基于PI3K/AKT通路探究上调miR-210对牙髓干细胞增殖、凋亡能力的影响

摘要 目的：研究基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路探究上调微小RNA 210(miR-210)对大鼠牙髓干细胞增殖、凋亡能力的影响。方法：选取10只健康Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠,颈椎脱臼处死后提取大鼠下切牙牙髓,进行牙髓干细胞培养和鉴定。分为正常组（未进行处理）,miR-210抑制组（给予20 nmol/L的miR-210抑制物）,miR-210对照组（给予20 nmol/L的miR-210模拟物）三组。采用CCK-8法检测牙髓干细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ALP活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,采用免疫印迹（Western blot）检测PI3K、AKT蛋白。结果：与正常组相比,miR-210抑制组细胞增殖、ALP活性降低,细胞凋亡率升高;miR-210对照组细胞增殖、ALP活性升高,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。与miR-210抑制组相比,miR-210对照组细胞增殖、ALP活性升高,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。与正常组相比,miR-210抑制组PI3K、p-AKT蛋白表达降低,miR-210对照组PI3K、p-AKT蛋白表达升高（P＜0.05）。与miR-210抑制组相比,miR-210对照组PI3K、p-AKT蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：miR-210通过调控PI3K、p-AKT蛋白激活PI3K/AKT通路,促进大鼠牙髓干细胞增殖,抑制牙髓干细胞凋亡。     

miR-19靶向PTEN并介导HMGB1影响小鼠动脉粥样硬化进程的机制研究

摘要 目的：探究miR-19靶向PTEN并介导HMGB1影响小鼠动脉粥样硬化进程的机制研究。方法：SPF级C57BL/6J ApoE^-/-雄性小鼠根据研究目的将实验小鼠分为对照组、AS模型组和miR-19抑制剂组。通过RT-PCR分析小鼠主动脉组织中miR-19的mRNA表达。通过蛋白印迹分析小鼠主动脉PTEN、HMGB1和AKT的蛋白表达。通过荧光素酶活性检测miR-19a与PTEN的靶向关系。通过组织学和红油O染色分析小鼠胸腹主动脉和主动脉窦中的AS斑块面积。通过RT-PCR分析小鼠主动脉主动脉弓内膜中促炎细胞因子和趋化因子的mRNA表达。通过蛋白印迹分析主动脉弓内膜中ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达。结果：AS模型组miR-19mRNA表达较对照组升高（P<0.05）,miR-19抑制剂组miR-19mRNA表达较AS模型组降低（P<0.05）。AS模型组PTEN蛋白表达较对照组降低,HMGB1和AKT蛋白表达较对照组升高（P<0.05）,miR-19抑制剂组PTEN蛋白表达较AS模型组升高,miR-19抑制剂组HMGB1和AKT蛋白表达较AS模型组降低（P<0.05）。AS模型组主动脉和主动脉窦的斑块面积较对照组增加（P<0.05）,miR-19抑制剂组主动脉和主动脉窦的斑块面积较AS模型组减少（P<0.05）。AS模型组TNF-α、IL-β、IL-6和CXCL2的mRNA表达较对照组升高（P<0.05）,miR-19抑制剂组TNF-α、IL-6、IL-β和CXCL2的mRNA表达较AS模型降低（P<0.05）。AS模型组ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达较对照组升高（P<0.05）,miR-19抑制剂组ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达较AS模型组降低（P<0.05）。结论：miR-19通过靶向调控PTEN表达激活HMGB1/PI3K/Akt信号通路,这可能会促进VSMCs的异常增殖、迁移和炎症反应,有助于AS的进展。     

阿尔茨海默病血清miR-137、miR-138表达与认知功能损害和外周血淋巴细胞PI3K/Akt信号通路的关系研究

摘要 目的：探讨阿尔茨海默病（AD）患者血清微小核糖核酸（miR）-137、miR-138表达与认知功能损害和外周血淋巴细胞磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路的关系。方法：选取2020年1月至2022年5月青岛大学附属医院神经内科收治的95例AD患者（AD组）,根据临床痴呆评定量表（CDR）评分将患者分为轻度组（1分,35例）、中度组（2分,42例）、重度组（3分,18例）,另选取63例体检健康志愿者为对照组。检测AD组、对照组血清miR-137、miR-138表达水平以及外周血淋巴细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达,采用简易智能精神状态检查量表（MMSE）、蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评估认知功能。分析血清miR-137、miR-138与MMSE、MoCA评分以及外周血淋巴细胞PI3K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白基因（Bax）表达的相关性。结果：AD组血清miR-137水平、外周血淋巴细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平及MMSE、MoCA评分低于对照组（P＜0.05）,血清miR-138、外周血淋巴细胞Bax蛋白表达水平高于对照组（P＜0.05）。重度组血清miR-137水平、外周血淋巴细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平及MMSE、MoCA评分低于中度组和轻度组（P＜0.05）,且中度组低于轻度组（P＜0.05）;重度组血清miR-138、外周血淋巴细胞Bax蛋白表达水平高于中度组和轻度组（P＜0.05）,且中度组高于轻度组（P＜0.05）。AD患者血清miR-137水平与MMSE、MoCA评分、外周血淋巴细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达呈正相关（P＜0.05）,与外周血淋巴细胞Bax蛋白表达呈负相关（P＜0.05）;AD患者血清miR-138水平与MMSE、MoCA评分、外周血淋巴细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达呈负相关（P＜0.05）,与外周血淋巴细胞Bax蛋白表达呈正相关（P＜0.05）。结论：AD患者的血清miR-137表达水平降低、miR-138表达水平增高,与认知功能障碍有关,且miR-137、miR-138可能通过调控PI3K/Akt信号通路参与AD发病过程。     

千金藤素腹腔注射对卵巢癌模型大鼠的作用及其机制研究

摘要 目的：研究千金藤素腹腔注射对卵巢癌模型大鼠的作用及其机制。方法：选取30只SD级清洁级健康雌性大鼠,按照随机数字表法分成模型组、实验组与空白对照组,每组各10只。空白对照组不予以处理,模型组与实验组建立卵巢癌模型,且实验组在造模后予以千金藤素腹腔注射干预,使用剂量为20 mg/kg每次,1次/d,给药30d,模型组与空白对照组予以等量生理盐水干预。比较各组大鼠荷瘤重量、腹水量以及肿瘤体积,癌胚抗原（CEA）、糖类抗原153（CA153）及人附睾蛋白（HE4）表达水平,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、张力蛋白同源缺失的染色体（PTEN）表达,免疫指标水平。结果：模型组与实验组大鼠荷瘤重量、腹水量、肿瘤体积及CEA、CA153、HE4表达水平均高于空白对照组,且实验组大鼠上述各项指标水平均低于模型组（均P＜0.05）。模型组及实验组大鼠的PI3K、p-mTOR、PTEN表达水平均低于空白对照组,且实验组大鼠的PI3K、p-mTOR、PTEN表达水平均高于模型组（均P＜0.05）。模型组及实验组大鼠的CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平均低于空白对照组,且实验组大鼠CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平均高于模型组（均P＜0.05）;模型组及实验组大鼠的CD8⁺水平均高于空白对照组,且实验组大鼠CD8⁺水平低于模型组（均P＜0.05）。结论：千金藤素腹腔注射对卵巢癌模型大鼠具有明显的抑癌作用,有利于下调肿瘤标志物水平,其主要作用机制可能与调控PI3K/mTOR信号通路、PTEN表达以及免疫功能有关。     

miR-22-3p通过激活PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路加重慢性阻塞性肺疾病

摘要 目的：探索miR-22-3p对慢性阻塞性肺疾病（COPD）的影响及作用机制。方法：将7周龄（体重250~280 g）雄性SD大鼠随机分为5组（n=12）：对照组（Con组）、COPD组、COPD+NC-agomir组、COPD+miR-22-3p-agomir组、COPD+NC-antagomir组和COPD+miR-22-3p-antagomir组。Con组大鼠为正常饲养的大鼠,其他组大鼠均通过香烟烟雾（CS）和脂多糖（LPS）诱导COPD动物模型。在CS暴露当天,Con组和COPD组大鼠鼻腔内注射50 μL生理盐水,COPD+NC-agomir组、COPD+miR-22-3p-agomir组、COPD+NC-antagomir组和COPD+miR-22-3p-antagomir组大鼠分别鼻腔内注射50 μL 10 nmoL的NC-agomir、miR-22-3p-agomir、NC-antagomir和miR-22-3p-antagomir,每2周注射1次,共注射6次。CS暴露90 d后,检测各组大鼠的最大自主分钟通气量（MVV）、0.3 s用力呼气量（FEV0.3）、用力肺活量（FVC）和最大呼气峰流速（PEF）。通过ELISA法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）水平。通过苏木精-伊红（HE）染色评价肺组织损伤。根据试剂盒说明检测肺组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。通过RT-PCR检测肺组织miR-22-3p、磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、CD86、CD206和精氨酸酶1（ARG1）mRNA水平。通过Western blot检测肺组织PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT、核因子-κB（NF-κB） p65和p-NF-κB p65的蛋白表达水平。结果：与COPD组和COPD+NC-antagomir组相比,COPD+miR-22-3p-antagomir组大鼠的MVV、FEV0.3/FVC和PEF均升高（P<0.05）;肺泡出血、肺泡壁断裂、肺泡间隔水肿和炎性细胞浸润等病变减轻;BALF中的IL-1β、TNF-α和MIP-2水平均降低（P<0.05）;肺组织SOD水平升高,MDA水平降低（P<0.05）;肺组织iNOS和CD86 mRNA相对表达量降低,CD206和ARG1 mRNA相对表达量升高（P<0.05）;肺组织miR-22-3p相对表达量降低,PTEN mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）;肺组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-NF-κB p65/NF-κB p65的蛋白相对表达量降低（P<0.05）。结论：miR-22-3p在COPD大鼠肺组织中上调,可能通过激活PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路,促进肺组织炎症反应和氧化应激,加重大鼠肺功能障碍和肺组织结构损伤。     

血清miR-26a、miR-130a与老年急性脑梗死患者PI3K/Akt信号通路和预后的关系研究

摘要 目的：研究血清miR-26a、miR-130a与老年急性脑梗死（ACI）患者磷酸酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路和预后的关系。方法：选取2020年3月-2022年10月我院收治的98例老年ACI患者作为研究组,同期选取60例于本院体检健康的老年人作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测血清miR-26a、miR-130a表达水平,蛋白免疫印迹法检测外周血单个核细胞中PI3K、Akt蛋白表达;采用Pearson相关性分析miR-26a、miR-130a表达水平与PI3K、Akt蛋白表达的相关性。患者治疗后行1个月随访,根据改良Rankin量表（mRS）评分分为预后良好组（n=55例,mRS评分≤2分）和预后不良组（n=43例,评分＞2分）。收集患者的一般资料,采用Logistic回归模型分析老年ACI患者预后的影响因素。结果：研究组血清miR-26a表达水平高于对照组,miR-130a表达水平低于对照组（P＜0.05）。研究组PI3K蛋白表达量低于对照组,Akt蛋白表达量高于对照组（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,miR-26a表达水平与PI3K蛋白表达量呈负相关、与Akt蛋白表达量呈正相关,miR-130a表达水平与PI3K蛋白表达量呈正相关、与Akt蛋白表达量呈负相关（P＜0.05）。预后良好组与预后不良组在年龄、房颤占比、入院时美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分、血糖及血清miR-26a、miR-130a表达水平方面比较具有统计学意义（P＜0.05）。Logistic回归分析显示,年龄偏大、入院时NIHSS评分偏高、血糖偏高及血清miR-26a表达水平升高为老年ACI患者预后不良的危险因素,miR-130a表达水平升高为其保护因素（P＜0.05）。结论：老年ACI患者血清miR-26a表达水平升高、miR-130a表达水平下降,与PI3K/Akt信号通路密切相关,是老年ACI患者预后的影响因素。     

miR-155通过促进炎症因子释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展

摘要 目的：探讨miR-155在脓毒症致肠道功能障碍中的表达及作用。方法：（1）临床实验：以2022年5月至2022年8月入住新疆医科大学第一附属医院重症医学科的脓毒症患者和同期健康体检者为研究对象,根据急性胃肠损伤分级（AGI）将脓毒症患者分为AGI组和非AGI组。根据28 d生存情况分为存活组和死亡组,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）法前瞻性观察各组外周血miR-155的变化。（2）体内实验：将20只雄性S/D大鼠按照随机数字表法分为假手术组（sham组）和盲肠结扎穿孔术组（CLP组）,采用qRT-PCR及Western blot法检测miR-155、肠道紧密连接蛋白（ZO-1、claudin-1）的表达,ELISA法检测大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18的表达水平。(3)体外实验：培养人结直肠腺癌细胞（Caco-2）,并分为正常对照组(完全培养基培养48 h)、脂多糖组（完全培养基培养24 h后加入10 μg/mL LPS处理24 h）。采用qRT-PCR检测miR-155的表达。在倒置荧光显微镜下观察细胞形态的变化。采用CCK-8检测细胞活力。采用免疫荧光观察Caco-2细胞中紧密连接蛋白ZO-1分布的变化。并行细胞旁通透性实验,观察两组细胞旁通透性的变化。结果：（1）脓毒症组和健康对照组相比,脓毒症患者外周血miR-155较健康对照组明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。AGI组患者外周血miR-155表达较非AGI组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。脓毒症死亡患者外周血miR-155表达显著升高(P<0.05)。（2）应用CLP模型进行体内动物实验,CLP组大鼠肠道组织miR-155表达较假手术组（sham组）明显升高。CLP组大鼠肠道紧密连接蛋白（ZO-1、claudin-1）较sham组下降,差异具有统 计学意义(P<0.05)。ELISA结果提示,CLP大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18水平较sham组显著升高（P<0.05）,且肠道组织中miR-155水平与IL-1β、IL-6、IL-18呈正相关（r=0.542,r=0.906,r=868,P<0.05）。（3）与正常对照组相比,经LPS处理后细胞形态破坏、细胞间紧密连接破坏、细胞活力减弱、细胞旁通透性增加。结论：脓毒症发生时伴有肠道屏障功能障碍,miR-155在脓毒症肠道屏障功能障碍中表达升高,并可能通过促进炎症因子的释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展。miR-155异常表达对脓毒症患者早期肠道功能障碍诊断及预后的评估具有重要价值,可作为脓毒症早期肠道损伤诊断及预后情况的重要指标。     

miR-145、miR-186表达与非小细胞肺癌组织临床病理特征和PI3K/Akt/ mTOR信号通路的关系

摘要 目的：探讨微小核糖核酸（miR）-145、miR-186表达与非小细胞肺癌（NSCLC）临床病理特征和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的关系。方法：选择2020年3月至2023年3月我院收治的128例行肺癌根治手术治疗的NSCLC患者,取其术中癌组织和癌旁组织（距离癌组织5 cm以上）,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测miR-145、miR-186以及PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA表达。分析miR-145、miR-186表达与NSCLC患者临床病理特征的关系;Pearson检验分析NSCLC患者癌组织miR-145、miR-186表达与PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA表达的相关性。结果：癌组织miR-145、miR-186表达低于癌旁组织（P＜0.05）,低分化、TNM ⅢA期、淋巴结转移的NSCLC组织miR-145、miR-186表达低于中高分化、TNM Ⅰ～Ⅱ期、未发生淋巴结转移的NSCLC组织（P＜0.05）。癌组织PI3K mRNA、Akt mRNA 、mTOR mRNA表达均高于癌旁组织（P＜0.05）,癌组织miR-145、miR-186表达与PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA表达均呈负相关（P＜0.05）。结论：NSCLC组织中miR-145、miR-186表达下调,miR-145、miR-186表达下调可能激活PI3K/ Akt/mTOR信号通路促使NSCLC进展,且与NSCLC患者癌组织低分化、TNM ⅢA期、淋巴结转移有关。     

肝细胞癌组织miR-124-3p、miR-212-5p表达与PI3K/Akt信号通路和预后的关系研究

摘要 目的：探讨肝细胞癌组织中微小核糖核酸（miR）-124-3p、miR-212-5p表达与磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路和预后的关系。方法：选择2017年9月至2019年9月徐州医科大学附属医院肝胆外科收治的93例肝细胞癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝细胞癌组织中miR-124-3p、miR-212-5p、PI3K 信使RNA（mRNA）、Akt mRNA的表达。Pearson相关性分析miR-124-3p、miR-212-5p表达与PI3K/Akt信号通路相关mRNA表达的相关性。绘制Kaplan-Meier生存曲线,Log-Rank检验不同miR-124-3p、miR-212-5p表达肝细胞癌患者3年总生存率（OS）的差异。结果：肝细胞癌组织中miR-124-3p表达低于癌旁组织（P＜0.05）,miR-212-5p、PI3K mRNA、Akt mRNA表达高于癌旁组织（P＜0.05）。肝细胞癌组织中miR-124-3p表达与PI3K mRNA、Akt mRNA表达呈负相关（P＜0.05）,miR-212-5p表达与PI3K mRNA、Akt mRNA表达呈正相关（P＜0.05）。Ⅱa期、低分化患者肝细胞癌组织中miR-124-3p表达低于Ⅰa-Ⅰb期、中高分化患者（P＜0.05）,miR-212-5p表达高于Ⅰa-Ⅰb期、中高分化患者（P＜0.05）。随访期间死亡37例, miR-124-3p低表达组3年OS为42.55%,低于miR-124-3p高表达组的78.26%（P＜0.05）,miR-212-5p高表达组3年OS为50.00%,低于miR-212-5p低表达组的71.11%（P＜0.05）。结论：肝细胞癌组织中miR-124-3p表达下调,miR-212-5p表达上调,且与肝细胞癌PI3K/Akt信号通路激活,PI3K mRNA和Akt mRNA高表达,低分化,CNLC分期Ⅱa期以及低OS有关。     

北沙参对肺癌大鼠PI3K/Akt信号通路及免疫炎症反应的影响

摘要 目的：探讨北沙参对肺癌大鼠PI3K/Akt信号通路及免疫炎症反应的影响。方法：从60只Wistar大鼠中随机选取15只作为对照组,其余45只大鼠采用气管内灌注致癌碘油液建立肺癌模型,按照随机数字表法将其分为模型组（n=15）、环磷酰胺组（n=15）、北沙参组（n=15）,开展前瞻性研究。对照组、模型组给予生理盐水灌胃,环磷酰胺组给予环磷酰胺干预,北沙参组给予北沙参干预。比较各组大鼠免疫功能、炎症因子水平及PI3K/Akt表达。结果：与对照组相比,环磷酰胺组、北沙参组、模型组脾脏指数依次降低,而肺脏指数依次升高（P<0.05）。与对照组相比,环磷酰胺组、北沙参组、模型组CD3⁺、CD4⁺百分比及CD4⁺/CD8⁺依次降低,而CD8⁺百分比依次升高（P<0.05）。与对照组相比,环磷酰胺组、北沙参组、模型组白介素6（IL-6）、白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平依次升高（P<0.05）。与对照组相比,环磷酰胺组、北沙参组、模型组PI3K、Akt表达水平依次升高（P<0.05）。结论：北沙参能够有效调节肺癌大鼠的脏器指数,促进免疫功能改善,抑制炎症反应,调控PI3K/Akt信号通路可能是其发挥作用的重要机制。     

过表达MicroRNA-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控人退变髓核细胞自噬的研究

目的:探讨过表达mi R-21通过PTEN/PI3K/AKT通路对人退变髓核细胞自噬的影响。方法:构建稳定过表达mi R-21 mimic人退变髓核细胞,转染无意义序列作为mi R-21 mimic control组,采用RT-qPCR检测转染效率;利用MDC荧光染色法观察细胞自噬泡;Western-Blot检测细胞自噬相关蛋白LC3和P62的表达以及PTEN/PI3K/AKT信号通路中关键蛋白PTEN、PI3K及AKT的表达水平。结果:RT-qPCR结果表明mi R-21 mimic转染成功且效率较高,与mi R-21 mimic control组及空白细胞对照组相比,差异显著(P0.05)。荧光显微镜观察MDC染色情况,mi R-21 mimic组的细胞中几乎没有发现自噬体,而mi R-21 mimic control组以及空白对照组细胞中自噬体均较多,与前者相比差异均明显,具有统计学意义(P0.05)。mi R-21 mimic组细胞中LC3-II/LC3-I表达量的比值均显著低于mi R-21 mimic control组及空白对照组细胞(P0.05);而P62在mi R-21 mimic组细胞中表达量显著高于mi R-21 mimic control组及空白细胞对照组,具有统计学意义(P0.05)。mi R-21 mimic组中PTEN蛋白的表达水平较低,与另外两组相比具有统计学意义(P0.05);磷酸化的PI3K(p-PI3K)和AKT(p-Akt)在mi R-21 mimic组中均明显高于mi R-21 mimic control组和空白细胞对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:mi R-21可以通过靶向沉默PTEN,促进PI3K和AKT发生磷酸化,进而使PTEN/PI3K/AKT信号通路被激活,最终抑制人椎间盘退变髓核细胞的自噬。     

干扰素诱导的跨膜蛋白1在宫颈鳞癌中的表达及其生物学作用

目的:探讨干扰素诱导的跨膜蛋白1(IFITM1)在宫颈鳞癌中的表达及其生物学作用.方法:通过免疫组化、RT-PCR和Western blot检测宫颈鳞癌组织和癌旁组织中IFITM1的表达.使用靶向IFITM1的siRNA(si-IFITM1组)和高表达IFITM1基因的重组pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-si-...     

基于PI3K/PTEN/AKT信号途径探讨褪黑素对脊髓损伤大鼠突触可塑性的影响

目的:探讨褪黑素对脊髓损伤大鼠突触可塑性的影响及磷脂酰肌醇3-激酶/张力蛋白同源基因/蛋白激酶B(PI3K/PTEN/AKT)信号途径在其中的作用。方法:选择4月龄SPF级雄性SD大鼠48只,将其随机分为对照组(CON)、模型组(SCI)、褪黑素组(MT)和褪黑素受体拮抗剂组(LUZ),每组12只大鼠。对照组大鼠背部切口后缝合,余下各组大鼠使用改良的Allen's法建立T9水平的脊髓损伤模型。模型建立后,褪黑素组及褪黑素受体拮抗剂组每天腹腔注射褪黑素及褪黑素抑制剂,剂量为12.5 mg·kg~(-1)·d~(-1),对照组和模型组每天注射同体积的生理盐水。治疗后第3、7、14、21、28天进行BBB评分,实验结束处死大鼠取胸椎8-10节段脊髓组织,分别采用免疫组化方法测尼氏小体数量及Western Blot检测PTEN、Synapsin、PSD-95、Gap-43、Akt蛋白的表达。结果:与SCI模型大鼠相比,MT给药干预14 d后的SCI大鼠BBB评分及痛觉压力值均明显降低(P0.05),尼氏小体灰度值提高(P 0.05),PTEN、Synapsin、PSD-95、Gap-43、Akt蛋白的表达均显著上调(P 0.05)。结论:MT可能通过激活PI3K/PTEN/Akt信号途径,上调突触可塑性相关蛋白的表达,促进SCI大鼠突触修复。     

优思悦对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢功能的影响及其机制研究

摘要 目的：探讨优思悦对硫酸脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone,DHEA）诱导的多囊卵巢综合征模型大鼠体内性激素：睾酮( testosterone,T)、雌二醇( estradiol,E2 )、促黄体生成素( luteinizing hormone,LH)及卵泡刺激素( follicle－stimulating hormone,FSH)及PI3K /AKT信号通路的的影响。方法：将60只雌性SD大鼠随机均分为3组,包括空白组、模型组及治疗组。空白组每日颈部皮下注射0.2 mL大豆油,其余各组每日颈部皮下注射DHEA 60 mg/kg+0.2 mL大豆油,持续注射35 d。造模第21 d时,每日上午制备大鼠阴道涂片,将其放置在显微镜下观察,根据细胞形态判定大鼠的动情周期,无动情周期规律视为造模成功。造模第36 d时,连续4 w对大鼠进行灌胃,每天一次。检测大鼠阴道分泌物的细胞形态、大鼠卵巢中卵泡发育的情况。放射免疫法测定大鼠血清中T、E2、LH、FSH的含量;RT-qPCR法检测大鼠卵巢组织中PI3K /AKT信号通路相关因子（IＲS-1、AKT-2、CSK-3β、GLUT-4 mRNA和PTEN mRNA）的表达变化。结果：空白组大鼠的动情周期有规律性,而模型组大鼠的动情周期失去规律性,且模型组大鼠卵巢中的卵泡呈囊状扩张,血清中T、LH水平明显升高（P<0.05）,同时卵巢组织中的IRS-1、AKT-2、CSK-3β、GLUT-4 mRNA表达减少（P<0.05）,PTEN mRNA表达增多（P<0.05）。与模型组比较,优思悦可改善PCOS模型大鼠动情周期,降低血清T、LH水平（P<0.05）,改善卵泡发育,减少囊状扩张卵泡的形成,上调IRS-1、AKT-2、CSK-3β、GLUT-4 mRNA表达量,下调PTEN mRNA 表达量。结论：优思悦可有效治疗DHEA诱导的PCOS模型大鼠,与卵巢中的PI3K /AKT信号通路相关因子的基因表达相关。     

程序性死亡配体-1在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨程序性死亡配体-1(PD-L1)在鼻咽癌组织中的表达及临床意义。方法:选取2015年7月-2017年6月期间在我院接受治疗的鼻咽癌患者333例,收集其鼻咽癌组织作为观察组标本,另选取同期在我院接受治疗的慢性鼻咽炎患者102例的鼻咽炎组织作为对照组标本。采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组患者鼻咽组织中PD-L1蛋白和PD-L1 mRNA的表达,并分析观察组患者鼻咽癌组织中PD-L1蛋白和PD-L1 mRNA的表达与临床病理参数的关系。结果:对照组患者鼻咽炎组织中PD-L1蛋白的阳性率为0.00%(0/102),观察组患者鼻咽癌组织中PD-L1蛋白的阳性率为69.37%(231/333),两组PD-L1蛋白的阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示,对照组患者鼻咽炎组织中未见PD-L1 mRNA表达,观察组患者鼻咽癌组织中PD-L1 mRNA的相对表达水平为(0.82±0.27),差异有统计学意义(P0.05)。观察组患者鼻咽癌组织中PD-L1蛋白和PD-L1 mRNA的表达与年龄、性别无关(P0.05),而TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移、有吸烟史患者鼻咽癌组织中PD-L1蛋白阳性率和PD-L1 mRNA的表达均高于TNM分期Ⅰ-Ⅱ期、无淋巴结转移、无吸烟史患者(P0.05)。结论:在鼻咽癌组织中PD-L1蛋白和PD-L1 mRNA呈现高表达,且其表达与TNM分期、淋巴结转移、吸烟史有关。     

大鼠肾组织PETN表达下调在糖尿病肾病发展中的作用

转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)激活磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)通路与糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发生发展密切相关,而第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)可以负调节PI3K-PKB/Akt通路。本研究旨在观察糖尿病大鼠肾组织PTEN的表达变化及其在DN发生发展中的可能作用。16只Sprague-Dawley大鼠分成正常对照组和糖尿病组(n=8)。尾静脉注射链脲菌素(streptozotocin,STZ)复制糖尿病大鼠模型;12周处死大鼠,检测相应生化指标并计算肾脏指数;HE染色观察肾组织病理学改变;免疫组化和Western blotting检测PTEN、TGF-β1、PI3Kp110α、Akt1、p-Akt1(Ser473)、纤维连接蛋白(fibronectin,...     

Correlation between PTEN and P62 gene expression in rat colorectal cancer cell

ObjectiveAutophagy is a cellular pathway that regulates the transportation and degradation of cytoplasmic macromolecules and organelles towards lysosome, which is often related to the tumorigenesis and tumor suppression. Here, we investigate the regulating effect of PTEN gene on autophagy-related protein P62 in rat colorectal cancer (CRC) cells and explore the application value of PTEN gene in clinic.MethodsRat colorectal cancer was induced by intraperitoneal injection of 1,2-dimethyl hydrazine in male ACI rats. A total of 20 rats were randomly selected from those successfully induced with CRC as the experimental group, while 10 healthy rats as control. The rat CRC cells were isolated and cultured. After transfecting the rat CRC cells with pEGFP-N1-PTEN plasmid, RT-PCR was adopted to examine that gene expression of p62 and PTEN, while Western blotting was used to detect the protein expression of p62 and PTEN. Also, the proliferation of CRC cells was measured by MTT assay.ResultsThe expression of PTEN gene in the experimental group was significantly inhibited as compared with the control group, while the expression of P62 gene was significantly increased (p < 0.05). Western blotting demonstrated that the PTEN protein in the experimental group was lower, while the expression of P62 protein was higher. When the CRC cells were transfected with pEGFP-N1-PTEN plasmid, the PTEN expressions were elevated, while p62 was down-regulated. Also, the proliferation of CRC cells was inhibited.ConclusionThe expression of PTEN gene is negatively correlated with the expression of P62 gene in rat CRC cells. And the expression of PTEN gene can inhibit the occurrence and development of colorectal cancer, thus providing theoretical basis for future clinical treatment.     

联合检测EB-IgG、IgM，EB-DNA在鼻咽癌中的诊断价值分析

摘要 目的：分析联合检测EB-IgG、IgM,EB-DNA在鼻咽癌中的诊断价值。方法：选择我院自2019年1月至2022年1月接诊的100例鼻咽癌患者作为观察组,另选同期的100例健康体检者作为对照组。使用化学发光免疫夹心法检测血清EB-IgG、IgM,实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆EB-DNA表达水平;比较两组EB-IgG、IgM和EB-DNA的阳性率,分析不同临床分期的鼻咽癌患者EB-IgG、IgM和EB-DNA的阳性率及EB-DNA表达水平,使用AUC评价EB-IgG、IgM联合EB-DNA对鼻咽癌的诊断效能,计算单独和联合应用上述指标诊断鼻咽癌的敏感度和特异度。结果：观察组EB-IgG、IgM和EB-DNA的阳性率均明显高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;EB-IgG、IgM和EB-DNA的阳性率及EB-DNA表达水平在不同临床分期的鼻咽癌患者中差异均有统计学意义（P＜0.05）,均随着临床分期升高而升高;经ROC曲线分析,EB-IgG、IgM联合EB-DNA诊断鼻咽癌的AUC为0.930,大于单一指标EB-IgG的0.755、IgM的0.740和EB-DNA的0.750,差异均有统计学意义（P＜0.05）;EB-IgG、IgM联合EB-DNA诊断鼻咽癌的敏感度为97.00 %,特异度为96.00 %,准确度为96.50 %。结论：EB-IgG、IgM和EB-DNA均对鼻咽癌具有一定的临床诊断价值,联合检测有助于提高鼻咽癌的诊断效能,值得予以重视应用。     

Pseudogene PTENP1 sponges miR-214 to regulate the expression of PTEN to modulate osteoclast differentiation and attenuate osteoporosis

Background aimsOsteoporosis (OP) is a common bone metabolic disease with a high incidence. Our study aimed to explore the pseudogene PTENP1/miR-214/PTEN axis to modulate the osteoclast differentiation in osteoporosis.MethodsPatients with osteoporosis were recruited in our study, and RANKL-induced osteoclast differentiation and ovariectomy-induced osteoporosis mouse model were established in vitro and in vivo, respectively.ResultsPseudogene PTENP1 and PTEN were significantly down-regulated and miR-214 was up-regulated in osteoporosis patients. In addition, overexpression of PTENP1 or silence of miR-214 inhibited the expression levels of osteoclast specific markers and osteoclast differentiation induced by RANKL. Overexpression of PTENP1 or silence of miR-214 also inhibited the levels of phosphorylation of PI3K and AKT, p65 nuclear translocation, IκBα degradation and the expression level of NFATc1. AlsoSilence of PTENP1 or overexpression of miR-214 induced the osteoclast differentiation under normal physiological condition. Pseudogene PTENP1 sponged miR-214 to regulate the expression of PTEN.ConclusionsIn an ovariectomy-induced osteoporosis mouse model, obvious pathological changes in bone tissues were found, and bone marrow mononuclear cells in this group were more likely to differentiate into osteoclasts. Therefore, pseudogene PTENP1 sponged miR-214 to regulate the expression of PTEN to inhibit osteoclast differentiation and attenuate osteoporosis by suppressing the PI3K/AKT/NF-κB signaling pathway.