向日葵E3泛素连接酶基因克隆及表达分析

该研究从向日葵中克隆了E3泛素连接酶基因HERC2,并进行了生物信息学分析和不同胁迫条件的表达分析。序列分析表明,HERC2(登录号为KT832066)序列的CDS为1 608bp,编码535个氨基酸,预测其分子量131kD,等电点为5.03。HERC2编码的蛋白质为疏水性蛋白质,且为细胞质蛋白;亚细胞定位预测分析表明,向日葵HERC2可能定位在高尔基体中;该蛋白质有5个RCC1保守结构域。向日葵HERC2与已报道的其他植物同源蛋白有相似的保守区域,与醉蝶花亲缘关系最近,而与大豆和野生大豆的亲缘关系最远。与HERC2cDNA对应的gDNA(登录号为KT832067)的ORF长度为3 409bp,与cDNA编码序列比对结果表明,该gDNA由5个外显子和4个内含子组成。实时荧光定量PCR分析表明,向日葵HERC2基因表达受非生物胁迫调节,在不同器官及不同非生物胁迫下存在特异性表达差异。研究认为,HERC2基因应答逆境胁迫具有其特定的表达模式,研究结果为加强对HERC2的利用奠定了基础。     

E3泛素连接酶接头蛋白SPOP介导的底物非降解型泛素化修饰

蛋白质的翻译后修饰是保证其能正常行使功能的前提,泛素化修饰是维持细胞正常蛋白质水平和活性的重要翻译后修饰类型.近年来,大量研究发现,E3泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白(speckle-type POZ protein,SPOP)在诸多肿瘤与遗传疾病中存在突变,这些突变主要集中在识别底物的MATH结构域影响了与底物之间的结...     

向日葵E3泛素连接酶基因的分析定位和表达鉴定

该研究利用前期获得的向日葵耐盐相关基因E3泛素连接酶基因序列(HERC2),构建瞬时表达载体Cam-35S-HERC2-GFP,采用基因枪法转化洋葱表皮细胞进行亚细胞定位;采用RT-PCR技术,分析盐胁迫下HERC2在耐盐品种P50和盐敏感品种P29根、下胚轴和叶中的表达差异;构建HERC2植物表达载体pPZP221-HERC2,采用农杆菌介导法将HERC2导入烟草,进行耐盐功能验证。结果表明:(1)HERC2蛋白定位在细胞膜、细胞质和细胞核中。(2)受到NaCl胁迫后,HERC2基因在耐盐品种P50和盐敏感品种P29中均上调表达,但耐盐品种中的表达量较高。(3)HERC2基因的表达,能够提高转基因烟草的耐盐性。该研究结果为进一步解析向日葵对盐胁迫的响应机制,以及耐盐新品种的选育奠定了基础。     

SAG E3泛素连接酶:生物学功能、作用机理及其相关的人类疾病

凋亡敏感基因蛋白(Sensitive to Apoptosis Gene,SAG)是一种结构上进化保守的锌环指蛋白(zinc RING finger protein),1997年由该文笔者的实验室首次克隆,并于1999年发表。大量研究先后证实SAG不仅是一个具有抗氧化能力、可抑制金属离子或ROS诱导的细胞凋亡的蛋白,同时还是具有促癌作用的重要E3泛素连接酶,也是一个极富潜力的新型抗肿瘤靶点。SAG是泛素化和拟素化修饰的双重E3连接酶,通过介导Cullin-5蛋白的拟素化修饰参与形成CRL5或CRL1 E3泛素连接酶复合体,介导多种抑癌底物蛋白的泛素化降解,促进肿瘤细胞增生、存活、血管生成和肿瘤形成。此外,SAG还参与病毒的复制与合成,并与多种人类疾病相关。目前,靶向SAG的抗肿瘤小分子抑制剂正在研发中。该文回顾多年来在SAG的结构和功能方面的研究进展,综述SAG的生物学功能,重点阐述SAG促进肿瘤发生发展的功能和作用机理,并探讨和展望SAG的基础研究方向和以SAG为靶点的新型抗肿瘤药物的研发策略。     

泛素相关蛋白样因子2在肝癌中的表达及意义

目的:探讨肝癌中泛素相关蛋白样因子2(UBAP2L)的表达水平与预后的关系及其对肝癌细胞侵袭、转移能力的影响。方法:挖掘oncomine数据库,提取UBAP2L在肝癌与正常组织转录水平的变化及相关临床资料,采用Kaplan-Meier法分析UBAP2L表达水平与肝癌患者预后的关系。采用实时定量PCR、Western blot检测HCCLM3、MHCC97H、Hep3B、Huh7肝癌细胞株及正常肝细胞LO2中UBAP2L mRNA及蛋白水平,免疫组织化学染色法检测本院80例肝癌组织与癌旁组织中UBAP2L的表达水平加以验证。通过慢病毒载体使UBAP2L高表达的肝癌细胞株HCCLM3表达下调,采用克隆形成和划痕实验检测UBAP2L对肝癌细胞增殖能力和侵袭、转移的影响。结果:UBAP2L在oncomine数据库大多数队列呈高表达。UBAP2L在肝癌细胞株中的mRNA和蛋白的表达水平显著高于正常肝细胞(P0.05)。肝癌组织中UBAP2L阳性、强阳性表达率高于癌旁组织(P0.05),下调UBAP2L表达可明显抑制HCCLM3肝癌细胞的克隆形成能力和运动能力(P0.05)。UBAP2L高表达组的中位生存时间与UBAP2L低表达组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:UBAP2L在肝癌组织中呈高表达,下调UBAP2L表达可抑制肿瘤增殖和侵袭、转移表型,其可能成为肝癌早期诊断的生物标志物和治疗的潜在靶点。     

METTL3通过上调ING5抑制非小细胞肺癌细胞增殖

目的:探讨METTL3在非小细胞肺癌中的表达及作用,并探讨其可能的机制。方法:通过慢病毒转染,在HCC827细胞中过表达和敲除METTL3,并通过免疫印迹验证METTL3蛋白表达。免疫印迹检测HCC827细胞中生长抑制物家族成5(Methyltransferase Like 3,甲基转移酶3)调控ING5(Inhibitor Of Growth Family Member 5,METTL3)。使用基因表达交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)探究了METTL3和ING5在非小细胞肺癌组织和正常组织中的表达相关性。用CCK-8法检测METTL3和ING5表达对非小细胞肺癌细胞增殖的影响。使用KM-plotter验证METTL3、ING5的表达与非小细胞肺癌的总生存期(OS)、进展后生存期(PPS)和无进展生存期(PFS)之间的相关性。结果:免疫印迹结果显示,在HCC827细胞中METTL3过表达上调了ING5蛋白的表达,而METTL3表达下调了ING5蛋白的表达。GEPIA数据库分析显示METTL3在非小细胞肺癌中的表达明显低于正常组织(P<0.05)。CCK-8检测结果显示,与对照组相比METTL3缺失促进了HCC827细胞的增殖能力,而METTL3过表达显著抑制了HCC827细胞的增殖能力。此外,METTL3通过ING5调控非小细胞肺癌细胞的增殖能力。KM-plotter分析显示METTL3、ING5 m RNA的表达与非小细胞肺癌患者的生存有较好的预后关系。结论:METTL3在非小细胞肺癌低表达,并通过调控ING5的表达在非小细胞肺癌的发生进展中发挥重要地抑癌基因作用。     

线粒体分裂蛋白FIS1通过诱导上皮间质转化促进肝癌侵袭与迁移

目的:研究线粒体分裂蛋白1(Mitochondrial fission protein 1,FIS1)介导的线粒体分裂对肝癌细胞侵袭与迁移的调控作用与机制。方法:采用免疫组化实验比较10对肝癌原发灶与转移灶组织中FIS1表达,以明确FIS1与肝癌转移的关系。通过si RNA干扰FIS1的表达后,用Transwell实验检测肝癌细胞迁移与侵袭能力的变化,q PCR与Western Blot检测上皮间质转化标志分子上皮型钙黏蛋白(epithelia cadherin,E-cadherin)、紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、神经型钙黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)、波形蛋白Vimentin的表达。结果:肝癌转移灶组织中FIS1的表达显著高于原发灶组织。干扰FIS1表达后,肝癌细胞迁移和侵袭能力均明显下降,细胞上皮间质转化标志蛋白E-cadherin和ZO-1的表达上调,而N-cadherin和Vimentin的表达下调。结论:线粒体分裂蛋白FIS1在肝癌转移灶组织中高表达,并可能通过调节细胞上皮间质转化促进肝癌细胞转移。     

B4GALT3促进肝癌细胞增殖和侵袭

β-1,4-半乳糖基转移酶III（β-1,4-galactosyltransferase III,B4GALT3）在肿瘤的作用正受到关注,但其在肝癌中的表达模式及其作用有待阐明。基于TCGA肿瘤组织数据库和GTEx正常组织数据库进行的生物信息学分析,发现相比于人正常肝组织,B4GALT3在人肝癌组织中的表达显著上调。实时荧光定量PCR结果发现肝癌细胞中B4GALT3的mRNA和Western 印迹检测蛋白质表达水平显著上调。其中肝癌细胞SMMC7721中B4GALT3的mRNA表达水平是正常肝细胞L-02的9.85倍。对TCGA数据库进行分析发现,B4GALT3表达水平与肝癌患者的生存率呈负相关。在内源性高表达B4GALT3的SMMC7721肝癌细胞中,干扰B4GALT3表达,可显著抑制该细胞的增殖能力和侵袭能力。干扰B4GALT3表达能显著上调SMMC7721细胞中p27和E-cadherin的蛋白质表达水平,干扰B4GALT3表达后SMMC7721细胞中,p27和E-cadherin的mRNA水平较对照组上调6.15倍和7.83倍。总之,B4GALT3在肝癌中表达上调,且促进肝癌细胞的增殖和侵袭。     

过表达TIMP3对肝癌细胞生物功能的影响

组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)在肝癌中的具体作用机制尚不明确。该文探讨了TIMP3在肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响。通过q RT-PCR和Western blot检测肝癌细胞株(97H、97L和HUH7)和人正常肝细胞(LO2)中TIMP3的表达情况。将过表达TIMP3的质粒转染进97H和HUH7细胞,利用q RT-PCR和Western blot检测转染后细胞的TIMP3表达情况。通过MTT实验和活细胞工作站检测过表达TIMP3对肝癌细胞增殖的影响。此外,通过流式细胞术检测过表达TIMP3对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响,通过划痕实验检测表达TIMP3对肝癌细胞迁移的影响。最后,利用GESA软件进行基因富集分析以及Int Act数据库构建相互作用蛋白网络图对TIMP3相关生物学功能进行探索。研究结果表明, 97H、97L和HUH7细胞中TIMP3的表达比LO2细胞中低。97H和HUH7细胞转染TIMP3质粒后RNA及蛋白水平明显升高,且过表达TIMP3可以促进细胞增殖,促进G1期向S期转化,抑制细胞凋亡,下调Bax的表达,上调Bcl-2、Bcl-xl的...     

成纤维细胞生长因子23在胃癌中的表达及作用研究

目的:探讨成纤维细胞生长因子23(Fibroblast growth factor 23, FGF23)在胃癌中的表达,并研究其对胃癌细胞增殖和侵袭的作用。方法:收集2014年7月-2017年12月来我院手术治疗的胃癌患者,免疫组化检测FGF-23和Ki-67的表达;采用Transwell小室进行胃癌细胞侵袭实验;MTT实验检测胃癌细胞的增殖情况。结果:免疫组化的结果显示胃癌组FGF-23的平均光密度是477.5,对照组为46.65(t=10.53,P0.0001),相关性分析的结果显示胃癌组织中FGF-23与Ki-67增殖指数具有正相关性(r=0.6489,P=0.0020);Transwell侵袭实验的结果显示低浓度的FGF-23具有一定的促进胃细胞侵袭的作用,高浓度的FGF-23能够显著的促进胃癌细胞侵袭,相对于对照组和低浓度组,侵袭的细胞数目分别上升了2.19倍和74.77%,结果差异明显(t=16.24,P0.0001;t=9.811,P0.0001);MTT实验的结果显示低浓度的FGF-23具有一定的促进胃细胞增殖的作用,高浓度的FGF-23能够显著的促进胃癌细胞增殖,相对于对照组和低浓度组,吸光度分别上升了1.70倍和37.37%倍,结果差异明显(t=13.81,P0.0001;t=4.227,P=0.0018)。结论:我们的研究发现FGF-23在胃癌组织中高表达,其能促进胃癌细胞的增殖和侵袭,我们的研究为胃癌的诊断和精准治疗提供了一个新的靶点。     

过表达miR-455促进肝癌细胞诱导的管型形成

目的:构建miR-455前体的真核表达载体,探讨其对肝癌细胞诱导管型形成的影响。方法:采用PCR扩增miR-455前体序列,通过双酶切将其连接到真核表达载体pcDNA3中。连接产物转化入大肠杆菌内进行扩增,采用菌落PCR、双酶切和测序鉴定重组子。将构建的质粒转染SMMC-7721细胞,通过real-time PCR检测成熟miR-455的表达,采用ELISA方法检测培养液上清中VEGF的表达。用该上清处理人脐静脉内皮细胞HUVEC后,检测管型形成的情况。结果:本实验成功构建了miR-455前体的真核表达载体,将其瞬时转染SMMC-7721细胞后,real-time PCR检测结果显示miR-455表达水平显著升高(P0.01)。过表达miR-455后,SMMC-7721细胞上清VEGF表达水平呈时间依赖性升高(24 h P0.05,48 h和72 h P0.01)。人脐静脉内皮细胞分别用转染pcDNA3和pcDNA3-pre-455的肝癌细胞培养液上清(72 h)重悬,接种于基质胶Matrigel上,转染pcDNA3-pre-455组形成典型的微管,管样结构明显完整。结论:过表达miR-455可促进肝癌细胞诱导的微管形成。     

数字减影血管造影引导下肝动脉化疗栓塞对肝癌患者肝功能、细胞免疫功能及肿瘤标志物的影响

摘要 目的：探讨数字减影血管造影（DSA）引导下肝动脉化疗栓塞（TACE）对肝癌患者肝功能、细胞免疫功能及肿瘤标志物的影响。方法：随机选取2021年1月～2022年1月来我院就诊的行DSA引导下TACE化疗的肝癌患者50例为研究组,另随机选取同期行常规治疗的肝癌患者50例为对照组,对比两组临床总有效率、肝功能、细胞免疫功能及肿瘤标志物和不良反应情况。结果：研究组的临床总有效率为56.00%（28/50）高于对照组的34.00%（17/50）,差异有统计学意义（P<0.05）。两组治疗结束后谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。两组治疗结束后CD8⁺升高,但研究组低于对照组（P<0.05）;CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、CD3⁺均下降,但研究组高于对照组（P<0.05）。两组治疗结束后甲胎蛋白（AFP）、糖链抗原（CA）242、CA724、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）下降,且研究组低于对照组（P<0.05）。对照组（30.00%）、研究组（24.00%）的不良反应发生率组间对比无差异（P>0.05）。结论：DSA引导下TACE化疗治疗肝癌患者,疗效可靠,可有效阻止疾病进展,同时减轻化疗所致的肝损伤和细胞免疫功能损伤。     

二甲双胍在II型糖尿病合并肝癌中的研究进展

多年来二甲双胍以其安全性高、价格低及疗效好的优点而广泛应用于临床治疗糖尿病。糖尿病增加了肝癌的罹患率并影响其预后。近年来研究发现二甲双胍在治疗Ⅱ型糖尿病(T2MD)患者时亦降低了其罹患肝癌的风险,大量研究证明其具有抗癌及协同抗癌作用。现本文对二甲双胍在Ⅱ型糖尿病患者中对肝癌发生的影响进行探讨,对二甲双胍抑制肿瘤的分子生物学机制进行了介绍,列举了最新的实验研究数据,并对现有临床数据进行分析,对于二甲双胍未来的研究方向提出了预期,对于二甲双胍未来在Ⅱ型糖尿病患者中肝癌的预防作用进行了简要的总结及未来使用的展望,对于其在Ⅱ型糖尿病合并肝癌的患者中的治疗作用进行了前瞻性的探讨,为二甲双胍在其他癌症防治中的应用提出了可能性。     

miR-93-5p通过靶向CDKN1A促进多囊卵巢综合征颗粒样瘤细胞KGN的生长增殖

目的:验证CDKN1A是miR-93-5p直接调控的靶基因,阐明miR-93-5p可通过靶向CDKN1A促进人卵巢颗粒样肿瘤细胞系KGN的生长增殖.方法:选取我院2016年6月-2019年6月期间确诊的40例多囊卵巢综合征(PCOS)患者作为研究对象,qRT-PCR检测PCOS病变卵巢组织和病灶旁正常卵巢组织(对照)中...     

5-FU inhibits migration and invasion of CRC cells through PI3K/AKT pathway regulated by MARCH1

Colorectal cancer is a major health problem with a significant impact on the patients' quality of life. 5-Fluorouracil is the most common chemotherapy drug used for this type of cancer. While its molecular mechanism is the inhibition of DNA synthesis via the inhibition of thymine nucleotide synthetase, its complete anticancer mechanism is not clear. Membrane-associated RING-CH-1 (MARCH1) is an E3 ubiquitin ligase that plays an important role in antigen presentation. However, MARCH1 has not been studied in the context of colorectal cancer. In this study, we demonstrated that MARCH1 is highly expressed in colorectal cancer tissues and cell lines. Furthermore, migration and invasion of colorectal tumor cells were inhibited via transfection with small interfering RNAs to suppress the expression of MARCH1. The western blot analysis showed that MARCH1 regulates epithelial–mesenchymal transition and the PI3K/AKT pathway. Moreover, 5-fluorouracil inhibited the proliferation, migration, and invasion of tumor cells, via the targeting of MARCH1 and the consequent downregulation of the PI3K/AKT pathway, impacting the progression of epithelial–mesenchymal transition. In conclusion, our study shows that MARCH1 may play a role as an oncogene in colorectal cancer and may represent a new target molecule of 5-fluorouracil.     

MARCH5 RNA promotes autophagy,migration, and invasion of ovarian cancer cells

MARCH5 is a crucial regulator of mitochondrial fission. However, the expression and function of MARCH5 in ovarian cancer have not been determined. This study investigated the expression and function of MARCH5 in ovarian cancer with respect to its potential role in the tumorigenesis of the disease as well as its usefulness as an early diagnostic marker. We found that the expression of MARCH5 was substantially upregulated in ovarian cancer tissue in comparison with the normal control. Silencing MARCH5 in SKOV3 cells decreased TGFB1-induced cell macroautophagy/autophagy, migration, and invasion in vitro and in vivo, whereas the ectopic expression of MARCH5 in A2780 cells had the opposite effect. Mechanistic investigations revealed that MARCH5 RNA may function as a competing endogenous RNA (ceRNA) to regulate the expression of SMAD2 and ATG5 by competing for MIR30A. Knocking down SMAD2 or ATG5 can block the effect of MARCH5 in A2780 cells. Also, silencing the expression of MARCH5 in SKOV3 cells can inhibit the TGFB1-SMAD2/3 pathway. In contrast, the ectopic expression of MARCH5 in A2780 cells can activate the TGFB1-SMAD2/3 pathway. In turn, the TGFB1-SMAD2/3 pathway can regulate MARCH5 and ATG5 through MIR30A. Overall, the results of this study identified MARCH5 as a candidate oncogene in ovarian cancer and a potential target for ovarian cancer therapy.     

血清CD5L对肝脏疾病患者的临床意义研究

摘要 目的：检测CD5L水平在肝脏疾病患者血清中的变化,并分析其临床意义。方法：采用ELISA法检测41例慢性肝炎患者、192例肝硬化患者、69例肝癌患者和136例健康对照血清CD5L水平。全自动生化分析仪测定肝功能指标,Spearman相关性分析用于评估CD5L与肝功能指标的关系。受试者工作曲线（receiver operator characteristic, ROC）分析血清CD5L的潜在诊断价值。结果：与健康对照相比,CD5L水平在肝炎、肝硬化、肝癌患者中显著降低（P<0.01）。肝硬化患者血清CD5L水平较肝炎及肝癌患者显著降低（P<0.01）。肝硬化代偿期和失代偿期患者血清CD5L水平无显著差异。血清CD5L水平与FIB-4指数(肝纤维化评分)呈显著负相关（r=-0.2688,P=0.0001）。Spearman相关性分析结果显示：在肝炎患者中,血清CD5L与总胆红素（T-BIL）、直接胆红素（D-BIL）、间接胆红素（I-BIL）显著正相关;在肝硬化患者中,CD5L与其他肝功指标无显著相关性;在肝癌患者中,CD5L与碱性磷酸酶（ALP）显著正相关。以健康人为对照组,肝硬化患者为病例组,ROC分析显示血清CD5L的诊断特异性为85.3%,敏感性为77.1%。结论：CD5L水平在肝炎、肝硬化及肝癌患者血清中显著降低,且在肝硬化患者中最低。CD5L水平与肝纤维化评分FIB-4指数负相关,可作为监测肝纤维化进展的潜在生物标志物。     

双模态纳米诊疗一体药物在肝癌动物模型中的应用

摘要 目的：构建一种肿瘤诊断和治疗一体化药物,并利用肝癌动物模型开展诊疗效能评价。方法：利用多孔金属有机骨架材料ZIF-8,通过配位作用同时对化疗药物阿霉素（DOX）和近红外荧光染料IR-820进行负载。而后,利用超声的方法在ZIF-8-IR-820-DOX表面修饰了红细胞膜以提高载药体系的生物安全性和稳定性,得到具有生物伪装特性的pH响应型ZIF-8-IR-820-DOX@RM纳米颗粒。最后,通过对该药物体系的粒径、表面电位、形貌等理化性质进行表征,并利用肝癌动物模型验证该药物的诊断和治疗效能。结果：成功构建了一款红细胞伪装的金属框架纳米诊疗一体试剂,该试剂具有较好的pH相应性,在肿瘤pH 5.5 条件下,药物的释放率达到98.4 %,而在机体正常pH 7.4条件下,释放率仅为15.3 %。在小鼠肝癌动物模型的诊疗过程中,能通过近红外荧光较好的识别肿瘤的位置和大小,且对小鼠肿瘤具有较好的治疗效果。结论：本研究所构建的ZIF-8-IR-820-DOX @RM能通过肿瘤处增强的渗透性和保留（EPR）效应,精准的到达肿瘤部位,并利用pH响应性,在肿瘤酸性环境中精准释放携带的抗肿瘤药物和近红外荧光成像试剂,实现对肿瘤的诊断和治疗一体化设计。为肿瘤治疗的相关研究提供了一种思路和借鉴。