脂连素对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的观察脂连素对刀豆蛋白A（ConA）所致小鼠急性肝损伤的干预作用,并对其机制进行初步探讨。方法雄性BALB／C小鼠17只,随机分为3组：ConA组6只：尾静脉注射ConA。脂连素组5只：在静脉注射ConA前腹腔内注射脂连素。对照组6只：尾静脉注射生理盐水。注射ConA后8小时留取血清检测各组ALT和TNF-α水平,肝组织进行HE染色,并检测NF-κB活性及肝细胞凋亡率。结果HE染色可见ConA组肝细胞水肿、变性,肝组织内淋巴细胞浸润、淤血等,脂连素组上述病理变化减轻（P〈0．01）。脂连素组ALT和TNF-α水平、NF-κB活性、肝细胞凋亡率均低于ConA组（P〈0．01或P〈0．05）。结论脂连素具有抗炎作用,其机制可能与减少TNF-α的产生、抑制肝组织NF-κB活性及抗肝细胞凋亡有关。     

雷公藤甲素诱导小鼠急性肝损伤的形态学研究

目的:观察雷公藤甲素诱导小鼠急性肝损伤的形态学特征,为进一步研究雷公藤甲素肝毒性的病理特点和毒理机制提供基础。方法:昆明种小鼠以雷公藤甲素LD50剂量(0.8 mg/kg)水溶液灌胃,分别于给药12 h及24 h后取肝组织,制备石蜡切片、冰冻切片,行常规HE染色、PCNA染色、TUNEL染色及光镜观察。部分肝组织经戊二醛固定、制备超薄切片,行透射电镜下观察。PCNA及TUNEL染色结果采用图像分析软件进行定量分析及统计学处理。结果:0.8 mg/kg雷公藤甲素灌胃后12 h即可诱导肝组织炎细胞浸润、结构破坏、肝细胞坏死及代偿性增生。透射电镜下可见肝细胞内细胞骨架结构异常、细胞器大量脱落、自噬体明显增多。PCNA及TUNEL染色结果表明,雷公藤甲素可诱导肝细胞出现显著的增殖及凋亡。结论:雷公藤甲素可诱导肝组织炎性反应发生,同时伴随肝细胞凋亡、坏死及代偿性增生。推测肝细胞自噬性凋亡是雷公藤甲素诱导急性肝损伤的关键病理环节。     

海兔素对刀豆蛋白A诱导的化学性肝损伤保护作用

目的:探讨海兔素对刀豆蛋白A诱导的化学性肝损伤保护作用。方法:雄性Wistar大鼠随机分为4组。模型组与海兔素组给予15 mg/kg刀豆蛋白A尾静脉注射每周一次,制作化学性肝损伤模型,模型制作成功后,正常对照组、模型组每日给予大豆油灌胃,海兔素低、高剂量组给予100、150 mg/kg·d海兔素+大豆油灌胃。实验持续8周后,禁食12 h,处死大鼠。HE染色观察肝组织形态学改变;Masson Trichrome及天狼星红染色观察肝组织纤维化状况;全自动生化分析仪检测血清ALT、AST及LDH水平;ELISA实验测定血清TNF-α和TGF-β1水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠肝小叶结构模糊紊乱,纤维组织增生明显,可见灶状坏死及炎性细胞浸润,胶原纤维明显增多,胶原指数明显升高。血清中ALT、AST、LDH及TNF-α和TGF-β1水平显著升高(P0.05)。海兔素干预后,肝小叶病变程度较模型组明显减轻,染色胶原显著减少,纤维增生明显改善,血清中ALT、AST、LDH及TNF-α和TGF-β1水平较模型组显著降低(P0.05),海兔素高剂量组与低剂量组相比,肝脏病变改善程度更为明显(P0.05)。结论:海兔素对刀豆蛋白A诱导的化学性肝损伤具有一定保护作用,其机制可能与下调TNF-α、TGF-β1水平有关。     

雷公藤甲素诱导肝细胞选择性自噬的形态学观察

摘要 目的：观察雷公藤甲素诱导肝细胞选择性自噬的水平。方法：在雷公藤甲素给药处理小鼠的尾静脉高压注射GFP-LC3质粒，制备肝细胞自噬示踪模型，观察雷公藤甲素在动物体内诱导肝细胞自噬的水平。在GFP-LC3稳定表达的L02细胞株中转入RFP-P62质粒，用活细胞工作站和荧光显微镜动态观察雷公藤甲素诱导L02细胞选择性自噬的轮廓，同时也观察细胞自噬复合体LC3-P62的变化。结果：动物实验结果表明，雷公藤甲素可显著诱导肝细胞自噬体的形成，Western blot结果显示P62蛋白和LC3II蛋白的表达趋势一致。活细胞动态观察及免疫荧光双标记实验结果表明LC3-P62存在共定位，提示雷公藤甲素可诱导肝细胞自噬流的形成。结论：雷公藤甲素可诱导肝细胞选择自噬，其生物学意义可能与肝细胞损伤后修复相关。     

阿魏酸对刀豆蛋白A诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用

探讨阿魏酸(ferulic acid, FA)对刀豆蛋白A (concanavalin A, Con A)诱导的免疫性肝损伤是否有保护作用。将雄性Balb/c小鼠随机分成6组:空白组、阿魏酸对照组(100 mg/kg)、模型组(15 mg/kg Con A)、低剂量阿魏酸干预组(10 mg/kg)、中剂量阿魏酸干预组(30 mg/kg)、高剂量阿魏酸干预组(100 mg/kg)。阿魏酸灌胃后,尾静脉注射刀豆蛋白A 15 mg/kg,24 h后,取其血和肝组织进行检测。与空白组比较,模型组中苏木精和伊红染色(HE)坏死区域明显增加,丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平、半胱天冬氨酸酶3 (Caspase-3)活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)水平、CD4~+T细胞中CD69的表达都明显增高。与模型组相比,阿魏酸干预组的ALT和AST水平明显降低,呈剂量依赖性,HE坏死区域减少,Caspase-3活性、TNF-α和IFN-γ水平、CD4~+T细胞CD69的表达都明显降低,且具有统计学意义。表明阿魏酸对刀豆蛋白A诱导的免疫性肝损伤有保护作用,其机制可能是抑制CD4~+T淋巴细胞的活化、细胞因子的释放,减轻炎症和肝组织的凋亡。     

流体力学注射IL-35质粒对ConA诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的:观察流体力学注射白细胞介素35(IL-35)质粒对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠肝损伤的干预效果。方法:通过流体力学注射将pcDNA3.1-IL-35导入C57BL/6小鼠体内,对照组注射pcDNA3.1。24h后,以ConA(15mg/kg)尾静脉注射建立小鼠肝损伤模型,检测血清ALT活性和肝组织病理变化。结果:流体力学注射pcDNA3.1-IL-3524h后,肝组织有IL-35mRNA和蛋白的表达。与对照组相比,pcDNA3.1-IL-35预处理组小鼠血清ALT水平明显降低,肝组织病理损伤明显减轻。结论:流体力学注射IL-35质粒对ConA诱导的小鼠肝损伤具有保护作用。     

细胞自噬参与雷公藤甲素诱导的肝细胞损伤

目的:观察雷公藤甲素引起急性肝损伤时肝细胞自噬的情况。方法:采用LC3-GFP质粒尾静脉高压注射的方法在体监测雷公藤甲素诱导肝细胞自噬的发生;用腺病毒双荧光载体m RFP-GFP-LC3感染体外培养的HepG2细胞,通过激光共聚焦显微镜和蛋白印记的方法检测细胞自噬流的强度。结果:小鼠腹腔注射雷公藤甲素(0.25 mg/kg和0.5 mg/kg)24小时,血清中ALT和AST水平均显著升高;肝组织病理结果显示肝细胞肿胀、空泡化及坏死;激光共聚焦显微镜下可检测到LC3-GFP质粒表达所呈现的绿色荧光;离体细胞实验结果证实雷公藤甲素可诱导肝细胞发生自噬流,且表现为一定程度的剂量、时间依赖性。结论:雷公藤甲素可引发急性肝损伤并伴随明显的细胞自噬。     

甘草酸二铵改善Con A致小鼠肝损伤的作用研究北大核心CSCD

探讨甘草酸二铵(Diammonium glycyrrhi zinate,DG)对刀豆蛋白(Concanavalin A,Con A)致小鼠肝损伤的保护作用及机制。连续给予ICR小鼠各保肝药的临床等效量7天后,再以Con A造成小鼠肝损伤。生化法检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量;HE染色观察肝组织病理学特征;通过药物代谢物与转氨酶异常大鼠血清共孵育,检测DG对转氨酶活性的直接作用;免疫组化、Western blot检测肝组织中凋亡蛋白和炎性细胞因子的水平,探讨DG的保肝机制。结果显示,58. 5 mg/kg DG能够改善Con A所致小鼠肝脏病理损伤,降低小鼠血清中AST、ALT水平,而对AST、ALT的活性没有直接抑制作用;并且DG可以抑制肝细胞凋亡(下调cleaved Caspase-3、cleaved PARP以及BAX/BCL-2的表达)和炎性反应(降低TGF-β1、COX-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ等炎性因子水平)。综上所述,DG可改善Con A致小鼠急性肝损伤,其作用机制可能与抑制细胞凋亡和炎症反应有关。     

急性肝损伤小鼠中线粒体解耦联蛋白2的表达变化及意义

目的:观察C57小鼠急性肝损伤(acute liver injury,ALI)中解偶联蛋白2(Uncouple Protein2,UCP2)的表达,探讨ALI与UCP2表达变化的意义。方法:领取36只小鼠,随机分为对照组、ALI 1 d组、ALI 4 d组、ALI 7 d组。分别检测血清谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的变化;肝组织病理变化用HE染色观察;利用Western Blot方法分别检测全肝组织蛋白和肝细胞线粒体提纯蛋白中的UCP2蛋白水平的变化;Real Time quality PCR检测UCP2在mRNA水平的表达变化。结果:ALI组1 d、4 d组与对照组相比,ALT(160.69±22.11 vs 34.43±5.19;96.37±15.39 vs 34.43±5.19)、AST(306.54±68.09 vs 97.74±14.49;173.94±26.74 vs 97.74±14.49)表达差异具有统计学意义(P0.05);肝组织病理学检查ALI组1 d和4 d组中肝细胞出现大面积坏死,7d组肝细胞坏死缓解;蛋白水平检测UCP2在ALI 1 d和4 d时全肝组织分别增加2.84倍和2.25倍,在肝线粒体中1 d、4 d和7 d时分别增加2.19倍、1.68倍和1.56倍,差异具有统计学意义(P0.05);mRNA水平检测UCP2在ALI 1 d和4 d与对照组相比明显升高,相对增加3.79倍和1.46倍(P0.05)。结论:急性肝损伤状态下UCP2在蛋白和mRNA水平高表达,UCP2可能对于治疗急性肝损伤具有重要意义。     

雷公藤甲素对雄性布氏田鼠繁殖力的抑制效果

为评价植物源鼠类不育剂雷公藤甲素对雄性布氏田鼠的不育效果,本研究采用每千克体重0 mg、0.1 mg、0.2 mg,0.4 mg的雷公藤甲素溶液对雄鼠进行连续7 d灌胃处理,并在停药2周和4周后检测其体重、性腺重、精子密度及配对雌鼠怀孕率与胎仔数.结果表明,雷公藤甲素处理未显著降低雄性布氏田鼠的体重、性腺相对重量、附睾...     

PH797804对小鼠急性肝衰竭的保护作用及机制研究

目的:研究PH797804对脂多糖/D-氨基半乳糖氨(Lipopolysaccharide/D-galactosamine, LPS/D-Gal)诱导的急性肝衰竭(Acute liver failure, ALF)小鼠的保护作用及机制。方法:将64只小鼠随机分成四组,每组16只。腹腔注射LPS/D-Gal诱导建立小鼠ALF模型,设立生理盐水对照组(a)、LPS/D-Gal诱导模型组(b)、LPS/D-Gal诱导和PH797804干预组(c)及PH797804处理对照组(d)。观察小鼠48 h内的存活率,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量,HE染色组织切片观察肝脏病理变化,Elisa检测血清中TNF-α和IL-6的表达水平,并对各组小鼠肝组织进行高通量转录组测序以探寻作用机制,采用Real-time PCR法验证测序结果。结果:相比于ALF模型组小鼠,PH797804处理后c组小鼠48 h存活率从20%提高至80%,小鼠肝脏组织病理学异常显著改善,血清中ALT、AST含量较ALF模型组相比显著降低(P0.01),血清中TNF-α和IL-6等促炎细胞因子含量较ALF模型组相比显著降低(P0.01)。RNA测序结果提示PH797804对LPS/D-Gal诱导小鼠ALF的保护作用主要与抑制炎症反应相关。Real-time PCR验证了测序结果的可靠性。结论:PH797804对LPS/D-Gal诱导的小鼠ALF具有保护作用,其作用机制可能与抑制炎症反应有关。     

间充质干细胞外泌体对小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(Mouse bone marrow mesenchymal stem cells, m BMMSC)来源的外泌体(Exosome, Exo)对四氯化碳(Carbon tetrachloride, CCl4)诱导的急性肝衰竭(Acute liver failure, ALF)的保护作用。方法:采用全骨髓培养法提取Balb/c小鼠原代骨髓间充质干细胞并利用流式细胞仪进行鉴定,用试剂盒混合细胞上清后提取干细胞分泌的外泌体,透射电镜(Transmission electron microscope, TEM)鉴定外泌体形态,纳米粒径追踪分析仪(Nanoparticle tracking analysis, NTA)鉴定外泌体的粒径,Western Blot鉴定外泌体表面的标志蛋白。激光共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope, CLSM)下观察肝细胞内吞外泌体。小鼠肝脏的免疫荧光切片观察外泌体的肝脏内分布。Balb/c小鼠随机分为健康对照组(Healthy)、CCl4损伤组(CCl4)、CCl4损伤外泌体治疗组(Exo)。观察小鼠7 d内的生存时间。检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿酸(UA)的含量,HE染色组织切片观察肝脏病理变化,流式细胞仪和磁珠细胞试剂盒(Cytometric bead array, CBA)检测血清中白介素6(IL-6)、白介素12(IL-12)和γ干扰素的含量(IFN-γ)。结果:成功提取并鉴定了小鼠骨髓间充质干细胞与其外泌体,NTA测得干细胞外泌体的粒径在100 nm左右,电镜下外泌体呈现囊泡状,Western Blot测得外泌体表达CD9和CD63蛋白。CLSM下观察到L02肝细胞内吞外泌体且随时间递增,免疫荧光切片观察到外泌体靶向肝脏且在肝脏组织中均匀分布。动物实验表明相比于CCl4组,Exo组小鼠的生存时间显著延长,血清中ALT、AST、LDH和UA的含量显著降低,肝脏组织切片显示肝脏损伤明显减少,血清中IL-6, IL-12和IFN-γ的含量显著降低。结论:小鼠骨髓间充质干细胞分泌的外泌体可能通过抑制炎症减轻四氯化碳诱导的急性肝衰竭。     

糖皮质激素对小鼠急性肝衰竭的干预作用研究

摘要 目的：探讨糖皮质激素对小鼠急性肝衰竭（Acute liver failure, AHF）的干预作用。方法：通过腹腔注射D-GaIN/LPS构建AHF小鼠模型,并随机分为对照组、AHF模型组（AHF组）和糖皮质激素处理急性肝衰竭组（GCs + AHF组）。通过全自动生物化学分析仪检测小鼠血清中ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL水平;采用ELISA试剂盒测定小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6水平;通过定量PCR检测mRNA表达水平;苏木精-伊红（H&E）染色检测肝组织病理学情况;免疫组织化学检测肝组织中SOX9表达水平;蛋白质印迹检测Hedgehog信号通路关键蛋白因子的表达水平。结果：与对照组相比,AHF组小鼠血清ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高,SOD、GSH和CAT活性水平显著降低（P＜0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组小鼠血清中ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低,SOD、GSH和CAT活性水平显著升高（P＜0.01）。H&E染色结果显示,对照组小鼠的肝脏切片显示正常的细胞结构,AHF组小鼠出现广泛的细胞坏死和炎性细胞浸润;与AHF组相比,GCs + AHF组小鼠中细胞坏死和炎性细胞浸润等病理变化显著减弱。免疫组织化学结果显示：与对照组相比,AHF小鼠肝脏中SOX9的表达水平显著升高（P＜0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组小鼠肝脏中SOX9的表达水平显著降低（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组相比,AHF组小鼠的Hedgehog通路关键蛋白因子Shh、Ptch-1和Gli-1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组的Shh、Ptch-1和Gli-1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论：GCs可有效改善AHF小鼠肝功能指标,降低炎性因子表达,提高急性肝衰竭小鼠抗氧化能力,并使Hedgehog通路关键蛋白因子表达恢复正常。     

急性肝损伤时肝脏内Pink1/Parkin的表达变化及意义

目的:观察C57小鼠急性肝损伤(Acute liver injury, ALI)中线粒体自噬相关蛋白Pink1/Parkin表达的变化及意义。方法:领取28只小鼠,随机分为对照组、ALI 1 d组、ALI 4 d组、ALI 7 d组。分别检测血清谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的变化;肝组织病理变化用HE染色观察;Real Time quality PCR检测Pink1/Parkin在m RNA水平的表达变化;进一步利用Western Blot方法分别检测肝组织中Pink1/Parkin蛋白水平的表达变化。结果:ALI组1 d、4 d、7 d组与对照组相比,ALT、AST表达显著升高,具有统计学意义(P0.05);肝组织病理学检查ALI组1 d和4 d组中,释放出大量的炎性细胞,肝细胞出现大面积坏死,7 d组肝细胞坏死与1 d和4 d比较明显缓解;m RNA水平检测Pink1/Parkin在ALI 1 d(4.79/1.82倍)、4 d(1.74/4.17倍)和7 d(2.91/1.25倍)与对照组相比表达水平明显升高(P0.05);Pink1/Parkin在蛋白水平检测时ALI 1 d(2.03/1.82倍)、4 d(1.78/4.17倍)和7 d(1.25/1.25倍)时肝组织内表达也显著增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:急性肝损伤状态下Pink1/Parkin在m RNA和蛋白水平表达升高,且其表达量随着肝脏的损伤缓解而表达水平降低,提示Pink1/Parkin可能对于治疗急性肝损伤具有重要意义。     

两种急性免疫性肝损伤小鼠模型的对比研究

目的比较两种急性免疫性肝损伤小鼠模型的肝功能及淋巴因子变化特点和规律,为研究抗肝炎药物提供理想的动物模型。方法选用BCG＋LPS和Con-a建立两种免疫性肝损伤模型。以小鼠血清转氨酶水平变化及肝脏病理学检查作为肝损伤判断标准,以ELISA法测定血清中IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-r的变化。结果与正常对照组相比,两组模型ALT、AST的活性均显著升高（P〈0.01）;BCG＋LPS组IL-2、IFN-r、TNF-α的含量明显高于正常对照组（P〈0.01）,但IL-4、IL-10的含量无明显变化;Con-a组IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-r的含量均高于正常对照组（P〈0.01）。两组模型均出现严重的肝组织病理改变。结论Con-a建立的免疫性肝损伤模型更适用于防治免疫性肝损伤药物的筛选和研究。     

天麻素对镉诱导的星形胶质细胞损伤的保护效应

目的:探讨氯化镉(CdCl_2)和天麻素(GAS)对小鼠星形胶质细胞活力及神经营养因子GDNF和抗氧化基因Nrf2,HO-1,SOD-1表达的影响。方法:首先,给予体外培养的小鼠星形胶质细胞不同浓度的CdCl_2(Con,2.5μM,5μM,10μM,20μM)处理24 h或48 h,随后检测细胞活力筛选出造成星形胶质细胞损伤的CdCl_2浓度和时间。然后使用上述筛选的CdCl_2作用浓度(5μM)构建星形胶质细胞损伤的同时再给予不同浓度的天麻素(0,20μg/m L,30μg/m L,40μg/m L, 50μg/m L)处理24 h或48 h,随后检测细胞活力并提取细胞RNA检测其caspase3,GDNF(胶质源性神经营养因子Glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)和Nrf2(Nuclear factor erythroid2-related factor2),HO-1(Heme oxygenase 1),SOD-1(superoxide dismutase 1)等抗氧化基因的m RNA表达的变化。结果:(1) 2.5μM CdCl_2处理24 h后星形胶质细胞活力已经有明显下降(P0.05),5μM CdCl_2处理24 h后,星形胶质细胞活力显著下降(P0.01);(2) CdCl_2浓度越大,细胞损伤严重;(3)一定浓度的天麻素处理可以缓解CdCl_2造成的星形胶质损伤,恢复其细胞活力,下调caspase3 m RNA水平;(4) CdCl_2下调了星形胶质细胞的GDNF, Nrf2, HO-1和SOD-1的m RNA水平,天麻素可以抑制Cd Cl_2对上述基因的m RNA水平的调节作用,且浓度越高调节作用越强。结论:天麻素可能通过调节小鼠星形胶质细胞的GDNF, Nrf2, HO-1和SOD-1基因表达缓解CdCl_2导致的细胞损伤。