改良Trizol法快速提取棉叶片总RNA

棉叶片组织中存在含量较高的棉酚、多糖等次生代谢物质,使用单纯的Trizol很难获得高质量的RNA。首次采用改良Trizol法成功从棉叶片中快速的提取了总RNA,其所提的总RNA完整性好、纯度高,能进一步满足分子生物学的试验要求。     

富含多糖草莓果实总RNA提取方法的改进

以草莓果实为模式实验材料,将Chomczynski提出的常规RNA提取方法与Kenneth等提出的改进方法相结合,并做了进一步改进,建立了一种简单实用的从富舍多糖的植物材料中提取总RNA的方法。先利用冷的丙酮去除色素类物质,再利用乙二醇丁醚去除多糖,从而有效克服了从富含色素和多糖娄物质的植物材料中提取RNA的困难;获取的RNA样品在纯度和浓度上都可以满足PCR及Northern杂交等分子生物学实验的要求。     

富含多糖猕猴桃果实组织中总RNA提取方法的改进

ImprovementofMethodforExtractingTotalRNAfromKiwifruitTissueWithRichPolysaccharidesChENKun-Song,XUChang-JieZHANGShang-Long(DepartmentofHorticultrue,ZHejiangAgriculturalUniversity)Hangzhou310029)植物生长发育是一系列基因表达的结果,而这些基因的表达可为外界环境信号或内部因子如植物生长调节物质等所启动。分离和提纯植物体内的总RNA,并用之合成cDNA,进行Nolthern杂交和蛋白质体外翻译试验等,是从分子水平揭示植物生长发育规律的重要试验手段之一。有关植物组织RNA的提取方法已有不少报道[1～7]。但…     

四种副溶血弧菌总RNA提取方法的比较

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌.提取高质量的RNA是研究副溶血弧毒力基因表达与其致病性和环境适应性的基础.本研究分别用SDS法、Trizol法,PureLinkTM RNA Mini Kit和Uniq-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取六株副溶血弧菌的总RNA,用普通琼脂糖凝胶电泳和核酸测定仪检测RNA的质量,并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较.研究结果表明,Trizol法和PureLinkTM RNA Mini Kit简单快捷,提取的总RNA完整性好,纯度高,可用于后续实验的分子生物学研究;而Trizol法更适用于普通实验室细菌RNA的提取.     

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较.结果表明,Trizoi法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法.     

改良Trizol法提取血浆游离RNA

[目的]建立一种成本低、得率高的血浆游离RNA的提取方法。[方法]分别采用传统Trizol法、改良Trizol法、试剂盒法提取200μL健康成年人血浆中游离RNA,并比较三种方法所得RNA的浓度、纯度及大小片段RNA得率的差异。[结果]改良Trizol法所得RNA浓度是常规Trizol法的21. 7倍(P <0. 01),是试剂盒法的6. 4倍(P <0. 01);三种方法所得RNA纯度(A₂₆₀/A₂₈₀)无显著差异;采用RT-q PCR方法检测血浆游离RNA大小片段的回收率,外参秀丽线虫miR-39-3p(cel-miR-39-3p)代表小片段RNA,GAPDH代表大片段RNA,改良Trizol法检测Cq平均值分别为15. 64和33. 34,平均低于常规Trizol法2. 05～3. 62个Cq,低于试剂盒法0. 32～3. 34个Cq。[结论]改良Trizol法提取血浆游离RNA相较于常规Trizol法提高了10～20倍,增加了得率。     

铁皮石斛花总RNA提取方法的比较研究

为筛选铁皮石斛(Dendrobiumofficinale)花总RNA提取方法,对8种提取方法进行了比较研究,包括改良CTAB-LiCl法(M1)、改良CTAB-异丙醇法(M2)、改良SDS-LiCl法(M3)、改良SDS-异丙醇法(M4)、多糖多酚植物RNA提取试剂盒法(M5)、柱式植物RNAout 2.0试剂盒法(M6)、RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒法(M7)和Biospin多糖多酚植物总RNA提取试剂盒法(M8)。结果表明,以M4和M5提取的总RNA带型清晰,完整性好,A260 nm/A280 nm为1.8～2.0,A260 nm/A230 nm大于2.0,RNA产率分别为(159.45±1.45)和(170.84±3.53)μg/g。利用M4、M5提取霍山石斛、金钗石斛、鼓槌石斛和美花石斛花的总RNA,样品的完整性、浓度和纯度均符合质量要求。以M4、M5提取的铁皮石斛总RNA为模板,扩增Actin基因片段,扩增产物大小与预期一致且条带单一。这说明M4、M5方法操作简便,结果重复性好,能够较好地提取石斛属植物花的总RNA。     

白腐真菌总RNA提取方法的研究

为寻求一种简便有效的白腐真菌总RNA的提取方法,在实验中分别采用Trizol试剂盒法、CTAB-LiCl法、硅藻土-STE法进行操作,琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱检测提取的RNA。通过对提取的总RNA实验操作过程、浓度、纯度以及完整性等方面的比较与分析,得出硅藻土-STE法是白腐真菌总RNA提取的理想方法。     

文心兰RNA不同提取方法比较

目的:为了得到高效的文心兰RNA提取方法和高质量的RNA,为后续文心兰分子生物学研究奠定基础.方法:选取文心兰“黄金2号”(Oncidium Gower Ramsey‘Gold2’)叶片和根组织为材料,对SDS-LiCl法、改良CTAB-NaAC法和改良CTAB-LiCl法和总RNA提取效果进行了比较研究.结果:改良CTAB-LiCl法得到的RNA样品纯度较高,完整性好,经电泳检测条带清晰无明显降解,28S条带的亮度是18S条带亮度的2倍,从叶片和气生根组织中提取RNA的OD260/OD280比值分别为1.797和1.787,提取率分别为33.07μg/g、29.07μg/g.以此RNA为模板进行RT-PCR反应,能获得特异条带.结论:改良CTAB-LiCl法是一种高效的文心兰RNA提取方法,所得样品RNA适合进一步的分子生物学研究.     

一种从动物组织中提取高质量总RNA的方法

RNA提取技术是分子生物学研究中经常应用的最重要的实验技术。简要介绍了一种高纯度、高产量的从动物组织中提取总RNA的方法．该方法具有实用性强、重复性好的特点。提取的RNA无DNA等污染物,并且其产量、纯度完全能满足分子克隆和基因表达研究的需要。利用此方法提取牛组织的总RNA,进行了NRDR基因在牛组织中的表达分布研究。     

一种改进的富含多糖的芒果组织中完整总RNA提取方法

2次用0.25体积无水乙醇和0.11体积的5 mol·L-1醋酸钾溶液(pH 4.8)去除多糖,并用硼酸和聚乙烯吡咯烷酮去除多酚,成功地从0.2～0.3 g富含多糖和多酚的芒果嫩绿色、砖红色和转绿期的叶片以及果皮和果肉组织中提取到完整总RNA,所提取的RNA在体外能成功进行反转录合成cDNA.此法的全过程共需要22～24 h.     

改良尿素-氯化锂方法提取成熟小麦种子总RNA

为了分离提取成熟小麦种子总RNA,去除多糖等杂质的严重干扰,本实验对尿素氯化锂分离RNA的方法做了三个方面的改进:一、去除成熟种子的胚(含大量麦胚凝集素等糖蛋白),发现裂解物的黏稠度明显下降;二、在裂解粗提物中加入CTAB至终浓度为02%,可去除大部分多糖;三、异丙醇沉淀RNA之后,充分溶解,离心去除残留的不溶性多糖等杂质。结果表明:所提取的成熟小麦种子RNA的纯度和产率都有明显提高 。     

一种适合从柑橘果皮提取总RNA的方法

柑橘果皮由于富含果胶、酚类物质等干扰RNA分离的物质,较难提取到纯度高的RNA。本试验建立了一种适于从柑橘果皮提取RNA的方法,从脐橙和蕉柑两种柑橘的果皮提取总RNA,经凝胶电泳、紫外分光光度法检测所提RNA的品质。研究结果表明,该法所提RNA条带清晰、无降解。OD260/OD280接近2.0,具有较高的纯度。RT-PCR试验结果进一步表明,该法提取的RNA纯度高,完全能够用于后续的分子生物学研究。     

苏云金芽胞杆菌内生质粒提取方法的改进

改进了苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）内生质粒提取技术,提取了Bt库斯塔克亚种、以色利亚种和一株对鳞翅目害虫有活性的野生菌株的质粒,利用琼脂糖凝胶电泳分析了质粒图谱,进一步检测了质粒的浓度与纯度。实验结果表明,该方法与传统技术相比,操作简单、耗时短,提取的质粒纯度高、条带清晰,染色体DNA污染较少。为Bt杀虫基因克隆、质粒特性分析等研究创造了有利条件。     

从荞麦中提取总RNA的有效方法

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明,其28S RNA与18S RNA的比值约为2：1,紫外吸收值A260/A290为1.91-2.06,产率为69.2-87.5μg RNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT-PCR和cDNA文库构建等的需要,是一种高效的荞麦RNA提取法。     

一种从富含多糖的玉米幼穗中提取RNA的方法

介绍了一种大量提取玉米(Zea mays L.)幼穗总RNA的有效方法。由于玉米幼穗富含多糖, 用普通的RNA提取方法和Trizol很难获得高质量的RNA。在热酚法提取RNA的基础上, 通过在提取缓冲液中加入低pH值的醋酸钾来去除多糖。所得到 的RNA获得率高, 质量好, 条带完整, 实验证明可直接用于RT-PCR、微阵列等各项后续分子生物学实验。     

一种从富含多糖的玉米幼穗中提取RNA的方法

介绍了一种大量提取玉米(Zeamays L.)幼穗总RNA的有效方法。由于玉米幼穗富含多糖,用普通的RNA提取方法和Trizol很难获得高质量的RNA。在热酚法提取RNA的基础上,通过在提取缓冲液中加入低pH值的醋酸钾来去除多糖。所得到的RNA获得率高,质量好,条带完整,实验证明可直接用于RT-PCR、微阵列等各项后续分子生物学实验。     

超声波提取番茄果实中类胡萝卜素条件的优化

比较不同方法提取番茄冻干粉中类胡萝卜素的结果表明,超声波提取效率最高,以丙酮/石油醚(2:1)作提取剂,在超声波功率为100W,水浴温度30℃下提取30min能充分提取类胡萝卜素.     

一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法

在总核酸提取方法(PS法)的基础上,经多次实践改进,得出一种以高盐低pH的HAc-NaAc缓冲体系提取总核酸的简便方法,可以从富含多糖、多酚时猕猴桃叶片和花蕾中提取同时含有DNA和RNA的总核酸.所得的总核酸在LiCl溶液中选择性沉淀RNA,从而有效地分离出DNA和RNA样品.紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳分析表明,所提取的DNA和RNA具有较高的纯度和完整性.通过样品DNA的PCR和样品RNA的RT-PCR,认为所提取的DNA样品和RNA样品能够满足分子生物学试验的基本要求.