膜分离后的儿茶色素染发性能研究

本文采用聚偏氟乙烯膜提纯天然儿茶色素,结果表明膜分离法具有较好的分离效果.考察了染色温度,时间,pH值及媒染剂浓度等对白色牦牛毛染色效果的影响.结果表明,天然儿茶色素对白色牦牛毛具有直接染色效果,可染成棕色系列.锌离子可使毛发颜色偏向栗子色,铁离子和铜离子可使毛发颜色偏向黑色.其中温度与媒染剂浓度是影响颜色的重要因素.     

中空纤维微孔滤膜(PVDF)在发酵行业生产中的应用

介绍了膜分离技术在氨基酸、维生素B12 、抗生素、丙烯酰胺水合液等生产中的应用 ,并着重介绍了聚偏氟乙烯中空纤维微孔膜在发酵液精制与菌体浓缩中的应用。特别是所采用的TWF双向流工艺流程 ,大大提高了膜的工作效率 ,尤其适用于发酵液等较黏稠液体的过滤与精制。     

SMA基微孔膜固定化β-半乳糖苷酶的研究

以超临界二氧化碳（SCCO2）为分散介质在聚偏氟乙烯（PVDF）微孔膜表面和孔内进行马来酸酐和苯乙烯的接枝共聚,合成出超高分子量的苯乙烯/马来酸酐交替共聚物（SMA）基微孔PVDF膜。以SMA基PVDF膜为载体通过酸酐基和酶分子上的氨基偶联,制备出具有酶催活性的功能性分离膜。考察了影响酶固定化的因素,确定其最佳固定化条件为: 温度,4oC;pH,8.2; 酶/膜,1:10;反应时间,6h。固定化酶膜的最适温度为55oC,最适pH为7.8,均比自由酶稍高;Km（0.3mM/L）与自由酶接近。固定化酶膜活力达13.5 U/cm2 膜, 比活为280.0 U/mg 蛋白,蛋白载量为68.2 g/cm2 膜,相对活力为89.0%。固定化酶膜表现出良好的操作稳定性和储存稳定性,SMA基PVDF微孔酶膜超滤制备低乳糖牛奶实验表明该技术应用前景广阔。     

超滤膜分离纯化珊瑚藻溴过氧化物酶

利用超滤膜对珊瑚藻中溴过氧化物酶(EC 1.11.1.18,分子质量740kDa)进行分离纯化,对膜的截留分子质量、操作压力、起始蛋白质浓度、搅拌速率、pH、离子强度等条件进行了优化。超滤分离纯化最优条件为:截留分子质量为100kDa的聚偏氟乙烯(PVDF)膜,操作压力为0.02MPa,搅拌速率为600r/min,起始蛋白质浓度为0.1g/L,pH=6.0。对粗酶液先进行热沉淀纯化,再进行超滤纯化,溴过氧化物酶被纯化了21倍,比活为212U/mg,酶活回收率为96%。     

PVDF膜在电印迹法中的应用

本文介绍的是聚偏二氟乙烯膜（Polyvinylidenedifluoride,PVDF）在电印迹法中的应用,即将蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电沪后的条带电转移到PVDF膜上,随着蛋白质的转移,蛋白质在凝胶上的相对位置将在膜上得到相对的反映,然后将膜上所需蛋白质条带切割下来,直接可以用于N－未端序列分析及总氨基酸组成分析。该方法无需做到蛋白质的完全纯化,所以方法简单快速,所需样品量极少。     

外源乙烯对桃果实微粒体膜Ca2+-ATPase活性和膜脂过氧化水平的影响

以‘迎庆’桃果实为材料,研究了经外源乙烯(50μL／L)处理12h后,在常温(25℃)下贮藏过程中,果实微粒体膜Ca^2 - ATPase活性和膜脂过氧化水平的变化。结果表明：外源乙烯促进果实内源乙烯的生成,刺激膜Ca^2 - ATPase活性先上升而后下降,同时加速超氧自由基的产生．提高膜脂过氧化产物丙二醛含量．增强了膜脂过氧化作用;钙调素拮抗剂二氟拉嗪(TFP)和钙通道阻塞剂异博定(VER)均在一定程度上抑制乙烯诱导的上述效应,这表明细胞内Ca^2 和CaM参与了外源乙烯反应。     

一种家用收集和保存尿液蛋白质的方法

尿液是研究疾病早期标志物的重要来源.大规模收集尿液样本,建立尿液生物样本库具有长远的科学意义.本实验室曾提出用膜来吸附尿液蛋白质并干燥真空保存的方法.该方法具有经济便捷、占用存储空间小、样本可室温保存等特点,但其所需设备以及操作,仅适应于实验室.为方便全国各地的患者在家自行收集、保存尿液,并将样本室温运输,在此提出一种滤器联合注射器的简易装置.注射器提供压力,使尿液依次通过滤器内两层膜.第一层聚偏二氟乙烯膜隔离尿液中的细胞及碎片,第二层硝酸纤维素膜吸附尿液中蛋白质.结果显示,聚偏二氟乙烯膜有效地去除了尿液中细胞及碎片,具有很好的技术重复性.样本可室温保存1 0天,使样本远距离运输更加经济方便.     

几种化学因子对三种赤眼蜂离体酚氧化酶活性的影响

为比较不同赤眼蜂酚氧化酶（PO）活性的大小, 明确赤眼蜂种间免疫防御能力强弱, 本研究通过研磨、离心提取松毛虫赤眼蜂Trichogramma dendrolimi、螟黄赤眼蜂T. chilonis、玉米螟赤眼蜂T. ostriniae匀浆液, 首次测定了几种化学因子（Ca²⁺、昆布多糖、纤维素、右旋糖酐、脂多糖和丝氨酸蛋白酶抑制剂）对3种供试赤眼蜂匀浆液中酚氧化酶原激活系统（proPO-AS）的激活程度。结果表明: 玉米螟赤眼蜂匀浆液PO活性最高, 螟黄赤眼蜂次之, 松毛虫赤眼蜂最低。Ca²⁺是激活供试赤眼蜂proPO的必需因子, 且在0.03 mol/L浓度下激活作用最强; 昆布多糖和脂多糖也能有效激活proPO, 0.01及0.05 mg/mL昆布多糖能强烈激活PO活性; 纤维素和右旋糖酐对PO活性存在显著抑制作用。结果证明了赤眼蜂种间存在明显的免疫能力差异。本研究建立了小型昆虫proPO-AS研究体系, 为研究Wolbachia-小型昆虫的免疫互作体系奠定了基础。     

用有限酶切法分析蛋白质的氨基酸序列

报道了一个通过有限酶切蛋白质产生多肽片段的方法.蛋白质经单向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离和用考马斯亮蓝短暂染色后,切下所需的蛋白质带,将其放入另一个SDS-PAGE凝胶的样品槽内,在电泳过程中该蛋白质被蛋白酶如蛋白酶V8降解,所产生的多肽片段随之被分离.电泳结束后,将多肽片段电印迹至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene difluoride,PVDF)膜上.这些多肽片段从PVDF膜上切下后可以直接被用于分析氨基酸序列.该方法能广泛适用于分析一般蛋白质和N端被修饰蛋白质的氨基酸序列.     

家蝇幼虫组织匀浆液的抗病毒活性

以家蝇Musca domesticaL.幼虫为材料,研究了蝇蛆组织匀浆液的抗病毒活性。用鸡胚培养检测了其抗流感病毒的活性,乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒检测了其对乙型肝炎病毒表面抗原的破坏作用。结果表明:15μL的家蝇幼虫组织匀浆液对流感病毒的抑制率为72.41%,而30,50和80μL剂量组对病毒的杀灭率都达到80%以上;蝇蛆组织匀浆液对乙型肝炎病毒表面抗原的破坏率可达到87.5%。说明家蝇幼虫体内存在着抗病毒活性物质。这为开发天然的抗病毒药物提供了新的途径。     

卡伍尔氏链霉菌NA4的Ⅱ型聚酮基因簇的靶向激活及其产物鉴定

【目的】以基因组信息为导向,定向激活海洋来源卡伍尔氏链霉菌（Streptomyces cavourensis） NA4中沉默的Ⅱ型聚酮类次级代谢产物生物合成基因簇,鉴定新产生的次级代谢产物的结构和抑菌活性。【方法】通过添加启动子和敲除负调控基因的方法激活实验室培养条件下沉默或低表达的生物合成基因簇,并完成目标化合物的分离与纯化,通过电喷雾质谱（electrospray ionization-mass spectrometry,ESI-MS）和核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）数据分析鉴定目标化合物结构,对目标化合物进行抑菌活性鉴定,基于生物信息学信息推导化合物的生物合成途径。【结果】根据基因组生物信息学分析,从海洋来源链霉菌Streptomyces cavourensis NA4中选取一个编码PKSⅡ型次级代谢产物的生物合成基因簇开展研究,成功激活目标基因簇,从中分离到1个PKSⅡ型化合物,推导了其生物合成途径并进行了抑菌活性鉴定。【结论】基因组导向下的天然产物挖掘,可以目标明确地分离产物,充分挖掘链霉菌编码次级代谢产物的潜力。     

响应面法优化膜分离穿山龙薯蓣皂苷工艺研究

本文通过响应面法优选陶瓷膜分离穿山龙薯蓣皂苷的工艺条件。以指标成分转移率为评价,采用单因素方法选取过膜温度(℃)、过膜浓度(g/L)、过膜压力(MPa)三种因素水平。根据Box-Behnken的中心组合实验设计原理,利用Design-Expert软件对数据进行回归分析,得到最佳分离条件。陶瓷膜分离穿山龙薯蓣皂苷的优化条件为:过膜温度30℃、过膜浓度2 g/L、过膜压力0.8 MPa,在此工艺条件下,指标成分转移平均为44.88%。经过响应面优化陶瓷膜分离穿山龙薯蓣皂苷的条件能克服传统水提醇沉工艺导致有效成分损失较大、用醇量大、生产周期长等缺点,具有可操作性,可用于穿山龙薯蓣皂苷的分离。     

直组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的纯化与鉴定

本文利用SDS-PAGE及蛋白质电泳印迹技术,从带有相应表达质粒的重组大肠杆菌裂解液中,将所表达的重组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8(NAP-1/IL-8)转移至聚偏二氟乙烯膜上,直接进行N-末端15个氨基酸的序列分析,从而确证该目标蛋白得到高效表达和正确加工。随后采用Bio-Gel P30凝胶过滤层析和Mono-S阳离子交换层析对重组人NAP-1/IL-8进行了分离纯化,纯化产品达到SDS-PAGE纯。利用琼脂糖平板法测定了纯化产品的嗜中性白细胞趋化活性,推算其比活为2.8×10~5U/mg蛋白。又利用SDS-PAGE测出重组NAP-1/IL-8的分子量约为8.5kD,但根据凝胶过滤层析的洗脱时间推定,在溶液中确实存在分子量稍大于14.4kD的NAP-1/IL-8二聚体。     

用染料修饰吐温80液—固萃取体系从猪心肌匀浆液中分离纯化心肌黄酶

用三嗪类染料 Ｃｉｂａｃｒｏｎ Ｂｌｕｅ Ｆ３Ｇ－Ａ修饰的吐温８０,与吐温８０、硫酸被构成液－固萃取体系,从猪心肌匀浆液中分离纯化心肌黄酶。研究了吐温８０染料修饰物在吐温８０相中所占的比例、分相盐浓度、溶液的酸度、匀浆液的加入量等对匀浆液中酶及杂蛋白在两相中分配的影响。在室温条件下,酶选择性地进入吐温８０固相,杂蛋白主要留在盐水相。匀浆液中心肌黄酶的酶活力平均收得率为８１．４％,一步纯化倍数为６．６。降低盐浓度,提高盐水相酸度,能使酶从吐温８０固相反萃到盐水相。     

离体条件下鱼对灭幼脲的代谢

实验选用甘氨酸－氢氧化钠（ｐＨ９±０．０１）缓冲溶液,草鱼或鲤鱼肝脏匀浆液经低速离心后取上清液作为酶,反应系统中加入ＣＣＵ后在２５℃保温５ｈ,用醋酸乙酯萃取代谢产物,用ＴＬＣ对代谢产物进行分离纯化,用ＨＰＬＣ方法对代谢产物进行定性定量测定,证明有对氯苯基脲素ＣＰＵ产生。为进一步证实代谢产物为ＣＰＵ,用能给出绝对光谱定性数据的紫外检测器在一定的波长范围内,对标样及斑点中测定的组分进行扫描,从光谱学上证明了产物是ＣＰＵ。当加入专一性酯酶抑制剂后,酶活性被抑制８９－９９％,证明酯酶在ＣＣＵ的降解中起重要作用。     

唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法的建立

目的探索建立唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法。方法以卵黄脂磷蛋白（Lv）抗血清为抗体,以纯化的Lv作为抗原建立间接酶联免疫吸附反应（ELISA）方法检测雄性唐鱼（Tanichthys albonubes）整体匀浆液中的卵黄蛋白原（Vtg）。结果利用ELISA方法测定了经17-β雌二醇（E2）和不同浓度DDTs暴露21 d诱导的雄鱼整体匀浆液中的Vtg含量,可以直接在1块或在不同的酶标板上准确地进行比较。经0.055 mg/mL E2诱导的雄鱼整体匀浆液中Vtg含量为4148.33μg/g;当暴露DDTs浓度为0.0275、0.0137和0.0067 mg/mL时,雄鱼整体匀浆液中Vtg含量分别为1109.43、911.16和1322.79μg/g,与丙酮溶剂对照组462.79μg/g比较差异存在显著性（P〈0.05）。结论建立了唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法 ,本方法的检测灵敏度为8.1 ng/mL,批内误差为8.59%,批间误差为6.28%,工作范围为3.26～209.25 ng/mL。在该范围内,标准曲线具有良好的线性和重复性。     

非无菌培养的微小卡罗藻次生代谢产物的细胞毒及其宏基因组酮基合成酶基因的筛选

目的：检测微小卡罗藻（Karlodinium micrum）粗提物的细胞毒活性,筛选其KS基因。方法：非无菌条件培养微小卡罗藻,用乙酸乙酯提取其粗产物,以脐静脉内皮细胞（HUVEC）为目标细胞,测定粗提取物的细胞毒活性;运用分子生物学方法对多聚酮合酶（PKS）基因的酮基合成酶（KS）基因进行筛选,运用BLAST进行比对和系统发生树进行分析。结果：微小卡罗藻培养液粗产物具有细胞毒活性,IC50值为70．8μg／mL。KS基因筛选获得680bp的片段,并经测序推导出其氨基酸序列,该氨基酸序列与纤维多囊菌和点型念珠蓝细菌KS域的氨基酸序列同源性分别为60％和57％。结论：首次从非无菌培养的微小卡罗藻中筛选到PKS中KS域基因片段,为从中分离聚酮类化合物提供了基因学的依据。     

小麦原生质体分离过程中生理状态的变化

酶解处理使小麦对肉原生质体膜流动性降低,膜脂过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）积累,说明脱璧过程对细胞有伤害作用,损伤位点可能发生在膜上。胚性愈伤组织的具有分裂能力的原生质体,不表现上述变化。酶解脱壁还使超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性上升;过氧化物酶（ＰＯＸ）在叶肉原生质体中活性下降,在胚性愈伤组织来源的原生质体中活性上升。以上结果表明：在原生质体分离过程中,细胞的生理特性发生了变化;膜损伤的发生可能与原生质体能否进入正常分裂状态有关。     

叶绿体类囊体膜蛋白质的化学交联效应

研究了蛋白质化学交联剂二氟二硝基苯对叶绿体类囊体膜功能的效应。检测到ＤＦＤＮＢ抑制光合磷酸化,降低光照诱导类囊体膜的质子吸收和９－氨基吖啶（９－ＡＡ）的荧光猝灭,降低电色效应的快相上升,显抑制膜上腺三磷酶的活性,ＤＦＤＮＢ和游离的腺三磷酶进行交联反应,再经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,交联后的酶出现新的蛋白染色带。     

枯草芽孢杆菌内切木聚糖酶的分离纯化与鉴定

目的：建立一种简便、快速的木聚糖酶分离和提取方法。方法：采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合,分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)固体培养基发酵产物中的木聚糖酶,进一步用薄层色谱和高压液相色谱对木聚糖酶进行鉴定。结果：采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合,从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)固体培养基发酵产物中分离得到了两种内切木聚糖酶,酶解桦木木聚糖的产要产物以木二糖和木三糖为主。结论：活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合是一种新的分离纯化木聚糖酶的简便、有效方法。