水杨酸间接酶联免疫法的建立

水杨酸（salicrlicacid，SA）在单子叶和双子叶植物中普遍存在。它能诱导若干天南星科植物佛焰花序产热，抑制乙烯的生物合成。尤其重要的是，SA是诱导烟草、黄瓜等植物产生整株获得性抗性（systemicacquiredrest。tance，SAR）的内源信号物质[5，6]。因此，SA在植物体内的作用越来越引起人们的重视。目前对SA的定量检测大多采用HPLC等理化方法［‘，’，’，“j，这些方法对植物材料的需要量较大，且需冗长的纯化处理。虽然Bennett等“’早在1987年即用个氨基水杨酸（4－－aminosalicylicacid，4－－ASA）与载体蛋白偶联制备了水杨…     

神经元特异性烯醇酶和癌胚抗原胶体金免疫层析联合检测

目的：应用双抗夹心胶体金免疫层析方法,实现对神经元特异性烯醇化酶（NSE）和癌胚抗原（CEA）两种肺癌肿瘤标志物的快速联合检测。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒,并分别对鼠抗NSE、CEA单克隆抗体进行标记,分别与之相配对的另一种单克隆抗体被喷在硝酸纤维素膜（NC膜）上,制成免疫层析检测试条。溶液中的抗原NSE、CEA与金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上固定的抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果：该试纸条只与NSE、CEA有特异性反应,与CA125、CYFRA21-1、TPA等肺癌标志物无交叉反应。标准样品中两种抗原的检测灵敏度分别可达到5ng/mL和3ng/mL。结论：胶体金免疫层析技术检测NSE、CEA特异性强、灵敏度高、简便快速,不需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

神经元特异性烯醇酶和癌胚抗原胶体金免疫层析联合检测

目的:应用双抗夹心胶体金免疫层析方法,实现对神经元特异性烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)两种肺癌肿瘤标志物的快速联合检测。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒,并分别对鼠抗NSE、CEA单克隆抗体进行标记,分别与之相配对的另一种单克隆抗体被喷在硝酸纤维素膜(NC膜)上,制成免疫层析检测试条。溶液中的抗原NSE、CEA与金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上固定的抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果:该试纸条只与NSE、CEA有特异性反应,与CA125、CYFRA21-1、TPA等肺癌标志物无交叉反应。标准样品中两种抗原的检测灵敏度分别可达到5ng/mL和3ng/mL。结论:胶体金免疫层析技术检测NSE、CEA特异性强、灵敏度高、简便快速,不需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

毛细管电泳电化学免疫分析法检测人血清乙肝表面抗原

目的:建立用于测定人血清中乙肝表面抗原的毛细管电泳电化学免疫技术.方法:以微量滴定板为固相载体,预包被上乙肝表面抗体(抗-HBs),与血清乙肝表面抗原(HBsAg)及活化钌标记的乙肝表面抗体之间发生特异性免疫反应,形成三明治结构,将此双抗夹心免疫复合物进行毛细管电泳电化学分析.结果:利用此方法测定人乙肝表面抗原含量,浓度在0.08ng/mL～10 ng/mL范围内与峰电流呈良好的线性关系,线性回归方程为y=0.2840x+0.9535,检出限为0.01 ng/mL(3σ).结论:该法可以实现低浓度乙肝表面抗原血清样本低廉、快速、简便、定量检测.     

磁性分离酶联免疫技术检测人类绒毛膜促性腺激素及其临床意义分析

应用磁性分离酶联免疫检测技术（ＭＡＬＡ）对２１０名正常非妊娠妇女的血清进行ＨＣＧ定量测定,平均值３．５４９ｍＩＵ／ｍｌ血清。另外,对１０名不全流产患者、１５名葡萄胎患者及５名早孕误诊患者血清进行ＨＣＧ定量测定,均作出准确诊断。ＨＣＧ定量测定在临床诊断上有重要意义。该法具有灵敏、快速、准确、无污染等特点。是目前临床生殖内分泌激素定量测定的好方法。     

胶体金渗滤方法检测乙肝患者血清中乙肝核心抗体的研究

目的:建立胶体金免疫渗滤法检测乙肝患者血清中乙肝核心抗体(anti-HBc Ig M)抗体的方法,评价其灵敏度、特异性和重复性。方法:预先在硝酸纤维素膜上包被乙肝核心抗原HBc Ag,将血清或者血浆加在硝酸纤维素膜上,血清或者血浆中的anti-HBc Ig M与HBc Ag结合。洗涤去掉非特异结合,加入胶体金标记的抗人-Ig M,洗涤去掉没有结合的抗人Ig M抗体。硝酸纤维素膜上的抗原-Ig M-抗人Ig M形成的"三明治"复合物呈现红色圆点,证实实验有效。结果:102份乙肝患者血清,anti-HBc Ig M阳性标本99份。检出率97%。50份正常血清中,有一份检测结果弱阳性,特异性98%。结论:胶体金免疫渗滤法检测anti-HBc Ig M敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要特殊的仪器设备,在anti-HBc Ig M快速检测上有广阔的应用前景。     

检测乙肝表面抗原夹心法中使用不同抗体的对比配伍研究

在提高乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）酶联免疫诊断盒灵敏度的研究中对包被抗体、酶标记用抗体作了大量的筛选、对比实验。结果表明,包被单克隆抗体配伍酶标记山羊或豚鼠多克隆抗体可使乙肝表面抗原检测灵敏度达到０．２ｎｇ,超过中国药品生物制品检定所要求的１ｎｇ批批检合格标准,同时,特异性及变异系数均合乎要求,从而提高了试剂盒的质量。这一研究结果对提高其它以夹心法为原理的检测灵敏度有重要意义。     

212 831例不同人群乙肝五项标志物结果分析

目的探讨郑州地区不同人群乙肝五项标志物模式的分布及特点。方法采用ELISA法对血样进行HBV血清学指标检测,收集2012年9月28日至2017年9月27日在我院检查的乙肝五项定性检测结果,进行不同模式分析。结果 212 831例检测者中HBsAg阳性者有6 103例,其中男性3 177例,女性2 926例,男女HBsAg阳性率比较,差异有统计学意义(χ~2=43.26,P0.01)。乙肝主要模式"1,3,5阳"、"1,4,5阳"和"1,5阳"分别占17.88%、56.81%和23.12%,"1,5阳"模式按性别比较,差异有统计学意义(χ~2=7.31,P0.01),其他乙肝模式按性别比较,差异无统计学意义(χ~2=0,3.43,0.35和1.91,Ps0.05);不同年龄组HBsAg阳性率比较,差异有统计学意义(χ~2=1 396.48,P0.01)。受检人群中抗-HBs阳性有79 222例(占37.22%),不同年龄组和不同性别人群抗-HBs比较,差异有统计学意义(χ~2=1 220.18,353.03,Ps0.01);受检人群中乙肝全阴模式91 819例(占43.14%)。结论郑州地区男性HBsAg阳性率略高于女性,而女性抗-HBs阳性率略高于男性。郑州乙肝全阴模式比例较高,提示主动免疫工作有待加强。     

免疫胶体金法检测TGFl32，bFGF在IgAN肾组织内位点

目的 探讨TGFβ2和bFGF在IgAN肾组织内存在的位点。方法 采用免疫组织化学，胶体金标记和免疫电镜技术，对28例IgAN肾活检组织进行了TGFβ2和bFGF检测。结果 TGF岛和bFGF主要集中于肾小管上皮细胞的线粒体基质内，在其它部位有极少量的分布。结论 免疫电镜技术和免疫组织化学技术联合应用，对抗原的精确定位具有重要的研究意义。TGF协和bFGF主要集中于肾小管上皮细胞的线粒体基质内的生物化学意义需要进一步研究。     

纳米磁性颗粒标记的免疫层析法定量检测人乙型肝炎表面抗原

目的:应用纳米磁性颗粒标记的免疫层析法,研制可应用于乙肝表面抗原(HBsAg)快速定量检测的层析试纸条。方法:用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联的方法标记纳米磁珠,喷膜仪喷点硝酸纤维膜;根据双抗体夹心法原理建立免疫层析试纸条,对HBsAg特异性抗体捕获的磁信号进行检测,并对磁信号检测结果进行统计学分析和评价。结果:建立了HBsAg纳米磁性免疫层析试纸条,最低限度检测为0.1 ng/mL的HBsAg抗原,检测灵敏度达到了同类产品ELISA分析法的标准,且检测时间控制在5 min内;经检测临床血清标本证实,该方法可根据磁信号定量检测乙肝患者血清中HBsAg的浓度。结论:HBsAg纳米磁性免疫层析方法具有简单快速、灵敏度高的特点,可应用于临床血清样本中HBsAg的检测;该方法为体内极微量抗原抗体的快速检测建立了新模式。     

HBsAg Mab胶体金探针制备与鉴定的实验研究

目的：研制合格的乙肝表面抗原单克隆抗体（HashgMab）标记的胶体金探针。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备15nm的胶体金;所制备的胶体金通过透射电镜和紫外分光计度计鉴定其大小和均匀度。通过CVAI曲线,确定胶体金标记HBsAgMab蛋白用量;采用斑点免疫吸附试验对探针进行鉴定。结果：制备的15nm胶体金颗粒均匀;紫外分光光度计400—700nm扫描结果最大吸收波长为518nm,峰宽较窄;纯化的HBsAgMab浓度为65mg／mL;在PH为8.2时,每毫升胶体金的蛋白最适保护量为32．5μg;采用斑点免疫吸附试验鉴定探针质量合格,可保存3个月。结论：制备的HBsAgMab胶体金探针质量合格,为进一步研究提供手段。     

HBsAb标记胶体金探针对HBV阳性血清感染HPT-8细胞的示踪研究

目的:为临床诊断提供HBV进入HPT-8的依据。方法:HBV阳性血清(1.5×10~8拷贝/毫升)体外感染HPT-8细胞48h,设感染组、阴性对照组和空白对照组,ELISA检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg,提取感染后传代的各代细胞中DNA用于PCR检测HBV DNA。免疫荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBV DNA的滴度。采用乙肝表面抗原单克隆抗体标记的胶体金探针对感染的HPT-8细胞中的乙肝表面抗原进行标记示踪。结果:ELISA检测感染组细胞第1、2代培养上清中HBsAg阳性,PCR检测感染组第1、2代细胞HBV DNA,结果均阳性。免疫荧光定量PCR检测感染组细胞上清在第1、2代、3代48h的HBV滴度分别为8×10~4、4.6×10~3、<10~3(拷贝/毫升)。通过胶体金探针的标记:乙肝表面抗原存在于感染细胞的溶酶体内、细胞膜和绒毛上。结论:血清中的HBV病毒能进入胎盘滋养细胞,并可从感染滋养细胞的树脂切片中获得乙肝表面抗原的超微结构定位。     

运用ELISA快速检测CPV抗体方法的建立与均衡性研究

用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化犬细小病毒 (CPV)作抗原 ,建立了检测CPV抗体的间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)法 ,其特异性和稳定性良好 ,结果判定准确明显 ,易于把握。     

合成肽抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

An ELISA for the detection of anti HEV using synthetic peptide antigens was developed. The synthetic antigens were encoded by OFR2 and OFR3 genes of HEV. The purpose of this study was to determine the applicability of the synthetic antigens in the serodiagnosis of hepatitis E. The anti HEV detection using synthetic antigens was carried out in 47 healthy subjects and 89 patients with acute or chronic viral hepatitis. The results showed that the positive rate of anti HEV IgG in healthy subjects was 4.2%(2/47), and no IgM antibody to HEV was found. The positive rates of IgG and IgM antibodies to HEV in the hepatitis patients were 8.9% and 10% respectively. In addition, we compared the detecting efficacy of the synthetic antigens with that of the market reagent in 57 serum samples, the total coincident rate was 87.7% (50/57). All of the results accorded with the literatures reported. This study suggests that the ELISA based on the synthetic peptide antigens was specific, sensitive and convenient in diagnosis of HEV infection, it can be widely used in both clinical and epidemiological reseaches.     

带preS1的乙肝表面抗原融合蛋白的亲和纯化

乙肝表面抗原大分子蛋白ＬＨＢｓ的ｐｒｅＳ１区域２１～４７位肽段为肝细胞受体的结合位点;由ｐｒｅＳ１诱发的抗体有可能阻断病毒对肝细胞的侵蚀。因此,含有ｐｒｅＳ１的新型乙肝疫苗可能会引起机体更广泛、可靠的保护作用。但基因工程表达产物用于生产的一个关键问题是产品的纯化。用抗ＨＢｓＡｇｐｒｅＳ１单抗制成了亲和凝胶载体,并用它纯化了基因工程表达的带ｐｒｅＳ１的乙肝表面抗原融合蛋白．此法有操作简便;纯化效果好,回收率高等优点．一步层析产品纯度可达９０％以上,回收率在５０％左右,具有很好的应用前景。     

表达乙型肝炎病毒表面抗原基因又形成多角体的杆状病毒

用形成包含体(OCC~+)并能利用人工合成启动序列和多角体XIV启动子表达外源基因的转移载体质粒pSXIVVI~+X3,将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因和多角体基因同时插入无包含体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-G基因组中,得到表达HBsAg基因又形成包含体(多角体)的重组毒侏TnNPV-HBs85-OCC~+。与利用野生型多角体启动子表达HBsAg基因的无包含体毒株TnNPV-HBsD4不同,TnNPV-HBs85-OCC~+由于具包含体,能以口服方式大规模感染粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)幼虫,且HBsAg基因在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)离体细胞中的表达量要比前者高约37％,在虫体中的表达则更高。     

聚乙二醇伴随式离子交换层析分离重组乙肝病毒表面抗原

对由中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达的多聚亚基蛋白HBsAg在离子交换层析过程中容易因亚基解离而导致蛋白解聚和丧失生物活性的难题,实验中选择聚乙二醇（PEG）作为保护剂伴随式（Polyethylene Glycol-Accompanied）离子交换层析分离纯化HBsAg。实验表明,在流动相中加入1% PEG10000(W/V)作为纯化伴侣, HBsAg的回收率由55% 左右提高到80%以上,纯化倍数基本保持在12左右。对纯化产物进行SDS_PAGE分析表明,1% PEG10000的纯化伴侣伴随式离子交换层析能全部保留HBsAg的糖基化蛋白单体（27kD和30kD）,高效液相色谱联用多角度激光散射(High Performance Size Exclusion Chromatography_Multiangle Laser Light Scattering, HPSEC-MALLS )进一步分析阐明了PEG能促使HBsAg颗粒尺寸分布更均一,结构更接近天然乙肝表面抗原。     

一种新的乙型肝炎病毒表面抗原结合蛋白的筛选、表达及其生物学活性的初步研究

为了研究乙肝病毒侵染肝细胞过程中的功能蛋白 ,通过印迹免疫分析技术从人肝cDNA噬菌体表达库中筛选出一株编码乙肝表面抗原结合蛋白 (hepatitisBsurfaceantigenbindingprotein ,HBsAg BP)的cDNA克隆 .基因测序结果表明 ,该cDNA具有独立的开放阅读框架 ,编码 1个由 344个氨基酸残基构成的可溶性蛋白分子 ,属于免疫球蛋白超家族成员 .将该基因克隆到原核表达载体pTriplEx后 ,在E .coliXL1 Blue菌株中获得 4 4kD的重组蛋白 .重组蛋白经Western印迹和ELISA实验证明具有与乙肝表面抗原特异性结合的能力 .进一步经流式细胞仪实验显示 ,在纯化的重组蛋白存在的情况下 ,天然的HBsAg与肝细胞株HepG2的亲和力显著增高 .结果显示 ,该乙肝表面抗原结合蛋白可能是介导乙肝病毒对肝细胞亲和侵染的可溶性辅助受体 .     

Platycodin D2 Improves Specific Cellular and Humoral Responses to Hepatitis B Surface Antigen in Mice

Platycodin D2 ( 1 ), a less hemolytic saponin from the root of Platycodon grandiflorum than platycodin D ( 2 ), was evaluated for the potential to enhance specific cellular and humoral immune responses to hepatitis B surface antigen (HBsAg) in mice. It significantly increased the concanavalin A (Con A)‐, lipopolysaccharide (LPS)‐, and HBsAg‐induced splenocyte proliferation in HBsAg‐immunized mice (P<0.05, P<0.01, and P<0.001, resp.). HBsAg‐specific IgG, IgG1, IgG2a, and IgG2b antibody titers in the serum were also markedly enhanced by 1 compared to the HBsAg control group (P<0.01 or P<0.001). Moreover, 1 significantly promoted the production of Th1 (IL‐2 and IFN‐γ) and Th2 (IL‐4 and IL‐10) cytokines from splenocytes in the HBsAg‐immunized mice (P<0.001). The adjuvant potential of 1 on splenocyte proliferation, serum HBsAg‐specific IgG2a and IgG2b antibody response, as well as Th1‐cytokine secretion from splenocytes in the HBsAg‐immunized mice was higher than that of Alum. The results suggest that 1 could improve both cellular and humoral immune responses to HBsAg in mice. Hence, 1 might be a promising adjuvant for hepatitis B vaccine with dual Th1‐ and Th2‐potentiating activity.     

乙肝大蛋白检测在乙肝抗病毒治疗中价值的研究

目的探讨乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP)在抗病毒治疗过程中的临床诊断价值。方法选取乙型肝炎患者1 000例为研究对象和100例健康体检者为对照组进行HBV-DNA、HBV-LP和ALT检验;然后筛选志愿者进行拉米夫定抗病毒治疗,在治疗前、治疗中和治疗后分别采集血清标本进行HBV-LP、HBV-DNA、ALT检验。结果在HBVM模式中,HBV-LP和HBV-DNA的阳性率分别为42.64%和43.91%(P>0.05)。HBV-LP阳性标本中HBV-DNA、HBeAg和ALT阳性符合率分别为96.27%、65.01%和98.55%,HBV-DNA和ALT优于HBeAg(P<0.05)。志愿者进行拉米夫定抗病毒治疗中HBV-LP与HBV-DNA均下降,HBV-DNA下降更快。结论 HBV-LP可以检测病毒复制、抗病毒疗效观察和反映肝损伤。