慈菇（Sagittaria safittifolia）α－半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶、α－和β－半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示１条蛋白质带,在α－半乳糖苷酶浓度为１５０ｍＵ／ｍｌ的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α－半乳糖苷酶的分子量用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱测定或在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测定均为６０ｋＤ,酶反应的最适ｐＨ在５．８附近,最适温度为６０℃。该酶分解对硝基苯基－α－半乳糖苷的Ｋ＿ｍ值为３．７×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖ＿ｍ值为２．１×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ。银离子、汞离子显著抑制酶活力,Ｄ－半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α－Ｄ－半乳糖苷的活力,根据Ｄｉｘｏｎ作图求得其Ｋ＿ｉ值分别为０．９２×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ和１．９８×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ。２－脱氧－Ｄ－半乳糖和Ｌ－岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ５２等层析步,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂,纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α—半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶,α－和β－半乳糖苷酶活力较高,经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶,纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示了１条蛋白质带,在     

人胃腺苷脱氨酶的分离纯化及性质研究

用硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析、免疫亲和层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶柱层析从人胃组织中提取出腺苷脱氨酶。酶纯化１９３２４倍,比活力为５７９７Ｕ／ｍｇ蛋白。提取酶液经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦只呈现一条区带。测得该酶的分子量为４１．２ｋＤ,等电点为ｐＨ４．８,氨基酸组成分析表明该酶由３８８个氨基酸残基组成,Ｎ端氨基酸为精氨酸。酶的最适ｐＨ为６．５,ｐＨ小于５．０或大     

人胃腺苷脱氨酶的分离纯化及性质研究

用硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析、免疫亲和层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶柱层析从人胃组织中提取出腺苷脱氨酶,酶纯化１９３２４倍,比活力为５７９７Ｕ／ｍｇ蛋白．提取酶液经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦只呈现一条区带。测得该酶的分子量为４１．２ｋＤ,等电点为ｐＨ４．８．氨基酸组成分析表明该酶由３８８个氨基酸残基组成,Ｎ端氨基酸为精氨酸。酶的最适ｐＨ为６．５,ｐＨ小于５．０或大于９．０时不稳定;最适温度为３７℃,对热不太稳定,以腺苷及２－脱氧腺苷作为底物,其Ｋｍ分别为８７μｍｏｌ／Ｌ和４１μｍｏｌ／Ｌ。     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ５２等层析步骤,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂。纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍ值为１．２４×１０４ｍｏｌ／Ｌ。此外还探讨了部分金属离子对该酶的影响。     

菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质

利用硫酸铵分级沉淀,Ｓｅｐｈｅｄｅｘ Ｇ－５０凝胶柱层析,ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｑ和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了ＥＰＳＰ合成酶。该酶被纯化２９６１．６倍,比活性达到６２１９．４ｎｍｏｌｍｇ＾－１蛋白ｍｉｎ＾－１。该酶分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为５１ｋＤ,等电点为ｐＨ５．７,酶促反应最适ｐＨ７．５,最适温度４５℃。６．２μｍｏｌ／Ｌ的除草剂草甘膦能抑制ＥＰＳＰ合成酶活性的５０％。     

番茄感染TMV诱导的β—1,3—葡聚糖酶的纯化和性质

番茄系统感染ＴＭＶ诱导叶胞外β－１,３－葡聚糖酶活性升高,番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析和ＰＢＥ９４聚焦层析纯化,获得ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶,测得该酶的分子量为２２ｋＤ;以昆布多糖为底物,该酶的最适ｐＨ５．４,最适温度３０－４０℃;Ｋｍｔ Ｖｍａｘ值分别为５．６４ｍｇ／ｍｌ和０．３２８ｎｍｏｌ／ｓ。在感染     

重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶的性质

以特异性底物和多态的对大肠杆菌表达的重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶（简称ａｐＰＥＰ）催化性质的研究表明,ａｐＰＥＰ在４～３２℃比较稳定,最适催化温度为３４℃;在ｐＨ６～１０比较稳定,最适ｐＨ为８．４;ａｐＰＥＰ的比活力为６７．６ｕ／ｍｇ。对Ｚ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－βＮＡ底物的酶解常数Ｋｍ为０．０３ｍｍｏｌ／Ｌ。一些蛋白酶抑制剂和金属离子的抑制作用结果表明,ａｐＰＥＰ不受ＰＭＳＦ、ＴＬＣＫ、ＴＰＣＫ、胰     

大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶基因的诱导高表达

在高表达大肠杆菌精氨酰ｔＲＮＡ合成酶基因５５０倍的基础上,将ａｒｇ２的编码起始位点经基因突点突变导入ＮｃｏＩ限制性内切酶的位点后,重组到受异丙基硫代－β－Ｄ半乳糖苷诱导的ｐＴｒ９９Ｂ质粒上,使ａｒｇＳ比受体菌表达高近２０００倍。通过一步ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析则可得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ一条带的ＡｒｇＲＳ,比活为１５０００ｕ／ｍｇ,与文献相同。     

豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析和Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ－６０凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶（ｓｏｙｂｅａｎｈｕｌｐｅｒ－ｏｘｉｄａｓｅ,ＳｈＰ）．纯化酶的比活力为７０７７Ｕ／ｍｇ,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出一条蛋白质带．ＳｈＰ分子量为３８０００,等电点为３．９;ＳｈＰ为一含血红素的糖蛋白,含糖量为１８．７％,光谱学分析揭示,在４０６ｎｍ处有一典型的Ｓｏｒｅｔ带,在５１０ｎｍ和６４０ｎｍ处有特征吸收峰．酶反应的最适ｐＨ在４．０附近,最适温度为４５℃;在ｐＨ２．５～１２．０之间较稳定,７５℃,保温６０ｍｉｎ,酶活力残余６８％,ＳｈＰ是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶．动力学分析求得ＳｈＰ的表观Ｋｍ（愈创木酚）为１．６２ｍｍｏｌ／Ｌ,表现Ｋｍ（Ｈ２Ｏ２）为０．３４ｍｍｏｌ／Ｌ．在所测定的化学试剂中,Ｎ－３、ＣＮ－、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋和Ｓｎ２＋对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｒ３＋以及ＳＤＳ和ＥＤＴＡ对酶活力无显著影响     

高活力纤维素酶菌株康氏木霉B—7的选育与产酶条件的研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ＿２分别经物理化学诱变因子,ＴＤＰ辐射器和空间微重力辐射等因素的多级处理,得到１株形态发生明显改变的变异株Ｂ—７,其固体培养物的纤维素酶各组分酶活力,如滤纸糖酶活力（ＦＰＡ）为３４ｕ／ｇ,羧甲基纤维素酶活力（ＣＭＣ—ａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ,β－葡萄糖苷酶活力（β－Ｇｌａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ,与８５４－β２相比,分别提高５．９倍,７．６倍和４．２倍。其固体培养的最佳条件是：ｐＨ６．０,２８～３０℃,９６小时,最适培养基成分为：青草粉：麸皮＝７：３,１．５～２．０倍水和（ＮＨ４）２ＳＯ４１．５～２．０％（均以固体料计）。     

青霉胞外菊粉酶的纯化和性质研究

青霉菌（ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＳＰ．９１－４）产生的胞外菊粉酶（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｕｌｉｎａｓｅ）粗酶液,经硫酸铵沉淀,超滤浓缩,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换柱层析等步骤,得到提纯３０倍的酶Ｅ。酶Ｅ反应时最适ｐＨ４．５,最适温度为５０℃,在ｐＨ４．７～７．６范围内,温度５０℃以下酶Ｅ活性稳定;其活性受Ａｇ＾＋,Ｃｕ＾２＋ＰＣＭＢ强烈抑制。采用     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最适温度为４０℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其Ｋ_ｍ值为１．７２×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ~（２＋）、Ｍｎ~（２＋）为该酶的激活剂,ＫＨ_２ＰＯ_４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ_２为抑制剂。选用ＫＨ_２ＰＯ_４和ＤＦＰ作抑制类型的判断,结果表明,ＫＨ_２ＰＯ_４属竞争性掏剂,其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ;ＤＦＰ为非竞争性抑制剂,抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

背角无齿蚌碱性碳酸酶的分离、纯化及其动力学研究

作者对背角无齿蚌外套膜的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）进行了分离纯化,并对其动力学性质进行了初步研究。外套膜匀浆,经正丁醇抽提、盐析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１００凝胶过滤等步骤,得到了比活力为１４９．６单位／ｍｇ蛋白的酶制品。通过动力学方法测得其最适ｐＨ值为９．５,最适温度为４０℃,以磷酸苯二钠作底物的Ｋｍ值为０．５７ｍｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、ＫＨ２ＰＯ４、ＥＤＴＡ和巯基乙醇有抑制作用。     

背角无齿蚌碱性磷酸酶的分离,纯化及其动力学研究

作者对背角无齿蚌外套膜的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）进行了分离纯化,并对其动力学性质进行了初步研究,外套膜匀浆,经正丁醇抽提,盐析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤等步骤,得到了比活力主国１４９．６单位／ｍｇ蛋白的酶制品,通过动力学方法测得其最适ｐＨ值为９．５,最适温度为４０℃,以磷酸苯二钠作底物的Ｋｍ值为０．５７ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ＾２＋,Ｃａ＾２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ＾２＋,Ｚｎ＾２＋,ＫＨ２ＰＯ４     

番茄叶片胞外β－半乳糖苷酶的纯化和性质

健康或系统感染ＴＭＶ的番茄叶片胞外都存在高比活可溶性β－半乳糖苷酶。系统感染ＴＭＶ的番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５阳离子交换层析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶层析纯化．获得ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的β－半乳糖苷酶。该酶的分子量为７４ｋＤ．酶蛋白带能被过碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂染成桃红色,属糖蛋白。β－半乳精苷酶无论在健康或系统感染ＴＭＶ的番茄叶中,均为主要的胞外蛋白组分之一。     

系统感染TMV的番茄叶胞外β-1,3-葡聚糖酶

系统感染ＴＭＶ （ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）叶胞外蛋白提取液经冰冻干燥浓缩、－ ２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５凝胶层析纯化,获得ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明,它包含分子量为３６ ｋＤ 和２７ ｋＤ的两个同工酶．以昆布多糖为底物,酶的最适ｐＨ 在４．８—５．２之间,在ｐＨ ４—８稳定;酶的最适温度在３０—４０℃之间,在４０℃保温１ｈ 后酶活性不变;Ｋｍ 值为９．２ ｍ ｇ／ｍ Ｌ．在系统感染ＴＭＶ 的番茄叶胞外蛋白提取液中,有分子量为２２ ｋＤ、２７ ｋＤ和３６ ｋＤ的３个β－１,３－葡聚糖酶同工酶     

用国产微孔玻璃珠初步纯化人u-PA

用国产微孔玻璃珠从ＣＤ－１工程细胞株培养上清中纯化ｕ－ＰＡ,摸索了微孔玻璃珠结合ｕ－ＰＡ的条件和洗脱方法,比较了硫酸铵线性梯度洗脱或２５％乙二醇洗脱ｕ－ＰＡ活性的结果,最后确定洗脱的条件为０．２５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ、１～２ｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ９．３。经此一步纯化,ｕ－ＰＡ比活性达到１５３２９ＩＵ／ｍｇ,回收率７８％,还原条件下ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分子量为５２×１０３的单链ｕ－ＰＡ占７４％。     

链霉菌Z94-2碱性脂肪酶产生条件及酶学性质

在１５２ 株脂肪酶产生菌中,链霉菌Ｚ９４２ 产脂肪酶活力为５９６ｕ／ ｍＬ,其最适培养基（ｇ／Ｌ） 为：糊精１０ 、黄豆饼粉３０ 、尿素１０ 、Ｋ２ＨＰＯ４ ０－５ 、ＭｇＳＯ４ ０－５ 、ＮａＣｌ １ 和ＡＥＯ９ ０ ．５ ,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９ ．５ ～１０－０ ,在２６ ℃培养４８ｈ 。用ＰＶＡ 橄榄油乳化系统测定该酶的最适ｐＨ９ ．８ ,最适温度３７ ℃,在ｐＨ８－６ ～１０－２ 于５ ℃存放２４ ｈ ,酶活力不变。０－１４ｍｏｌ／Ｌ 的氯化钙有较大的激活作用。