原子力显微镜下淋巴瘤患者血浆外泌体的物理特征

目的 外泌体是细胞外囊泡的一种，被认为是一种生物信息载体。本文探究在AFM检测下淋巴瘤患者血浆中外泌体的物理特性。方法 从不同亚型淋巴瘤患者的外周血中提取外泌体，首先利用静电吸附法将分离的外泌体固定在云母基质上，然后应用原子力显微镜（AFM）扫描获取外泌体的多参数图像。在纳米/微尺度上，取得外泌体的形貌与力学信息并统计比较。结果 利用AFM表征单个外泌体的力学信息。其中，表面黏附力图像显示，外泌体边缘的能量耗散高于中心部分，因此具有显著边缘效应，来自不同亚型淋巴瘤患者的血浆中外泌体杨氏模量存在差异。结论 血浆中外泌体可被提取并在经过处理固定后可被AFM捕获并测量，血浆外泌体有望成为肿瘤诊断及治疗的新型生物标志物，外泌体的物理特性可能与其生物学性能存在关联。     

血清外泌体中长链RNA作为早期肾癌诊断标志物的研究

摘要 目的：肾癌早期无明显症状,且无血清诊断标志物,晚期缺乏有效治疗手段。外泌体的生物学功能及现有研究报道为早期肾癌的诊断提供了新的理论基础和新思路,本文旨在尝试在肾癌血清外泌体中寻找肾癌诊断标志物以有助于提高肾癌的诊断水平,减少肾癌死亡率。方法：取肾癌肿瘤组和对照组各10个样本,用试剂盒（PEG法）分离外泌体,提取RNA后建库测序,数据处理后以|log2(fold change) |>1和显著水平q_value<0.001为标准筛选得一组显著差异基因,设计引物探针后大样本qPCR验证,对数据进行统计并作t检验分析,通过LASSO回归建立诊断模型,ROC-AUC判断诊断价值。结果：RNA-seq并深度分析筛出PFN2 RAB4B PHEX DACH1 Linc01765五个基因,运用LASSO回归建立了早期肾癌诊断模型,计算ROC-AUC值是0.818。结论：在肾癌血清外泌体中筛到一组基因,通过LASSO回归建立早期肾癌诊断模型,ROC-AUC值达0.818,具有一定的临床应用价值。     

CTLA-4在弥漫大B细胞淋巴瘤患者外泌体的表达及初步机制研究

摘要 目的：探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者外泌体的表达及初步机制。方法：2019年6月至2020年11月就诊于本院的DLBCL患者纳入本项研究,分为缓解组和复发组;选取来医院体检的健康志愿者做为对照组;采用试剂盒分离外泌体,CD63抗体包被磁珠结合后,流式细胞术检测CTLA-4+外泌体的比例;流式细胞术检测CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和调节性T细胞（Treg细胞）的比例。结果：相对于对照组,缓解组DLBCL患者CTLA-4+外泌体的比例升高了37.42%;复发组DLBCL患者CTLA-4+外泌体的比例为6.04%,相对于缓解组,差异具有显著的统计学意义;复发组DLBCL患者CD4/CD8⁺T细胞比值和Treg细胞比例分别为0.85和0.44%,相对于缓解组,差异均具有显著的统计学意义;相关性分析结果显示CTLA-4+外泌体比例与CD4/CD8⁺T细胞比值呈负相关,而与Treg细胞比例呈正相关。结论：CTLA-4+外泌体比例在DLBCL患者显著升高,且与淋巴瘤的治疗效果和抗肿瘤免疫反应均具有紧密的相关性。     

血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平与卵巢癌患者临床病理特征的关系及其诊断价值分析

摘要 目的：探讨卵巢癌患者血浆外泌体中微小RNA（miR）-1290和 miR-1307的表达,分析两者与临床病理参数的关系及诊断价值。方法：选取2019年1月至2021年1月于靖江市人民医院诊治的60例卵巢癌患者为卵巢癌组,另分别选取同期52例良性卵巢肿瘤患者和50例女性健康体检者为良性肿瘤组和健康对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-1290、miR-1307在各组血浆外泌体中的表达,分析miR-1290、miR-1307与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血浆外泌体miR-1290、miR-1307对卵巢癌的诊断效能。结果：与良性肿瘤组和健康对照组相比,卵巢癌组的血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平较高（P＜0.05）。卵巢癌组的miR-1290表达水平与FIGO分期、分化程度及淋巴结转移有关,miR-1307表达水平与FIGO分期、淋巴结转移有关（P＜0.05）;卵巢癌患者血浆外泌体miR-1307表达与miR-1290表达呈显著正相关（r＝0.478,P＜0.05）。血浆外泌体miR-1290、miR-1307联合应用诊断卵巢癌的曲线下面积（AUC）（0.95CI）为0.726（0.526～0.926）,高于两指标单独应用的0.724（0.466～0.987）、0.845（0.750～0.933）。结论：卵巢癌患者血浆外泌体miR-1290、miR-1307表达水平升高,两者联合检测对卵巢癌的早期诊断具有较高的价值,有望成为新的卵巢癌的分子标志物。     

胶质瘤来源外泌体通过高迁移率族蛋白B1促进胶质瘤干细胞形成

摘要 目的：研究胶质瘤来源外泌体中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对胶质瘤干细胞形成的影响及其意义。方法：使用外泌体提取试剂盒提取原代胶质母细胞瘤来源外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度电位仪和Western blotting对外泌体进行鉴定;采用Western blotting检测外泌体中HMGB1的表达量;通过qRT-PCR、Western blotting、克隆球计数检测外泌体对胶质瘤干细胞形成的影响;siRNA敲低HMGB1的表达水平,并通过qRT-PCR、Western blotting、克隆球计数检测外泌体中HMGB1对胶质瘤干细胞形成的影响。结果：原代胶质瘤细胞可以分泌外泌体到肿瘤微环境并且外泌体中存在HMGB1;原代胶质瘤细胞来源外泌体可以上调邻近胶质瘤细胞干性相关分子CD133、OCT4、NANOG、SOX2的表达并促进干细胞克隆球的形成;通过siRNA敲低原代胶质瘤细胞HMGB1的表达后,外泌体中HMGB1的含量降低并且外泌体促进胶质瘤干细胞形成的作用减弱。结论：胶质瘤细胞来源外泌体可以通过HMGB1促进胶质瘤干细胞的形成。     

外泌体与乳腺癌的相关性研究进展

外泌体在发现之初,被认为是细胞排泄废物。而如今外泌体的功能受到了医学界的广泛关注,尤其是在肿瘤的转移、早期诊断、分析预后以及靶向治疗等方面的功能成为研究热点。外泌体与乳腺癌关系的相关研究已被陆续报道。研究表明,外泌体对乳腺癌的发生、发展、早期诊断、临床治疗、药物抵抗、预后评估等有着重要的意义。现对外泌体在乳腺癌诊断、转移、治疗方面的研究进展进行综述。     

分泌包载ANXA2-MS2 RNA外泌体的稳转细胞株的构建

摘要 目的：基于MCP-MS2示踪系统构建能稳定分泌含有标签的膜联蛋白A2（ANXA2）RNA的外泌体的供体细胞株。方法：利用慢病毒载体构建稳定表达MCP-EGFP的HEK293细胞株,采用流式细胞技术筛选具有较好荧光特性的单克隆细胞株。然后再次通过慢病毒稳定表达系统构建出能分泌结合有MCP-EGFP标记的ANXA2 RNA外泌体的供体细胞株。通过透射电镜、NTA、NanoFCM、共聚焦显微镜等仪器对供体细胞所产生的外泌体进行表征。结果：通过慢病毒载体成功构建了MCP-EGFP稳定表达细胞株,然后利用该细胞株通过慢病毒载体成功导入含有MS2标签的ANXA2基因。实验结果表明,构建的供体细胞与正常细胞所分泌的外泌体形态相似,实实施时荧光定量PCR的结果显示分泌的外泌体中含有MS2特殊序列,而同时Western blot的结果显示分泌的外泌体中含有EGFP蛋白。结论：通过慢病毒法成功建立了能分泌含有MS2标记的ANXA2 RNA的外泌体供体细胞株,为高效、稳定的装载特定RNA外泌体的供体细胞株的构建提供了新的方法和理论基础。     

间充质干细胞来源外泌体对脑内小胶质细胞极化和炎症因子释放的影响及机制研究

摘要 目的：探究间充质干细胞外泌体对脑内小胶质细胞极化和炎症因子释放的影响及其机制。方法：收集体外培养的间充质干细胞上清，超高速冷冻离心获取外泌体。采用纳米颗粒系统和透射电子显微镜分别检测外泌体粒径大小、形态结构和功能完整性。通过免疫荧光、ELISA和细胞流式等方式检测LPS刺激下，外泌体对BV2细胞的表型极化和炎症因子释放的影响。采用Western Blot法检测间充质干细胞外泌体对BV2细胞JAK1/STAT3通路活化的影响。结果：（1）间充质干细胞分泌的外泌体粒径大小主要介于40-100 nm，透射电镜显示外泌体形态呈典型膜性"杯盘"状结构；（2）流式结果表明，相比于对照组，LPS组能显著激活M1型小胶质细胞表面标志物CD11b和M2型小胶质细胞表面标志物CD206的表达，而经外泌体处理，CD11b的表达显著被抑制，CD206显著升高。同时ELISA结果证实，相比于LPS组，外泌体组分泌的促炎症因子（IL-1β、IL-6）和NO水平显著降低（P<0.05），抗炎因子（IL-10）显著升高 (P<0.05)；（3）间充质干细胞外泌体显著提高了BV2细胞JAK1/STAT3通路的磷酸化水平。结论：间充质干细胞外泌体通过激活JAK1/STAT3通路有效促进脑内小胶质细胞M1型向M2型极化。     

神经系统中一种新型的潜在治疗工具——外泌体

外泌体(exosomes)是一种由细胞分泌到胞外空间的纳米囊泡(nanovesicles),在神经系统中参与许多生理病理过程。大量研究表明,在神经系统中,外泌体可以作为细胞通讯的信使,参与复杂的细胞间信息交流。同时,外泌体也可作为诊断疾病的生物标志物及小分子物质传递载体,在治疗神经系统疾病中发挥着至关重要的作用。因此,exosomes有望成为治疗神经系统疾病的重要工具。该综述首先阐述了外泌体的基本特性,包括合成、存储、分离等;其次,讨论了间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分泌的外泌体在神经退行性疾病的诊断和治疗中的作用;最后,讨论了外泌体作为治疗神经系统疾病的新型工具将面临的挑战。该综述阐明了外泌体这一快速进展领域及其在神经系统疾病中的作用,特别是其治疗应用的最新进展。     

外泌体在病毒感染诊断和治疗中的作用研究

外泌体是多泡体与细胞质膜融合后释放的细胞外囊泡。它们携带有源自分泌细胞的功能性蛋白质、脂质和核酸,能够介导细胞间通信,并在生物体的致病过程中发挥重要作用。当前,对外泌体在病毒感染中的作用机制研究,以及外泌体作为病毒感染诊断和治疗的潜在标志物研究仍处于初级阶段。首先阐述了外泌体的组成和生物学发生机制;然后重点阐述了外泌体在病毒感染中的作用机制,尤其是其在免疫调节中的作用;最后探讨了外泌体作为病毒感染诊断和治疗的潜在标志物的可能性及其应用前景。     

人脐带干细胞来源的外泌体促进体外培养雪旺细胞迁移的研究

目的:外泌体是活细胞分泌的来源于多囊泡体的膜性囊泡,其主要作用包括携带与运输。雪旺细胞是周围神经再生中非常优秀的种子细胞,但其迁移能力较差,影响修复效果。本文旨在探讨外泌体和雪旺细胞共培养是否可以促进雪旺细胞迁移。方法:本实验通过分离纯化人脐带干细胞外泌体和大鼠坐骨神经雪旺细胞并鉴定,随后将其共培养于Transwell小室观察雪旺细胞迁移率。结果:通过人脐带干细胞超高速离心法得到的外泌体高表达干细胞标志物CD44(92.2±3.6%)、CD73(99.1±0.6%),并且低表达单核细胞表面抗原CD14(0.5±0.06%)以及造血干细胞表面抗原CD34(0.4±0.07%),外泌体鉴定高表达CD81和CD9;雪旺细胞培养鉴定纯度达(92.3±2.7)%;均符合实验要求。通过Transwell小室实验发现外泌体可以明显促进雪旺细胞的迁移,并且具有一定剂量关系。结论:外泌体可以提高雪旺细胞的迁移能力,从而使雪旺细胞在组织工程领域中的应用产生巨大突破。     

The potential role of exosomes in the diagnosis and therapy of ischemic diseases

In the past, exosomes have been thought of as cellular dust. Today, they are thought to be carriers of real biomarkers and intercellular biological information. The composition of exosomes differs according to their source, and the subsequent information they carry, such as protein, microRNA or mRNA, may also be different. Recent studies have demonstrated that exosomes in ischemic diseases can help to make an early diagnosis, and in cellular experiments and animal models, exosomes promote angiogenesis, restrain cell apoptosis and reduce inflammation, among other actions, to protect ischemic organs. There is evidence that these protective effects are related to microRNAs in exosomes. In this review, we discuss the use of exosomes for early diagnosis of ischemic diseases and recent advances in the therapeutic use of exosomes in cell and mammalian models of ischemic diseases.     

Seminal exosomes – An important biological marker for various disorders and syndrome in human reproduction

BackgroundExosomes are nano-sized membrane vesicles, secreted by different types of cells into the body’s biological fluids. They are found in abundance in semen as compared to other fluids. Exosomes contain a cargo of lipid molecules, proteins, phospholipids, cholesterol, mRNAs, and miRNAs. Each molecule of seminal exosomes (SE) has a potential role in male reproduction for childbirth. Many potential candidates are available within the seminal exosomes that can be used as diagnostic markers for various diseases or syndromes associated with male reproduction. Also these seminal exospmes play a major role in female reproductive tract for effective fertilization.AimThe aim of this review is to focus on the advancement of human seminal exosomal research and its various properties.MethodsWe used many databases like Scopus, Google scholar, NCBI-NLM and other sources to filter the articles of interest published in exosomes. We used phrases like “Exosomes in human semen”, “Composition of exosomes in human semen” and other relevant words to filter the best articles.ResultsSeminal exosomes play a major role in sperm functions like cell-to-cell communication, motility of the sperm cells, maintaining survival capacity for the sperm in the female reproductive tract and spermatogenesis. Also, seminal exosomes are used as a carrier for many regulatory elements using small RNA molecules. miRNAs of the seminal exosomes can be used as a diagnostic marker for prostate cancer instead of prostate specific antigen (PSA). Epididymosomes can be used as a biomarker for reproductive diseases and male infertility.ConclusionSeminal exosomes could be used as biological markers for various reproductive disorders, male infertility diagnosis, and it can be used in anti-retroviral research for the identification of novel therapeutics for HIV-1 infection and transmission.     

外泌体miRNA生物标志物在肝癌中的研究进展*

外泌体广泛存在于多种体液中,携带有大量活性物质,如mRNA、miRNA、蛋白和脂质等。其中的miRNA是一类短非编码RNA,在转录后水平调节基因的表达,广泛参与个体生长发育等各生命活动。外泌体miRNA有多种生物学功能,在肿瘤的发生发展、侵袭转移、机体耐药及免疫调控等多方面发挥着重要作用。目前的研究表明,无论是作为肿瘤早筛早诊和预后评估标志物还是用于肿瘤治疗,外泌体miRNA都有很好的应用前景。本文就近年来外泌体miRNA在肝癌中的研究进展和临床应用进行综述。     

流式细胞术检测外周血淋巴细胞诊断淋巴瘤的应用研究

目的:探讨流式细胞术(FCM)检测外周血淋巴细胞在淋巴瘤诊断中的应用价值。方法:通过筛选2011年8月至2017年8月期间初诊的皮肤淋巴瘤病例25例,淋巴节良性病变6例,采用FCM检测外周血淋巴细胞表面抗原分子,通过与病理切片HE染色和免疫组化法(金标准)比较,分析两种检测方法之间的差异。结果:在31例检测病例中,FCM检测结果与金标准检测结果一致性较高(Kappa=0.61):26例检查结果相同,5例检查结果不一致;检测19例T淋巴细胞淋巴瘤,FCM检测结果与金标准检测结果一致性也较高(Kappa=0.57):检测14例初诊为T细胞淋巴瘤病例,FCM检测T淋巴瘤细胞的表面抗原标志CD3分子为阳性,与组织学结果相符,另有5例T细胞淋巴瘤病例HE染色和免疫组化诊断明确,而FCM未能检出。检测6例B细胞淋巴瘤病例,6例淋巴瘤病例FCM检测结果都为阳性,FCM检测B淋巴瘤细胞的表面抗原标志CD19分子为阳性,与金标准检测结果符合率为100%。6例淋巴节良性病变病例FCM检测结果与金标准检测结果一致。结论:通过FCM检测外周血可以检测出部分皮肤淋巴瘤,FCM在皮肤淋巴瘤诊断和分型中有一定的临床价值,是检测皮肤淋巴瘤的有效的辅助方法。     

外泌体在皮肤修复与再生中作用的研究进展

外泌体是直径在30-100 nm左右的囊泡结构。作为一种活细胞分泌的亚细胞成分,外泌体广泛参与细胞之间的交流,并可以作为干细胞的旁分泌因子来发挥生物学效应。研究发现外泌体可以参与皮肤组织修复与再生的各个过程,通过促进皮肤细胞的增殖迁移,促进血管新生,调节免疫反应来促进创伤愈合与皮肤组织再生,为进一步实现无细胞治疗提供了新的实现途径。对于某些慢性创面,例如糖尿病性皮肤溃疡等也有较好的治疗效果。本文就外泌体在皮肤修复与再生中作用的研究进展做一综述。     

PSA及其相关检测指标在早期前列腺癌诊断中的临床价值

前列腺癌(PCa)是影响老年男性的恶性肿瘤之一,具有较高的发病率和死亡率,我国PCa患者人数逐年升高,因此进行早期的诊断和治疗具有重要意义。前列腺特异性抗原(PSA)对于早期PCa的诊断、治疗和预后具有重要作用,本文分别对PSA相关指标(F/TPSA、CPSA、PSAV、PSAD、PSATZ)应用于早期PCa诊断中的价值进行综述,旨在为临床诊断PCa提供理论依据。     

In vivo visualization of murine melanoma cells B16-derived exosomes through magnetic resonance imaging

BackgroundNumerous studies demonstrated that exosomes play a powerful role in mediating intercellular communication to induce a pro-tumoral environment to promote tumor progression, including pre-metastatic niche formation and metastasis. Noninvasive imaging could determine the in vivo kinetics of exosomes in real time to provide better understanding of the mechanisms of the tumor formation, progression and metastasis. Magnetic resonance imaging (MRI) is an ideal technique which provides excellent anatomical resolution, intrinsic soft tissue contrast, unlimited penetration depth and no radiation exposure.MethodsA fusion protein composed of ferritin heavy chain (FTH1) and lactadherin was designed for visualizing exosomes through MRI. FTH1 was served as MRI reporter protein and lactadherin is a membrane-associated protein that is distributed on exosome surface. The characterizations of labeled exosomes were validated through transmission electron microscopy, western blot, nanoparticle tracking analysis and finally visualized in vitro and in vivo through MRI.ResultsMR imaging showed that the labeled exosomes are able to be visualized in vitro and in vivo. Verification of the characterizations of exosomes observed no significant difference between labeled and unlabeled exosomes.ConclusionThe proposed FTH1 labeling method was useful for visualizing exosomes through MRI.General significanceThe present study first reported a novel self-label method for imaging labeled exosomes of tumor cells in vivo through MR with cell endogenous MRI reporter protein. It may be further used as a tool to enhance understanding the role of exosomes in various pathophysiological conditions.