低氧诱导因子在肾透明细胞癌中作用的研究进展

VHL基因具有调节转录、稳定细胞生长相关基因和调节细胞周期的功能,其突变、缺失、重排和超甲基化与肾细胞癌(RCC)的发生密切相关。VHL基因产物VHL肿瘤抑制蛋白(p VHL)是泛素连接酶的成分,具有调节低氧诱导因子(HIF)稳定性的作用。HIF家族主要包含三种HIFα因子(HIF1α、HIF2α、HIF3α)和两种HIFβ因子(HIF1β、HIF2β)。HIF1α位于14q染色体上,在肾透明细胞癌中该染色体经常缺失,且这种14q的缺失常伴有预后不良。HIF2α的表达异常促进了p VHL缺陷型肾透明细胞癌中的发生。目前,抑制HIF2α及其下游的血管内皮生长因子(VEGF)的药物都处于临床试验的不同阶段,已有四种VEGF抑制剂获准用于肾透明细胞癌的治疗。选择抑制HIF或具有HIF靶基因抑制选择性的药物进行研究,可能为肾透明细胞癌的治疗提供新的方法。本文就HIF在VHL蛋白缺陷型肾透明细胞癌中作用的研究进展进行了综述。     

微核糖核酸对血管生成相关因子的调节作用

微核糖核酸(microRNAs,miRNAs)是广泛存在于真核生物中的一类短小的、非编码的单链RNA,由18～25个核苷酸组成,在调节细胞增殖、分化、凋亡和肿瘤发生等多种生物学过程中起重要作用.血管生成过程中受到多种血管生成因子的调控作用,近期研究表明,microRNAs参与血管生成相关因子的调节,进而影响血管生成,然而具体的功能以及作用机制仍需探讨.进一步研究microRNAs对血管生成相关因子的调控作用,为心血管疾病和肿瘤的治疗提供新的理论基础.     

低氧诱导因子家族与肺癌的研究进展

低氧诱导因子-1α的肿瘤表达谱相当广泛;同时HIF-1α在肿瘤特别是肺癌的演进中扮演重要角色HIF-1α已被列为肿瘤分子靶向治疗的重要目标蛋白之一.低氧诱导因子家族生物学特性、各因子的表达差异及其调控许多目的基因如血红素加氧酶,血管内皮生长因子等表达的发现,对理解许多与组织缺氧有关的重要疾病如肺癌的病理生理过程有重要意义.     

缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子在胰腺癌中的表达及意义

目的：研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子1alpha（Hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor,FGF）的表达并探讨其意义。方法：Western blot法检测22例胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α、VEGF和FGF蛋白的表达,分析HIF-1α与VEGF、FGF之间的相关性以及与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期之间的关系。结果：HIF-1α、VEGF和FGF在胰腺癌组织中的蛋白表达水平明显高于胰腺癌周组织（P〈0.01）,HIF-1α与VEGF、FGF之间的表达具有显著相关性（P〈0.01）。HIF-1α的表达与胰腺癌的TNM分期、肿瘤大小和淋巴结转移有关（P〈0.01）,VEGF和FGF的表达与胰腺癌的肿瘤大小和淋巴结转移有关（P〈0.05）。结论：HIF-1α可以上调VEGF和FGF的表达,在胰腺癌的发生、发展中起着重要作用。     

缺氧诱导因子1 α、血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子在胰腺癌中的表达及意义

目的:研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子la|pha(Hypoxia-inducible factor-laipha,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)的表达并探讨其意义.方法:Western blot法检测22例胰腺癌及癌旁组织中HIF-1α、VEGF和FGF蛋白的表达,分析HIF-1α与VEGF、FGF之间的相关性以及与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期之间的关系.结果:HIF-1α、VEGF和FGF在胰腺癌组织中的蛋白表达水平明显高于胰腺癌周组织(P＜0.01),HIF-1α与VEGF、FGF之间的表达具有显著相关性(P＜0.01).HIF-1α的表达与胰腺癌的TNM分期、肿瘤大小和淋巴结转移有关(P＜0.01),VEGF和FGF的表达与胰腺癌的肿瘤大小和淋巴结转移有关(P＜0.05).结论:HIF-1α可以上调VEGF和FGF的表达,在胰腺癌的发生、发展中起着重要作用.     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子在突出腰椎间盘中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia—induciblefactor-1α,HIF-1α）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在突出腰椎间盘组织中的表达及意义。方法采用链霉亲和素-过氧化物酶复合物（SABC）免疫组化方法,测定40例腰椎间盘突出症患者椎间盘组织中HIF-1α和VEGF的表达情况。结果退变椎间盘组织中HIF-1α和VEGF呈高表达,HIF-1α和VEGF在髓核的表达显著高于纤维环;纤维环破裂型显著高于纤维环完整型;各组中HIF-1α和VEGF的表达均高度相关。结论HIF-1α和VEGF共同参与了椎间盘退变;HIF-1α可能通过上调VEGF的表达来促进椎间盘组织中新生血管的形成,进而延缓椎间盘退变的发生。     

衰老对AhR 及其血管生成相关因子表达的影响

目的:探讨芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,Ah R)在过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老模型中表达的变化情况及其对血管生成相关因子表达的影响。方法:采用不同浓度的H_2O_2(100μM,200μM,300μM)处理HUVECs诱导内皮细胞衰老,通过β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老情况,Western blot检测HUVECs中Ah R蛋白以及血管生成相关因子低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达,ELISA检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的变化。结果:与对照组相比,经过不同浓度H_2O_2处理后,HUVECs均出现细胞衰老表现,Ah R蛋白表达显著增加,HIF-1α以及VEGF蛋白表达明显减少,且均呈现出剂量依赖性,以300μM H_2O_2处理组最为显著。结论:在过氧化氢诱导衰老的人脐静脉内皮细胞中Ah R蛋白表达明显增加,HIF-1α和VEGF等促血管生成因子明显减少。     

低氧处理不同时间对人肺腺癌A549细胞增殖的影响 及相应缺氧模型探讨*

目的:观察低氧处理不同时间对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,探讨合理的人肺腺癌细胞株A549体外模拟缺氧时间。方法:将人肺腺癌细胞A549细胞株在低氧环境下分别培养12 h、24 h、48 h、72 h,设置常氧对照组,通过CCK8法测定A549细胞存活率,RT-PCR和免疫印迹分别检测细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)mRNA及蛋白的表达。结果:低氧24 h组A549细胞存活率最高,低氧48 h、72 h组A549细胞存活率呈时间依赖性明显下降(P0.001)。自低氧12 h起,A549细胞HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达开始随低氧时间延长而显著增加(P均0.001);HIF-1α和VEGF蛋白表达自24 h开始随低氧时间延长而显著增加(P均0.001)。结论:低氧诱导的A549细胞存活率呈时间依赖性降低,而HIF-1α、VEGF表达呈时间依赖性增高,人肺癌细胞株A549缺氧模型最适时间为24 h。     

乳腺癌组织中转化生长因子-beta1 和血管内皮生长因子的表达 及其与血管生成的关系

目的:研究转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)在乳腺癌组织中的表达及其与血管生成的关系。方法:选取65例手术切除乳腺癌蜡块标本及其周围正常乳腺组织,分为两组:A组为对照组,检测标本为乳腺癌癌旁正常乳腺组织;B组为实验组,检测标本为乳腺癌组织,采用免疫组织化学染色和形态计量检测TGF-β1和VEGF在乳腺癌组织中的表达。利用CD34相关抗原标记血管内皮细胞,计数微血管密度(intratumoral mier oveseulardensity,MVD),并分析其与TGF-β1和VEGF表达的关系。结果:65例乳腺癌组织中,TGF-β1的阳性表达率为69.23%(45/65),TGF-β1阳性表达者MVD值(25.31±4.05)显著高于TGF-β1阴性表达者(21.23±4.29);VEGF的阳性表达率为78.46%(51/65),VEGF阳性表达者MVD值(26.62±3.41)亦明显显著高于VEGF阴性表达者(18.95±6.52)(均P<0.05)。不同病理类型的乳腺癌组织中TGF-β1、VEGF的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05),但TGF-β1、VEGF的阳性表达与乳腺癌的组织分级、淋巴结转移呈显著正相关(均P<0.05),且组织学分级越高、淋巴结转移越多,MVD值越大。结论:TGF-β1与VEGF在乳腺癌组织的表达高于正常乳腺组织,并与乳腺癌肿瘤血管的生成有关,二者有望作为乳腺癌恶性程度、浸润转移等生物学行为的评估指标。     

血管内皮生长因子对猪心肌侧枝血管生成的作用

为检测血管内皮生长因子165（VEGF165)能否促进冠状动脉侧枝血管形成,实验在成功制作小型猪慢性心肌缺血模型后,将以复制缺陷复组腺病毒为载体的人VEGF165互补脱氧核糖核酸[(cDNA)Ad-VEGF165]直接注入左回旋支（LCX）分布的缺血心肌内,以心电图门控单光子发射计算机断层摄影和离体太动脉造影检测冠状动脉侧枝形成,心肌灌注和功能变化,结果显示,与对照组和自身给预Ad-VEGF165前比较,给予Ad-VEGF165四周后心肌缺血面积（P＜0．01）和最大缺血程度（P＜0．01）明显减小,左心室射血分数（P＜0．01）TCX区局部心室壁运动（P＜0．05）明显改善,治疗组侧枝血管生成明显多于对照组（P＜0．05）,表明Ad-VEGF165能诱导心肌侧肢血管形成并改善心肌灌注与运动功能。     

雷帕霉素对内皮细胞迁移和血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究不同浓度的雷帕霉素对体外培养的人血管内皮细胞（rE）4移及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：用含10％胎牛血清的细胞培养基（DMEM）培养正常VE细胞,用10nM,50nM,100nM和200nM的雷帕霉素孵育vE细胞24h,Westernbloting测定雷帕霉素对VE中mTOR和VEGF表达的影响,Transwell迁移模型观察不同浓度的雷帕霉素对内皮细胞迁移影响。结果：①雷帕霉素可显著抑制VE的迁移,除了在100riM之外,基本呈浓度依赖性的。100nM雷帕霉素对VE迁移的抑制作用显著减弱（P〈0．01）。②雷帕霉素对mTOR和VEGF165的表达呈浓度依赖性的抑制;而VEGF121的表达则是先升高后降低,在100nM雷帕霉素时表达最高,远远高于该浓度雷帕霉素时VEGF165的表达,可以解释100nM雷帕霉素时VE迁移抑制显著减轻的现象。结论：雷帕霉素抑制了VEGF165的表达,并且其对VE迁移抑制的效应主要由VEGF165表达减少所介导。VEGF121的表达在一定雷帕霉素浓度范围内可显著上调,从而显著改善了雷帕霉素诱导的VEGF165表达减少所致的内皮细胞迁移抑制。     

雷帕霉素对内皮细胞迁移和血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究不同浓度的雷帕霉素对体外培养的人血管内皮细胞(VE)迁移及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用含10%胎牛血清的细胞培养基(DMEM)培养正常VE细胞,用10nM,50nM,100nM和200nM的雷帕霉素孵育VE细胞24 h,Western bloting测定雷帕霉素对VE中mTOR和VEGF表达的影响,Transwell迁移模型观察不同浓度的雷帕霉素对内皮细胞迁移影响。结果:①雷帕霉素可显著抑制VE的迁移,除了在100nM之外,基本呈浓度依赖性的。100nM雷帕霉素对VE迁移的抑制作用显著减弱(P<0.01)。②雷帕霉素对mTOR和VEGF165的表达呈浓度依赖性的抑制;而VEGF121的表达则是先升高后降低,在100nM雷帕霉素时表达最高,远远高于该浓度雷帕霉素时VEGF165的表达,可以解释100nM雷帕霉素时VE迁移抑制显著减轻的现象。结论:雷帕霉素抑制了VEGF165的表达,并且其对VE迁移抑制的效应主要由VEGF165表达减少所介导。VEGF121的表达在一定雷帕霉素浓度范围内可显著上调,从而显著改善了雷帕霉素诱导的VEGF165表达减少所致的内皮细胞迁移抑制。     

血管内皮生长因子基因治疗大鼠脑缺血的实验研究

为探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗大鼠脑缺血的可行性,构建了pcD2/hVEGF121真核表达质粒,建立持续性大脑中动脉堵塞(MCAO)的局灶性脑梗塞模型,大鼠脑皮质直接注射法转移pcD2/hVEGF121真核表达质粒。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、VEGF免疫组织化学法、脑血管计数及梗塞面积测定等方法检测转移pcD2/hVEGF121真核表达质粒后大鼠脑中VEGF基因表达及生物学效应。结果发现,与转移空载质粒的对照组相比,转移VEGF基因后7d的大鼠脑组织中有VEGFmRNA高表达,VEGF免疫组化染色可见VEGF蛋白表达水平增高,脑血管数增多,梗塞体积缩小。因此,直接注射法转移VEGF基因能够在缺血脑组织中表达,表达产物能够发挥生物学效应,进而起到保护脑组织作用。     

慢病毒介导NCL基因沉默的胃癌细胞系的建立及对细胞增殖影响的研究

目的:本研究通过建立慢病毒介导的NCL基因沉默的胃癌细胞系,研究NCL沉默对胃癌细胞增殖能力的影响,为深入探究胃癌发生发展的分子机制提供理论基础。方法:利用小发卡RNA(shRNA)介导的慢病毒系统沉默胃癌细胞中的NCL,并利用RT-q PCR和免疫印迹检测基因沉默效果;并利用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖能力的改变。结果:琼脂糖凝胶电泳实验检测经酶切鉴定的pKLO.1-NCL载体,显示5000 bp和2000 bp两条带,测序峰图显示与设计序列一致;利用HEK293T包装病毒,感染胃癌细胞SGC-7901,免疫印迹结果显示sh NCL组NCL蛋白水平显著低于对照组,RT-qPCR结果显示,sh NCL组NCL表达量显著降低,为对照组的0.4209±0.087倍(P0.001);CCK-8实验结果显示,sh NCL组在第5天的吸光值较对照组显著降低(P0.001),平板克隆形成实验结果显示,sh NCL组克隆形成能力较对照组显著降低,克隆形成数量显著低于对照组(P0.01)。结论:建立了慢病毒介导的NCL基因沉默的胃癌细胞系SGC-7901,并利用此系统研究了NCL基因对胃癌细胞增殖能力的影响,证明了NCL基因能够促进胃癌细胞的增殖,为后续研究NCL基因在胃癌细胞中的作用提供基础。     

肾癌患者血清VEGF的水平及其与临床病理分期的关系

目的:探讨肾癌患者血清血管内皮生长因子(VEGF)的水平及其与临床病理分期的关系。方法:选择2013年1月至2015年1月在我院行手术治疗的肾癌患者56例为观察组,选择同期在我院进行健康体检的正常成人50例作为对照,所有患者的诊断均经病理切片证实,对所有研究对象,采集其清晨空腹静脉血,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中的VEGF和VEGF受体-1(VEGFR-1)。结果:观察组血清中VEGF和VEGFR-1的浓度分别为(132.75±68.31)ng/mL和(33.76±15.39)ng/mL,均显著高于对照组,差异有统计学差异(均P0.05);不同分期患者血清中VEGF和VEGFR-1浓度差异有统计学意义(均P0.05),病理分期增加,VEGF与VEGFR-1的浓度增加,VEGF与VEGFR-1呈正相关(r=0.625,P0.05)。结论:血清VEGF水平可用于诊断RCC,且对于预判RCC的病例分期具有重要价值。     

活血化瘀方对糖尿病模型大鼠糖脂代谢、血管内皮生长因子和血管紧张素II1型受体表达的影响

目的:探讨活血化瘀方对糖尿病模型大鼠糖脂代谢、血管内皮生长因子(VEGF)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达的影响。方法:选取健康雄性SD大鼠50只,适应性喂养7 d后以随机数字表法分成对照组10只、模型组13只、中药组14只、西药组13只。其中模型组与对照组予以纯净水灌胃,中药组予以活血化瘀通络中药配方颗粒灌胃,西药组则予以厄贝沙坦灌胃,1次/d,连续灌胃16周。分别比较各组大鼠的糖脂代谢指标水平及24 h尿蛋白定量、糖化血红蛋白、血清肌酐水平,并检测肾组织VEGF和AT1R表达情况。结果:模型组、中药组、西药组大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均高于对照组,中药组、西药组大鼠LDL-C水平低于模型组,中药组大鼠FBG水平低于模型组与西药组(P0.05)。模型组、中药组、西药组大鼠24 h尿蛋白定量与糖化血红蛋白均高于对照组,中药组、西药组大鼠24 h尿蛋白定量低于模型组(P0.05)。模型组、中药组、西药组大鼠VEGF、AT1R水平均高于对照组,中药组、西药组大鼠VEGF、AT1R水平低于模型组,中药组大鼠AT1R水平低于西药组(P0.05)。结论:活血化瘀方可有效改善糖尿病大鼠糖脂代谢状态,通过抑制VEGF与AT1R的表达水平,延缓糖尿病的发生与发展。     

KDP胞外502～764位氨基酸基因合成、表达及功能鉴定

应用基因搭桥法及 Taq酶聚合反应合成了编码人血管内皮生长因子受体 - ( h VEGFR- ,KDR)第 50 2～ 764位 2 62个氨基酸的基因片段 .DNA序列分析表明 ,合成的 786bp的基因片段与文献报道的 KDR相应 c DNA序列完全一致 .将该基因与原核融合蛋白表达载体 p GEX- 3X重组 ,在大肠杆菌 JM1 0 9中表达了 GST- KDR2 62融合蛋白 ,表达量约占菌体总蛋白的 35% .表达产物依次经包涵体分离、变性、复性、亲合层析纯化和 Xa因子酶解 ,获得了 KDR2 62目的蛋白纯品 .GST-KDR2 62融合蛋白和纯化产物经 Western blot分析 ,两者均可被 VEGF1 65特异性识别 ,前者分子量约 56k D,后者分子量约 30 k D;这两种蛋白用 VEGF1 65及其抗体进行的 ELISA分析结果均显示阳性 ,并有剂量依赖关系 ,而用 Xa因子酶解 GST- KDR2 62融合蛋白获得的 GST和空载体诱导产物对照均为阴性 .以上结果表明表达的 KDR2 62蛋白可特异性地与 VEGF结合 .