Phrae, Chiangmai and Chiangrai while the lineage E composed of isolates from Sukhothai and Phitsanulok. The final lineage, lineage F, was from Lampang. Lineages B and D were the most widely distributed while lineage E seemed to be restricted to specific planting area. Wide distribution of the pathogen might be due to seed allocation and germplasm exchanged. Analysis showed that diversity of pathogen is due to single field and cultivars‐specific effects. The results of this study will facilitate the use of effective bacterial blight resistance gene in northern Thailand.     

Using Amplified Fragment Length Polymorphisms (AFLP) to Study Genetic Variability in Several Freshwater Rotifer Species

We have used amplified fragment length polymorphisms (AFLP) to investigate the potential of this technique as a tool to measure genetic variability in eight species of freshwater rotifers: Brachionus calyciflorus, Lecane bulla, L. luna, L. quadridentata, Plationus patulus, Philodina acuticornis odiosa, Rotaria neptunia, and R. rotatoria. We used nine combinations of oligonucleotides. We observed a total of 806 amplified bands, 798 polymorphic and 8 monomorphic. The data were analyzed using cluster analysis with UPGMA, first within each set of oligonucleotide combination and finally using all nine combinations. Our best dendrogram clearly separated monogononts from digononts, and grouped the species of monogononts in the two genera. However, it grouped R. neptunia with P. acuticornis odiosa rather than with R. rotatoria. These results are discussed in view of recent works in the literature measuring genetic variability and discussing the phylogeny of the Rotifera.     

中国石榴栽培群体遗传多样性的荧光AFLP分析

以中国山东、安徽、陕西、河南、云南和新疆6个栽培石榴群体的85个品种类型为试材,利用荧光标记AFLP对中国石榴群体遗传多样性进行了研究。结果表明：8对引物组合在种级水平扩增的多态性位点数范围从135～185个不等,平均为158.25个,多态位点百分比范围为62.5%～86.11%,平均为73.26%,说明中国石榴品种遗传多样性较为丰富;石榴品种种级水平遗传多样性大于群体水平,6个群体的遗传多样性依次为河南群体〉新疆群体〉陕西群体〉安徽群体〉山东群体〉云南群体,并且具有显著性差异;群体间的遗传分化系数GST为0.2018,说明石榴遗传变异主要存在群体内,群体间的遗传变异占总变异的20.18%,根据基因分化系数,测得的基因流Nm为1.9027,说明中国石榴群体间存在适当的基因交流;UPGMA聚类分析结果表明,同一群体的大部分品种都聚在一起,但同时存在部分基因交流。所有遗传参数表明,中国石榴栽培品种遗传多样性较为丰富,其中河南群体遗传多样性显著高于其他群体,在中国石榴品种选育中具有更为广阔的应用前景。     

优化黄姜中甾体皂甙元测定的研究

对传统的黄姜中甾体皂甙元的测定方法进行了改进。提取甾体皂甙元时采用微量样品以氯仿浸提代替传统的回 流抽提法,以Liebemann-Barcharad试剂显色,用分光光度法测定。测定结果准确,高效低成本且步骤简单,应用广泛。