GPER介导的丹参酮ⅡA抗三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移作用机制研究

摘要 目的：基于体外细胞实验,探索丹参酮ⅡA对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的抑制作用及其分子机制。方法：选取三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,利用细胞增殖实验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞增殖的作用,并筛选适宜的药物浓度;应用划痕实验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞迁移率的影响;Western Blot法检测丹参酮ⅡA对G蛋白偶联雌激素受体（G protein-coupled estrogen receptor,GPER）及基质金属蛋白酶9（Matrix metalloprotein-9,MMP-9）表达的影响。结果：细胞增殖实验结果显示,丹参酮ⅡA可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;划痕实验结果显示,丹参酮ⅡA可以抑制MDA-MB-231细胞迁移,且呈剂量依赖性（P＜0.01）,加入GPER特异性抑制剂G15后迁移率有所上升（P＜0.01）。Western Blot结果显示,丹参酮ⅡA可以显著下调GPER和MMP-9蛋白的表达水平并呈剂量依赖性（P＜0.05）,加入GPER特异性抑制剂G15后,MMP-9表达有所上升（P＜0.01）。结论：丹参酮ⅡA可以抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移,其机制可能与抑制GPER介导的MMP-9表达相关。     

EdU体外标记毛囊外根鞘干细胞的实验研究

摘要 目的：探寻一种简单有效的追踪定位毛囊干细胞的分裂增殖标记的方法,为后期毛囊干细胞增殖分化迁移机制的研究打下基础。方法：体外无菌条件下获取昆明乳鼠触须毛囊外根鞘,以5 % FCS+MEM作为基础培养液,添加4种不同浓度EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）细胞标记物,进行毛囊外根鞘再生培养,冰冻切片,H.E染色,使用KeyFluor488对EdU所标记的再生细胞进行检测。结果：H.E染色和EdU标记染色结果发现EdU细胞标记物浓度越高,毛囊外根鞘再生形态越差,同时当EdU浓度为20 μ mol/L时,毛囊外根鞘增殖细胞标记效果是最好的。结论：EdU细胞标记物对毛囊外根鞘中的干细胞增殖活性具有一定的毒副作用,可能会影响细胞的正常生理代谢功能,浓度为20 μ mol/L EdU可以有效的标记毛囊干细胞增殖,并对毛囊再生结构影响较小。     

三维能量多普勒超声联合血清HE4、TK1、YKL-40对绝经后出血患者子宫内膜癌的预测价值

摘要 目的：研究三维能量多普勒超声联合血清人附睾蛋白4（HE4）、胸苷激酶1（TK1）、甲壳质酶蛋白40（YKL-40）对绝经后出血患者子宫内膜癌的预测价值。方法：选择我院2019年10月～2022年10月收治的150例绝经后出血患者。将其按照病理检查结果的差异分为子宫内膜癌组31例与子宫内膜良性增生组119例。对所有患者均开展三维能量多普勒超声检查,并检测血清HE4、TK1、YKL-40水平。以受试者工作特征曲线（ROC）分析三维能量多普勒超声联合血清HE4、TK1、YKL-40水平预测绝经后出血患者子宫内膜癌的效能。结果：子宫内膜癌组血流指数（FI）、血管形成指数（VI）、血管形成-血流指数（VFI）以及由该三参数构建的综合指数I相较于子宫内膜良性增生组均更高（均P＜0.05）。子宫内膜癌组血清HE4、TK1、YKL-40水平相较于子宫内膜良性增生组均更高（均P＜0.05）。经ROC曲线分析发现：三维能量多普勒超声联合血清HE4、TK1、YKL-40水平预测绝经后出血患者子宫内膜癌的曲线下面积（AUC）、灵敏度、特异度以及约登指数均高于上述四项单独预测。结论：三维能量多普勒超声联合血清HE4、TK1、YKL-40水平预测绝经后出血患者子宫内膜癌的效能较佳。     

YKL-40、CCL27、CXCL10、Th17细胞及其相关细胞因子IL-17与皮肌炎患者疾病活动度和临床指标的相关性分析

摘要 目的：探讨人软骨糖蛋白-39（YKL-40）、趋化因子配体-27（CCL27）、趋化因子配体-10（CXCL10）、辅助性T细胞17（Th17）及其相关细胞因子白细胞介素-17（IL-17）与皮肌炎患者疾病活动度和临床指标的相关性。方法：选择2020年2月至2022年2月河北北方学院附属第一医院皮肤科收治的80例皮肌炎患者为皮肌炎组,另选取同期40名健康体检人员作为对照组,检测对比两组血清YKL-40、CCL27、CXCL10、IL-17水平及外周血Th17细胞比例。皮肌炎患者根据病情分为活动期组和缓解期组,比较两组YKL-40、CCL27、CXCL10、IL-17水平、Th17细胞比例、皮肌炎相关临床指标及肌炎疾病活动性评估视觉模拟量表（MYOACT）评分,采用Pearson相关系数分析YKL-40、CCL27、CXCL10、IL-17水平、Th17细胞比例与MYOACT评分、皮肌炎相关临床指标的相关性。结果：皮肌炎组的YKL-40、CCL27、CXCL10、IL-17水平及Th17细胞比例均高于对照组（P＜0.05）。活动期组的YKL-40、CCL27、CXCL10、IL-17水平及Th17细胞比例均高于缓解期组（P＜0.05）。活动期组的MYOACT评分及红细胞沉降率（ESR）、铁蛋白（Fer）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）水平均高于缓解期组（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,皮肌炎患者的YKL-40、CCL27、CXCL10、IL-17水平、Th17细胞比例与MYOACT评分、ESR、Fer、LDH、CK水平均呈正相关（P＜0.05）。结论：血清YKL-40、CCL27、CXCL10、IL-17水平及外周血Th17细胞比例与皮肌炎病情严重程度有一定相关性,可作为皮肌炎病情的辅助评估指标。     

慈姑根尖细胞微管骨架的免疫荧光观察

分别用考马斯亮蓝染色和间接免疫荧光标记,并运用荧光倒置显微镜和激光共聚焦显微镜,对慈姑根尖固定后酶解获得的去壁细胞和细胞团块以及根尖细胞分裂周期中微管骨架列阵进行详细观察,以探索高等植物微管周期的普遍性。结果表明:慈姑根尖固定后酶解可获得大量结构完整的去壁细胞与细胞团块;考马斯亮蓝染色观察可见,慈姑根尖细胞中丰富的蛋白物质以及处于不同分裂期的细胞核染色体;免疫荧光观察可见,慈姑根尖细胞周期中微管骨架保存较好,主要有周质微管、早前期带微管、纺缍体微管和成膜体微管4种循序变化的排列方式,构成了高等水生植物分裂细胞中典型的微管周期。实验结果证明,高等水生植物与陆生植物微管周期具有相似性,为植物微管周期概念提供了新的实例。     

沉默黏着斑激酶促进人胃癌SGC-7901细胞骨架蛋白解聚及细胞形态损伤

目的探讨黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在胃癌细胞骨架结构及形态结构维持中的作用。方法利用靶向FAK的siRNA质粒,转染胃癌SGC-7901细胞,用罗丹明标记的鬼笔环肽及β-tubulin特异性抗体检测细胞骨架微丝及微管蛋白表达;考马斯亮蓝染液对细胞进行染色,观察细胞整体形态结构;环境扫描电子显微镜观察细胞表面结构。结果沉默FAK引起细胞质、细胞伪足及微绒毛等运动相关结构中F-actin解聚。随着沉默时间增长,围绕着细胞核,在细胞质中呈放射状的微管骨架发生解聚,且这种解聚现象呈时间依赖性。FAK沉默还使细胞由梭形、多边形变为圆形,发生脱壁;细胞微绒毛及伪足结构受损,细胞表面趋于光滑。结论 FAK对维持胃癌细胞微丝、微管的分布及癌细胞伪足、微绒毛等恶性形态学特征具有重要作用。     

Sfrp2通过下调Wnt/β-catenin通路抑制胶质瘤细胞系U251的迁移能力

摘要 目的：探讨使用Wnt3a蛋白受体竞争性抑制剂Sfrp2下调Wnt通路的关键蛋白β-catenin的表达对胶质瘤细胞U251线粒体功能以及细胞侵袭能力的影响。方法：使用外源性Sfrp2蛋白处理U251细胞,使用Western Blot技术,Mitotracker线粒体形态学染色,划痕实验观测Sfrp2蛋白对U251细胞Wnt通路的表达,线粒体功能以及细胞迁移能力的影响,并使用GSK-3β抑制剂LiCl上调Wnt通路进一步明确Sfrp2蛋白的作用机制。结果：Sfrp2蛋白可引起Wnt通路的抑制（P<0.05）,线粒体分裂（P<0.01）以及细胞迁移能力的下降（P<0.01）,而使用LiCl处理后,Wnt通路重现上调（P<0.05）,线粒体分裂受到抑制（P<0.05）,细胞的迁移能力也再次恢复（P<0.05）。结论：Sfrp2可通过下调Wnt通路引起线粒体分裂进而抑制U251细胞的迁移能力。     

一种改良的肌细胞骨架染色方法

为了观察肌细胞骨架,对传统考马斯亮蓝染色法进行改良,并与免疫荧光染色法进行了比较。培养的血管平滑肌细胞先用多聚甲醛预固定后再进行考马斯亮蓝染色,可使细胞骨架非常清晰的显色,解决了传统考马斯亮蓝染色易使肌细胞变形、脱片的问题,其效果与免疫荧光染色相近。因此,多聚甲醛预固定．考马斯亮蓝染色法是一种适于肌细胞骨架染色的简便方法。     

分泌蛋白YKL-40增强肿瘤细胞的上皮间质样转化

目的:分泌糖蛋白YKL-40在多种晚期肿瘤病人的血液中显著升高,提示YKL-40蛋白的血浓度是肿瘤恶变的生物标志物。本课题研究YKL-40重组蛋白和过表达YKL-40肿瘤细胞对肿瘤细胞的上皮间质样转化的作用。方法:构建YKL-40过表达的纤维状乳腺癌细胞系MDA-MB-231和非纤维状结肠癌细胞系HCT-116,观察细胞形态学变化,收集细胞和细胞培养液用于Western Blot(WB)检测YKL-40和上皮间质转化标记蛋白Vimentin和N-cadherin。观察重组蛋白YKL-40对原代MDA-MB-231细胞在无血清条件下的细胞存活影响;另外,用细胞存活试剂盒检测YKL-40过表达HCT-116细胞在无血清的培养液中细胞存活情况。最后,用细胞侵袭试验检测YKL-40过表达MDA-MB-231细胞的侵袭力,并用WB和Zymography来测定细胞分泌MMP9蛋白的表达和酶活性。结果:YKL-40过表达增强MDA-MB-231细胞的形态向上皮间质样转化,并显著提高Vimentin、N-cadherin蛋白的表达,但对HCT-116细胞无法诱导上皮间质样转化。在无血清培养基培养条件下,YKL-40可以增强两种细胞的存活能力,并且YKL-40过表达的MDA-MB-231细胞增强了细胞的侵袭能力,促进了MMP9蛋白表达和蛋白活性。结论:YKL-40可以增加肿瘤细胞的存活力,增强纤维状细胞向上皮间质样转化;并且,YKL-40增加MMP9蛋白表达和活性,增强细胞侵袭力。YKL-40是间质样肿瘤细胞EMT的增强子,此发现为抑制肿瘤恶变提供新靶点。     

血清HSP27、YKL-40与侵袭性牙周炎患者Th17、Treg细胞的关系及对牙周-正畸联合治疗后预后的影响分析

摘要 目的：分析血清热休克蛋白27（HSP27）、人软骨糖蛋白(YKL-40)与侵袭性牙周炎（AgP）患者辅助性T细胞17（Th17）、调节性T细胞（Treg）的关系及对牙周-正畸联合治疗后预后的影响。方法：选取2020年5月-2022年4月河北北方学院附属第一医院收治的98例AgP患者为AgP组,另选取同期于医院检查的60例牙周健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫法检测血清HSP27、YKL-40水平,流式细胞仪检测外周血Th17、Treg百分比,计算Th17/Treg比值;Pearson法分析血清HSP27、YKL-40与Th17、Treg细胞的相关性。AgP患者经牙周-正畸联合治疗6个月后,复诊检查时根据牙周探针深度（PD）将患者纳入预后良好组（PD＜4 mm）和预后不良组（PD≥4 mm）。采用Logistic回归模型分析AgP患者牙周-正畸联合治疗后预后不良的影响因素。结果：AgP组血清HSP27水平低于对照组,YKL-40水平高于对照组（P＜0.05）。AgP组外周血中Th17细胞百分比、Th17/Treg比值高于对照组,Treg细胞百分比低于对照组（P＜0.05）。Pearson法显示,Th17细胞百分比、Th17/Treg比值与HSP27表达呈负相关,Treg细胞百分比与其呈正相关（P＜0.05）;Th17细胞百分比、Th17/Treg比值与YKL-40表达呈正相关,Treg细胞百分比与其呈负相关（P＜0.05）。复查结果显示,预后良好患者共61例,预后不良共37例。预后良好组与预后不良组在患牙上下、前后分布、根形态、患牙PD最深值、牙槽骨高度、菌斑指数及HSP27、YKL-40水平方面比较差异有统计学意义（P＜0.05）。Logistic回归显示,根形异常、患牙PD深、牙槽骨高度高、菌斑指数大、HSP27水平下降、YKL-40水平上升为AgP患者牙周-正畸联合治疗后预后不良的危险因素（P＜0.05）。结论：AgP患者血清HSP27水平下降、YKL-40水平上升,与Th17、Treg细胞表达密切相关,是影响患者牙周-正畸联合治疗后预后不良的危险因素。     

低氧诱导因子基因沉默对胃癌细胞BGC-823微血管生成和血管内皮生长因子表达的影响

摘要 目的：探讨低氧诱导因子基因沉默对胃癌细胞BGC-823微血管生成和血管内皮生长因子表达的影响。方法：对数生长期的BGC-823细胞株分为三组-实验组、对照组与空白组,分别转染200 ng/mL shRNA-HIF-1α、200 ng/mL shRNA-NC与等体积的磷酸盐缓冲液。采用CCK法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭,Western blot检测蛋白表达,qRT-PCR检测基因表达。结果：细胞转染后24 h与48 h,实验组的HIF-1α相对表达量、细胞增殖指数、细胞迁移与侵袭指数显著低于空白组和对照组(P＜0.05),细胞凋亡指数显著高于空白组和对照组(P＜0.05)。细胞转染后48 h,与对照组和空白组相比,实验组的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) 蛋白相对表达水平显著降低(P＜0.05)。结论：沉默HIF-1α表达能抑制胃癌细胞BGC-823微血管生成和VEGF表达,从而抑制胃癌细胞增殖、转移与侵袭,促进细胞凋亡。     

YKL-40、CD4+/CD8+比值与腺病毒肺炎患儿炎性因子和并发喘息的关系研究

摘要 目的：探讨血清壳多糖酶3样蛋白1（YKL-40）、外周血CD4⁺/CD8⁺比值与腺病毒肺炎（AP）患儿炎性因子和并发喘息的关系。方法：选取2019年10月～2022年10月湖北省妇幼保健院收治的97例AP患儿为AP组,根据是否并发喘息分别为喘息组和无喘息组,另选取同期50例体检健康儿童为对照组。收集AP患儿的临床资料,采用酶联免疫吸附法检测血清YKL-40和炎性因子[白细胞介素（IL）-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（TNFα）]水平,流式细胞术检测外周血CD4⁺、CD8⁺比例并计算CD4⁺/CD8⁺比值。采用Spearman相关性分析AP患儿血清YKL-40、CD4⁺/CD8⁺比值与炎性因子水平的相关性,多因素Logistic回归分析AP患儿并发喘息的影响因素。结果：与对照组比较,AP组血清YKL-40、外周血CD8⁺比例升高,CD4⁺比例、CD4⁺/CD8⁺比值降低（P＜0.05）。AP组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平高于对照组（P＜0.05）。Spearman相关性分析显示,AP患儿血清YKL-40与IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关,外周血CD4⁺/CD8⁺比值与IL-6、IL-8、TNF-α水平呈负相关（P＜0.05）。97例AP患儿住院期间喘息发生率为50.52%（49/97）。多因素Logistic回归分析显示,呼吸衰竭、小气道病变、特应性体质和血清IL-6、IL-8、TNF-α、YKL-40升高为AP患儿并发喘息的独立危险因素,外周血CD4⁺/CD8⁺比值升高为独立保护因素（P＜0.05）。结论：AP患儿血清YKL-40水平升高和外周血CD4⁺/CD8⁺比值降低,与炎性因子水平升高和并发喘息密切相关。     

携带OX40L重组溶瘤病毒的构建及靶向杀伤肝癌的研究

目的 拯救携带OX40L的重组溶瘤流感病毒株，全面鉴定并评价其靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法 将编码OX40L的基因片段嵌合在A/PuertoRico/8/34（PR8）的NS片段特定位置，利用反向遗传学技术（reverse genetics，RG），与PR8流感病毒的剩余7个骨架质粒pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M共转染COSⅠ/MDCK细胞，成功拯救获得重组溶瘤流感病毒，命名为rFlu-OX40L。经血凝、TCID₅₀方法测定病毒滴度；重组病毒纯化后电镜观察病毒形态特征及大小分布；检测MDCK细胞病毒生长曲线；MTS法检测重组病毒对肝癌细胞活力的影响；流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞死亡方式；利用肝癌荷瘤小鼠模型评价重组病毒rFlu-OX40L在动物体内的抗肿瘤效果。结果 重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L可在鸡胚中稳定传代，HA效价达2^7~8，病毒滴度可达 7~8 LgTCID₅₀/ml；重组病毒rFlu-OX40L与流感病毒PR8生长曲线相一致，72 h达高峰；MTS结果显示，3 MOI重组病毒可显著降低肝癌细胞活力，且对正常肝细胞无明显影响，呈时间和剂量依赖性；流式细胞结果显示，重组病毒可显著诱导肝癌细胞凋亡，呈时间和剂量依赖性；利用肝癌荷瘤小鼠模型，瘤内注射重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L较PR8、PBS对照组，小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+、CD45+、CD69+ T细胞数量呈现显著升高趋势。结论 携带OX40L的重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L在体内外均可选择性杀伤肝癌细胞，有望为肝癌的临床治疗提供新的免疫治疗策略。     

呼吸机相关性肺炎患者血清NAMPT、YKL-40、sTREM-1水平与病情程度及预后的关系研究

摘要 目的：研究呼吸机相关性肺炎（VAP）患者血清烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）、壳多糖酶3样蛋白1（YKL-40）、可溶性髓系细胞触发受体-1（sTREM-1）水平与病情程度及预后的关系。方法：选取我院2019年2月～2021年2月收治的120例VAP患者作为研究对象,将其按照病情程度分成低危组40例、中危组45例以及高危组35例,另取同期健康体检人员50例作为对照组,检测并比较各组血清NAMPT、YKL-40、sTREM-1水平。此外,将VAP患者按照28 d生存情况分成死亡组和生存组,比较两组各项基本资料、治疗情况以及血清NAMPT、YKL-40、sTREM-1水平,采用多因素Logistic回归分析VAP患者预后的影响因素。结果：VAP患者的血清NAMPT、YKL-40、sTREM-1水平均高于对照组体检人员,且VAP患者中上述三项血清指标水平随着病情程度的加重而升高（P＜0.05）。死亡组患者血清NAMPT、YKL-40、sTREM-1水平均高于生存组患者（P＜0.05）。单因素分析结果显示：年龄、合并糖尿病、体质量指数（BMI）、机械通气时间、预防性使用抗生素以及气管切开均与VAP患者预后有关（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：年龄≥65岁、机械通气时间较长、未预防性使用抗生素、气管切开以及血清NAMPT、YKL-40、sTREM-1水平异常升高均是VAP患者预后的不利影响因素（均OR＞1,P＜0.05）。结论：血清NAMPT、YKL-40、sTREM-1水平与VAP患者的病情程度及预后密切相关,VAP患者的预后受到年龄、机械通气时间、抗生素使用、气管切开以及血清NAMPT、YKL-40、sTREM-1水平等因素影响。     

基于免疫性PTR的血小板膜糖蛋白及T/B淋巴细胞表达水平研究

摘要 目的：探究血小板膜糖蛋白及T/B淋巴细胞免疫在免疫性血小板输注无效发生机制中的重要作用。方法：采用血小板特异性抗体检测试剂盒及流式细胞技术检测免疫性PTR患者血小板特异性抗体（抗GPIIb/IIIa、抗GPIa/IIa、抗GPIb/IX、抗GPIV）、血小板膜糖蛋白（CD36、CD61、CD41a）表达情况及外周血T/B淋巴细胞数量,运用SPSS19.0软件及R软件分析免疫性PTR与血小板膜糖蛋白、外周血T/B淋巴细胞的相关性。结果：免疫性PTR与血小板输注有效者比较,血小板特异性抗体的产生无显著差异,血小板膜糖蛋白CD36和CD61的表达具有显著差异,CD36对免疫性PTR发生风险具有极大的预测价值,外周血CD8⁺T细胞比例增高,而CD4⁺T细胞比例减低。结论：免疫性PTR患者产生血小板抗体具体机制不明确,了解患者细胞免疫状态有助于明确免疫性PTR的发生机制,为患者提供更优质的诊疗策略。     

EFI评分、血清MMIF、YKL-40与子宫内膜异位症患者卵巢功能、临床分期的关系

摘要 目的：探讨生育指数（EFI）评分、血清巨噬细胞移动抑制因子（MMIF）、甲壳质酶蛋白 40（YKL-40）与子宫内膜异位症患者卵巢功能、临床分期的关系。方法：选取我院2020年6月到2023年6月收治的80例子宫内膜异位症患者,分为观察组,另选取同期来我院体检的80名健康女性志愿者作为对照组。对比两组受检者EFI评分、血清MMIF、YKL-40及卵巢功能指标表达水平。应用美国生殖医学协会子宫内膜异位症分期标准(r-AFS)对80例子宫内膜异位症患者进行分期,其中Ⅰ期15例,Ⅱ期23例,Ⅲ期25例,Ⅳ期17例,对比不同r-AFS分期患者EFI评分、血清MMIF、YKL-40表达水平。并采用Spearman相关法分析法分析EFI评分、血清MMIF、YKL-40与卵巢功能指标的相关性。结果：观察组患者EFI评分低于对照组,血清MMIF、YKL-40表达水平高于对照组（P＜0.05）;观察组抗苗勒氏管激素（AMH）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）表达水平低于对照组,雌二醇（Estradiol,E₂）水平高于对照组（P＜0.05）;不同分期子宫内膜异位症患者EFI评分由高到低分别为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期,MMIF和YKL-40水平由高到低分别为Ⅳ期、Ⅲ期、Ⅱ期、Ⅰ期,不同分期EFI评分、血清MMIF、YKL-40表达水平对比差异显著（P＜0.05）;Spearman相关法分析结果表明：EFI评分与AMH、LH、FSH呈正相关,与E2呈负相关（P＜0.05）,MMIF和YKL-40与AMH、LH、FSH呈负相关,与E₂呈正相关（P＜0.05）。结论：EFI评分、血清MMIF、YKL-40水平与子宫内膜异位症患者的卵巢具有明显相关性,且不同子宫内膜异位症患者EFI评分、血清MMIF、YKL-40水平具有显著差异,临床可考虑应用EFI评分、血清MMIF、YKL-40水平来辅助判断子宫内膜异位症患者的卵巢功能与疾病严重程度。     

HOXD9促进肺癌发生发展的生物学作用及初步机制

摘要 目的：探究同源盒基因HOXD9在H3255、H2170肺癌细胞株中的生物学作用及作用机制。方法：构建HOXD9过表达稳转H3255、H2170肺癌细胞株,通过CCK-8、克隆形成、小鼠皮下瘤实验检测HOXD9对肺癌细胞增殖的影响;利用transwell、基质胶实验检测HOXD9对肺癌细胞迁移及侵袭的影响;采用彗星实验、磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）免疫荧光染色检测HOXD9对肺癌细胞DNA损伤的影响;通过流式细胞术检测HOXD9对肺癌细胞凋亡的影响;通过qRT-PCR、western blot、luciferase、ChIP、rescue实验探究HOXD9在肺癌中促癌的作用机制。结果：CCK-8、克隆形成、小鼠皮下瘤实验显示HOXD9可促进肺癌细胞增殖;transwell实验表明HOXD9可促进肺癌细胞迁移;基质胶实验显示HOXD9可促进肺癌细胞侵袭;彗星实验与γH2AX免疫荧光染色提示HOXD9可抑制肺癌细胞DNA损伤;流式细胞术显示HOXD9可抑制肺癌细胞凋亡。HOXD9可通过转录上调肺癌细胞中增殖细胞核抗原PCNA的表达水平。结论：HOXD9可通过促进PCNA的转录介导肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制肺癌细胞DNA损伤及凋亡。     

糖尿病诱导serpinE1分泌增多对心肌细胞NF-κB核易位及凋亡的影响

摘要 目的：探讨糖尿病诱导serpinE1分泌增多是否引起心肌细胞NF-κB核易位及凋亡。方法：8周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组和糖尿病组,糖尿病模型应用链脲佐菌素腹腔注射诱导。体外试验中,应用低糖（5.5 mmol/L）及高糖（25 mmol/L）浓度培养基分别处理大鼠心肌H9C2细胞。ELISA法分别检测小鼠血清及细胞培养上清中的serpinE1水平,Western Blot分别检测心脏组织及细胞中 caspase-3、cleaved caspase-3以及细胞浆、细胞核中NF-κB蛋白表达。此外,H9C2细胞分为三组：对照组、serpinE1重组蛋白处理组、JSH-23与serpinE1重组蛋白共同处理组,Western Blot检测上述相同指标。结果：糖尿病小鼠血清及高糖处理的细胞培养上清中serpinE1水平较对照组显著增加(P<0.05)。同对照组相比,细胞核/细胞浆NF-κB、cleaved caspase-3/ caspase-3在糖尿病小鼠心肌组织及H9C2细胞高糖处理组中显著上升(P<0.05)。此外,serpinE1重组蛋白处理后细胞核/细胞浆NF-κB以及cleaved caspase-3/ caspase-3同对照组相比,均显著增加(P<0.05),而JSH-23则减弱了serpinE1的这些效应。结论：糖尿病诱导serpinE1分泌增多促进心肌细胞NF-κB核易位及凋亡。     

miR-155-5p增强卵巢癌细胞UWB1.289对PARP抑制剂的敏感性

摘要 目的：探讨卵巢癌细胞UWB1.289中miR-155-5p对PARP抑制剂敏感性的影响及可能涉及的分子机制研究。方法：采用qRT-PCR技术检测miR-155-5p在有BRCA1/2突变和无BRCA1/2突变的卵巢癌组织及卵巢癌细胞中的表达情况。利用细胞转染、qRT-PCR以及Western Blot技术检测转染miR-155-5p模拟物和抑制剂的卵巢癌细胞UWB1.289中miR-155-5p的表达以及同源重组修复相关基因SIRT1、BRG1的表达。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-155-5p与SIRT1、BRG1之间的靶向性。运用CCK-8检测卵巢癌细胞UWB1.289中miR-155-5p对PARP抑制剂敏感性的影响。结果：与无BRCA1/2突变的卵巢癌组织及卵巢癌细胞相比,miR-155-5p在有BRCA1/2突变的卵巢癌组织及卵巢癌细胞中低表达。转染miR-155-5p模拟物可增加卵巢癌细胞UWB1.289中miR-155-5p的表达,同时降低同源重组修复相关基因SIRT1、BRG1的表达;转染miR-155-5p抑制剂可下调卵巢癌细胞UWB1.289中miR-155-5p的表达,同时增加SIRT1、BRG1的表达,进一步通过双荧光素酶报告基因实验证实miR-155-5p与SIRT1、BRG1存在特异性靶向结合序列。与对照组相比,干扰同源重组修复相关基因以及miR-155-5p过表达均可增强卵巢癌细胞UWB1.289对PARP抑制剂的敏感性。结论：miR-155-5p可能通过影响同源重组修复基因增强卵巢癌细胞UWB1.289对PARP抑制剂的敏感性。     

时钟基因Bmal1促进血管平滑肌细胞增殖

摘要 目的：观察时钟基因Bmal1的过表达对血管平滑肌细胞增殖的影响,进一步探讨生物节律对于血管发育的具体影响。方法：采用包装GV341-Bmal1载体的慢病毒转染的方法构建大鼠胸主动脉平滑肌细胞（A7R5）稳定转染Bmal1的细胞系,实时定量PCR和细胞爬片Bmal1的免疫荧光染色的方法判断所构建细胞系是否稳定过表达Bmal1,细胞爬片Ki67的免疫荧光染色的方法观察时钟基因Bmal1的过表达对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果：实时定量PCR结果显示稳定转染Bmal1组细胞Bmal1的表达是对照组的11.2倍（P<0.01）;细胞爬片的免疫荧光染色结果显示稳定转染Bmal1组细胞BMAL1的表达明显升高（P<0.05）,且稳定转染Bmal1组Ki67阳性细胞比例明显升高（P<0.05）。结论：通过慢病毒转染的方法成功构建了血管平滑肌细胞稳定转染Bmal1的细胞系,细胞片Ki67的免疫荧光染色结果显示Bmal1的过表达促进了血管平滑肌细胞的增殖。